CIRP的功能与用途的制作方法

本发明属于医疗技术领域，具体涉及cirp的功能与用途。

背景技术：

神经胶质瘤是成人中枢神经系统中最常见的原发性肿瘤，目前仍缺乏有效的治疗手段，而客观、有效的诊断标准的缺乏是限制胶质瘤研究的根本原因。目前医学界普遍采用的胶质瘤分类诊断准则(2007年世界卫生组织标准)在很大程度上基于形态学指标。根据与星形或寡突胶质细胞在形态学上的相似性，神经胶质瘤被分为星形或寡突胶质细胞瘤，并在此框架下，根据肿瘤细胞的形态学异质性、增殖和组织坏死程度及血管生成的程度等，又分为i至iv级恶性级别。该分型系统不但未能揭示肿瘤发生发展的生物学本质，且主观性强，不一致性高达40％。

近年来，科学界致力于寻找基于分子表达的分型方案，根据神经胶质瘤分子特征和基因表达来进行针对性的防治，以期指导胶质瘤的研究和治疗。手术治疗、放射治疗及化学治疗等手段不断发展，神经影像学及胶质瘤的治疗均取得了一定进展，但胶质瘤的预后远不能使人满意。其主要原因在于胶质瘤是一类分子生物学高度异质性的疾病，目前临床常用的病理分析方法不能完全准确的对其进行分型。因此，在胶质瘤发病机理研究取得进展的同时，有研究者设想可以通过检测胶质瘤发生、发展和复发过程中细胞及特定基因表达水平的变化，来对胶质瘤进行分类和分级，并以此评估胶质瘤的预后及预测治疗的敏感性。大量的研究显示，胶质瘤的分子生物学标志与临床试验结合，能更好地指导针对不同病人的个体化治疗，从而提高胶质瘤的诊断水平并改善患者预后。

然而目前，有关胶质瘤发生、发展的机制，尤其是演变过程中的基因表达变化仍知之甚少，尚无一种分子指标可以准确区分胶质瘤亚型或判断预后。大量的研究表明，只有在充分认识胶质瘤分子病理的基础上才有可能准确地开展胶质瘤分子分类。因此有必要深入的探索新的基因功能改变与胶质瘤恶性特征的关系，揭示胶质瘤发生发展的精确分子机制，力求能准确判断各种基因表达的关系及其对预后的影响，进而能够发现新的治疗方案。

技术实现要素：

为了克服现有技术中所存在的问题，本发明的目的在于提供cirp的功能与用途。

为了实现上述目的以及其他相关目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面，提供cirp上调剂在制备胶质瘤治疗药物中的用途。

进一步地，所述胶质瘤的药物至少具有以下功用之一：抑制胶质瘤细胞增殖能力、抑制胶质瘤细胞侵袭力、抑制胶质瘤细胞黏附力、抑制胶质瘤细胞迁移力、抑制胶质瘤细胞成瘤能力。

进一步地，所述cirp上调剂是指提高cirp水平的物质。

具体的，所述提高cirp水平可以采用各种化学、物理、生物的方法。包括但不限于：

(1)调节cirp代谢通路以提高cirp表达水平；

(2)于细胞内直接增加cirp水平。

可将cirp或cirp模拟物送入细胞内直接增加细胞内cirp水平。

调节cirp代谢通路可以是采用cirp激动剂来提高cirp的活性或促进cirp转录或表达，从而上调cirp水平。

本发明实施例已证实通过直接上调细胞内cirp水平可抑制胶质瘤细胞增殖能力、抑制胶质瘤细胞侵袭力、抑制胶质瘤细胞黏附力、抑制胶质瘤细胞迁移力、抑制胶质瘤细胞成瘤能力，从而治疗胶质瘤。而基于现有技术可知，前述调节cirp代谢通路的方法可上调cirp水平。由此可推知，前述调节cirp代谢通路的方法亦可获得治疗胶质瘤的效果，进而认为这些方法亦可治疗胶质瘤。

因此，cirp上调剂可以是cirp、cirp模拟物或cirp激动剂。

如本发明一些实施方式所例举的，cirp上调剂为cirp蛋白或者cirp高表达载体。

所述cirp蛋白可以是利用生物工程原理获得。

所述cirp高表达载体是指含有cirp编码基因的表达载体。

例如，所述cirp编码基因信息可详见ncbireferencesequence:nm_001280.2。cirp编码基因的序列可以如seqidno.1所示。

所述胶质瘤治疗药物必然包括cirp上调剂，并以cirp上调剂作为前述功用的有效成分。

所述胶质瘤治疗药物中，发挥前述功用的有效成分可仅为cirp上调剂，亦可包含其他可起到类似功用的分子。

亦即，cirp上调剂为所述胶质瘤治疗药物的唯一有效成分或有效成分之一。

所述胶质瘤治疗药物可以为单成分物质，亦可为多成分物质。

所述胶质瘤治疗药物的形式无特殊限制，可以为固体、液体、凝胶、半流质、气雾等各种物质形式。

所述胶质瘤治疗药物主要针对的对象为哺乳动物，如啮齿类动物、灵长类动物等。

本发明的第二方面，提供了一种治疗胶质瘤的方法，为向对象施用cirp上调剂。

所述对象可以为哺乳动物。所述哺乳动物优选为啮齿目动物、偶蹄目动物、奇蹄目动物、兔形目动物、灵长目动物等。所述灵长目动物优选为猴、猿或人。

所述对象可以是罹患胶质瘤的患者或者期待预防或缓解胶质瘤的个体。

cirp上调剂可以在接受胶质瘤治疗前、中、后向对象施用。

本发明的第三方面，提供一种胶质瘤治疗药物，包括有效剂量的cirp上调剂。

进一步地，所述胶质瘤治疗药物，包括有效剂量的cirp上调剂及药用载体。

所述胶质瘤治疗药物必然包括cirp上调剂，并以cirp上调剂作为前述功用的有效成分。

所述胶质瘤治疗药物中，发挥前述功用的有效成分可仅为cirp上调剂，亦可包含其他可起到类似功用的分子。

亦即，cirp上调剂为所述胶质瘤治疗药物的唯一有效成分或有效成分之一。

所述胶质瘤治疗药物可以为单成分物质，亦可为多成分物质。

所述胶质瘤治疗药物的形式无特殊限制，可以为固体、液体、凝胶、半流质、气雾等各种物质形式。

所述胶质瘤治疗药物主要针对的对象为哺乳动物，如啮齿类动物、灵长类动物等。

本发明的第四方面，提供一种胶质瘤联合治疗药物组合，包括有效剂量的cirp上调剂和至少一种其他胶质瘤治疗药物。

所述联合治疗药物组合可以是以下形式中的任意一种：

一)将cirp上调剂和其他胶质瘤治疗药物分别制成独立的制剂，制剂的剂型可相同或不同，给药途径亦可相同或不同。

当其他胶质瘤治疗药物为抗体时，一般采用胃肠外给药型。当其他胶质瘤治疗药物为化学药物时，给药形式可以比较丰富，可以是胃肠道给药亦可以是非胃肠道给药。一般推荐针对各化学药物的已知给药途径给药。

二)将cirp上调剂和其他胶质瘤治疗药物配置成复方制剂，在将cirp上调剂和其他胶质瘤治疗药物采用相同给药途径给药并同时施加时，可采用将两者配置成复方制剂的形式。

本发明的第五方面，提供了一种治疗胶质瘤的方法，为向对象施用有效量的cirp上调剂以及向对象施用有效量的其他胶质瘤治疗药物和/或向对象实施其他胶质瘤治疗手段。

可以同步地或顺序地给予有效量的cirp上调剂和至少一种有效量的其他胶质瘤治疗药物。

基于cirp为本发明首次发现的胶质瘤治疗靶点，在与cirp上调剂以外的其他胶质瘤治疗药物联合用药中，至少可以起到疗效相加的效果，进一步增强对于胶质瘤的治疗效果。

其他胶质瘤治疗药物包括但不限制于：抗体药物、化学药物或靶向型药物等。

所述cirp上调剂可以是胃肠道给药或者胃肠外给药。所述其他胶质瘤治疗药物可以胃肠道给药或者胃肠外给药。

本发明的第六方面，提供cirp上调剂在制备具有以下任一项或多项作用的药物中的用途：抑制胶质瘤细胞增殖能力、抑制胶质瘤细胞侵袭力、抑制胶质瘤细胞黏附力、抑制胶质瘤细胞迁移力、抑制胶质瘤细胞成瘤能力。

本发明的第七方面，提供cirp用于筛选胶质瘤治疗药物的用途。

cirp用于筛选胶质瘤治疗药物具体是指将cirp作为作用靶标应用于筛选胶质瘤治疗药物。

将cirp作为作用靶标应用于筛选胶质瘤治疗药物具体是指将cirp作为作用对象，对候选物质进行筛选，以找到可以提高cirp表达的物质作为备选的胶质瘤治疗药物。

本发明的第八方面，提供一种筛选胶质瘤治疗的药物的方法，所述方法包括：

(1)用候选物质处理表达cirp的体系；和

(2)检测所述体系中cirp的表达；

其中，若所述候选物质可提高cirp的表达，则表明该候选物质是治疗胶质瘤的潜在物质。

本发明的第九方面，cirp作为生物标志物用于制备或筛选胶质瘤诊断试剂的用途。

所述胶质瘤诊断试剂可对胶质瘤进行分级。

cirp作为生物标志物用于制备或筛选胶质瘤诊断试剂，包括两方面的内容：

其一，cirp作为生物标志物用于制备胶质瘤诊断试剂，是指将cirp作为胶质瘤诊断指标应用于胶质瘤诊断试剂的制备。在一些实施方式中，可将cirp作为标准品或阳性对照，用于cirp水平的检测。

其二，cirp作为生物标志物用于筛选胶质瘤诊断试剂，是指将cirp作为胶质瘤识别靶标筛选特异性识别cirp的试剂，从而作为胶质瘤诊断试剂，来检测胶质瘤，还可对胶质瘤进行分级。

在一些实施方式中，基于所述的cirp，筛选特异性识别cirp的抗体或配体作为胶质瘤诊断试剂。

本发明的第十方面，提供了特异性识别cirp的试剂在制备胶质瘤诊断试剂盒中的用途。

所述胶质瘤诊断试剂盒可对胶质瘤进行分级。

在一些实施方式中，所述特异性识别cirp的抗体或配体可作为胶质瘤诊断试剂。

在一些实施方式中，所述抗体包括单克隆抗体和多克隆抗体。

本发明的第十一方面，提供一种胶质瘤诊断试剂盒，所述的试剂盒中至少含有特异性识别cirp的试剂。

所述胶质瘤诊断试剂盒可对胶质瘤进行分级。

在一些实施方式中，所述特异性识别cirp的试剂可以是所述特异性识别cirp的抗体或配体。

在一些实施方式中，所述抗体包括单克隆抗体和多克隆抗体。

在一些实施方式中，所述的试剂盒中还含有：免疫结合(如抗原抗体结合)试剂；或酶联免疫检测(elisa)试剂。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明经过广泛而深入的研究，首次揭示了冷诱导结合蛋白cirp在胶质瘤细胞异常表达，其表达水平与肿瘤分级及耐药相关，目前cirp基因表达水平与胶质瘤恶性分化程度、转移及复发等恶性生物学特征的关系，及其作用机理全世界尚无研究报道。该项目探索了新的基因功能改变与胶质瘤恶性特征的关系，提供了胶质瘤的个性化治疗提供新的思路。

附图说明

图1：cirp在胶质瘤组织中低表达。

图2：cirp蛋白在胶质瘤组织中低表达，且其表达水平随着肿瘤恶性程度的升高而降低。

图3：利用流式分选技术获得稳定表达cirp的细胞u87和u251。

图4：western-bloting检测细胞cirp蛋白表达量，证实分选后的细胞高表达cirp蛋白。

图5：利用cck-8方法检测cirp表达变化对瘤细胞增殖能力影响结果发现，升高胶质瘤细胞中cirp的表达水平可以显著抑制细胞的体外生长能力。

图6：利用划痕实验检测cirp了表达变化对胶质瘤细胞侵袭力、黏附力和迁移力的影响，结果证实胶质瘤细胞u251中cirp的表达水平升高可以显著抑制细胞的体外侵袭能力。

图7：利用小动物活体成像仪观察了cirp表达变化对胶质瘤细胞体内成瘤能力的影响，结果发现升高胶质瘤细胞中cirp的表达水平可以显著抑制细胞的体内成瘤能力。

具体实施方式

本申请的发明人进行了广泛而深入的研究，首次发现冷诱导结合蛋白cirp在胶质瘤细胞异常表达，其表达水平与肿瘤分级及耐药相关，目前cirp基因表达水平与胶质瘤恶性分化程度、转移及复发等恶性生物学特征的关系，及其作用机理全世界尚无研究报道。该项目探索了新的基因功能改变与胶质瘤恶性特征的关系，提供了胶质瘤的个性化治疗提供新的思路。

cirp上调剂

指提高cirp水平的物质。提高cirp水平可以采用各种化学、物理、生物的方法。包括但不限于：

(1)调节cirp代谢通路以提高cirp表达水平；

(2)于细胞内直接增加cirp水平。

可将cirp或cirp模拟物送入细胞内直接增加细胞内cirp水平。

调节cirp代谢通路可以是采用cirp激动剂来提高cirp的活性或促进cirp转录或表达，从而上调cirp水平。

提高cirp的活性是指使cirp活性提高。优选地，相比提高前，cirp的活性提高至少10％，较佳的提高至少30％，再佳的提高至少50％，更佳的提高70％，最佳的提高至少90％。

促进cirp转录或表达是指：使cirp高表达，或者提高cirp转录活性。

本领域技术人员可以使用常规方法对cirp转录或表达进行调控。

优选地，cirp转录或表达至少提高至少10％，较佳的提高至少30％，再佳的提高至少50％，更佳的提高70％，最佳的提高至少90％。

cirp上调剂制备药物

以cirp上调剂为主要活性成分或主要活性成分之一制备药物。通常，药物中除了有效成分外，根据不同剂型的需要，还会包括一种或多种药学上可接受的载体或辅料。

“药学上可接受的”是指当分子本体和组合物适当地给予动物或人时，它们不会产生不利的、过敏的或其它不良反应。

“药学上可接受的载体或辅料”应当与cirp上调剂相容，即能与其共混而不会在通常情况下大幅度降低药物组合物的效果。可作为药学上可接受的载体或辅料的一些物质的具体例子是糖类，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，如玉米淀粉和土豆淀粉；纤维素及其衍生物，如甲基纤维素钠、乙基纤维素和甲基纤维素；西黄蓍胶粉末；麦芽；明胶；滑石；固体润滑剂，如硬脂酸和硬脂酸镁；硫酸钙；植物油，如花生油、棉籽油、芝麻油、橄榄油、玉米油和可可油；多元醇，如丙二醉、甘油、山梨糖醇、甘露糖醇和聚乙二醇；海藻酸；乳化剂，如tween；润湿剂，如月桂基硫酸钠；着色剂；调味剂；压片剂、稳定剂；抗氧化剂；防腐剂；无热原水；等渗盐溶液；和磷酸盐缓冲液等。这些物质根据需要用于帮助配方的稳定性或有助于提高活性或它的生物有效性或在口服的情况下产生可接受的口感或气味。

本发明中，除非特别说明，药物剂型并无特别限定，可以被制成针剂、口服液、片剂、胶囊、滴丸、喷剂等剂型，可通过常规方法进行制备。药物剂型的选择应与给药方式相匹配。

联合治疗药物组合和施用方法

所述联合治疗药物组合可以是以下形式中的任意一种：

一)将cirp上调剂和其他胶质瘤治疗药物分别制成独立的制剂，制剂的剂型可相同或不同，给药途径亦可相同或不同。使用时，可几种药同时使用，也可几种药先后使用。先后给药时，应当在先用药物仍对机体有效的期间内向机体施加其他药物。

二)将cirp上调剂和其他胶质瘤治疗药物配置成复方制剂，在将cirp上调剂和其他胶质瘤治疗药物采用相同给药途径给药并同时施加时，可采用将两者配置成复方制剂的形式。

可以同步地或顺序地给予有效量的cirp上调剂和至少一种有效量的其他胶质瘤治疗药物。

使用时，可将有效量的cirp上调剂和有效量的其他胶质瘤治疗药物同时使用，也可将有效量的cirp上调剂和有效量的其他胶质瘤治疗药物先后使用。先后给药时，应当在先用药物仍对生物体有效的期间内向生物体施加其他药物。

在进一步描述本发明具体实施方式之前，应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。下列实施例中未注明具体条件的试验方法，通常按照常规条件，或者按照各制造商所建议的条件。

当实施例给出数值范围时，应理解，除非本发明另有说明，每个数值范围的两个端点以及两个端点之间任何一个数值均可选用。除非另外定义，本发明中使用的所有技术和科学术语与本技术领域技术人员通常理解的意义相同。除实施例中使用的具体方法、设备、材料外，根据本技术领域的技术人员对现有技术的掌握及本发明的记载，还可以使用与本发明实施例中所述的方法、设备、材料相似或等同的现有技术的任何方法、设备和材料来实现本发明。

除非另外说明，本发明中所公开的实验方法、检测方法、制备方法均采用本技术领域常规的分子生物学、生物化学、染色质结构和分析、分析化学、细胞培养、重组dna技术及相关领域的常规技术。这些技术在现有文献中已有完善说明，具体可参见sambrook等molecularcloning：alaboratorymanual，secondedition，coldspringharborlaboratorypress，1989andthirdedition，2001；ausubel等，currentprotocolsinmolecularbiology，johnwiley&sons，newyork，1987andperiodicupdates；theseriesmethodsinenzymology，academicpress，sandiego；wolffe，chromatinstructureandfunction，thirdedition，academicpress，sandiego，1998；methodsinenzymology，vol.304，chromatin(p.m.wassarmananda.p.wolffe，eds.)，academicpress，sandiego，1999；和methodsinmolecularbiology，vol.119，chromatinprotocols(p.b.becker，ed.)humanapress，totowa，1999等。

实施例1cirp在胶质瘤发生、发展中的作用

一、cirp表达水平与胶质瘤恶性程度的具有相关性

(1)收集多例胶质瘤临床组织标本，利用real-timepcr研究cirp蛋白在胶质瘤组织中的表达水平，结果证实如图1所示，cirp在胶质瘤组织中低表达。

(2)收集多例胶质瘤临床组织标本，利用免疫组化法证实cirp蛋白在胶质瘤组织中的表达水平，结果证实如图2所示，cirp蛋白在胶质瘤组织中低表达，且其表达水平随着肿瘤恶性程度的升高而降低。

二、cirp表达变化对正常胶质及胶质瘤细胞一般生物学特性的影响

a、获得稳定表达cirp基因的胶质瘤细胞：

a)重组慢病毒载体的构建：采用pcr方法克隆cirp基因，并用10g/l琼脂糖凝胶电泳鉴定扩增产物并切割胶回收目的片段。将cirp基因的pcr产物和慢病毒表达质粒pbplv分别用限制性内切酶双酶切，通过琼脂糖凝胶电泳分离酶切产物，用胶回收试剂盒分别回收cirp基因和载体片段，回收产物按摩尔比3∶1混合，于16℃在t4dna连接酶的作用下连接过夜，构建cirp重组质粒，再转化至大肠杆菌dh5α中扩增，将转化后的菌液涂于含氨苄西林的lb琼脂平板上培养过夜。挑选经pcr鉴定为阳性的单菌落接种于含氨苄西林的lb培养基中，37℃振荡过夜，次日提取质粒，酶切鉴定，并将阳性菌液送sangon公司测序，测序结果与基因库比对，确定所克隆的目的基因片段。将含有正确克隆的菌液增殖，提取重组质粒冻存于-20℃备用。

b)病毒包装：将构建好的socs-3慢病毒表达载体与包装质粒plp1、plp2，包膜质粒plp/vsvg，42μllipofectamine2000混合于无血清高糖dmem培养基中，室温孵育20min，形成dna-lipofectamine2000复合物；用胰酶消化293ft细胞，收集约6×106细胞重悬于5ml生长培养基中，与dna-lipofectamine2000复合物混匀；加入含5ml生长培养基的10cm细胞培养皿中，在37℃、5％co2孵箱中培养过夜，次日用含1mmol/l丙酮酸钠的完全培养基换液，转染48～72h后收集上清，3000r/min离心15min去除细胞碎片，冻存于-80℃。所获得的cirp高表达载体中，含有的cirp编码基因的序列为(ncbireferencesequence:nm_001280.2中的cds区)：atggcatcagatgaaggcaaactttttgttggagggctgagttttgacaccaatgagcagtcgctggagcaggtcttctcaaagtacggacagatctctgaagtggtggttgtgaaagacagggagacccagagatctcggggatttgggtttgtcacctttgagaacattgacgacgctaaggatgccatgatggccatgaatgggaagtctgtagatggacggcagatccgagtagaccaggcaggcaagtcgtcagacaaccgatcccgtgggtaccgtggtggctctgccgggggccggggcttcttccgtgggggccgaggacggggccgtgggttctctagaggaggaggggaccgaggctatggggggaaccggttcgagtccaggagtgggggctacggaggctccagagactactatagcagccggagtcagagtggtggctacagtgaccggagctcgggcgggtcctacagagacagttatgacagttacgctacacacaacgagtaa(seqidno.1)。

c)细胞转染与流式细胞分选：在培养于六孔板上的胶质瘤细胞中，同时加入2ml病毒液和聚凝胺(终浓度为6mg/l)重悬细胞，次日换液，继续培养至72h。转染后24～72h于荧光显微镜下观察细胞转染效率，收集转染后的细胞进行流式细胞术分选，获得高表达gfp的细胞。

如图3所示，成功构建稳定表达高表达cirp的胶质瘤细胞系u87和u251。如图4所示，western-bloting检测细胞cirp蛋白表达量，证实分选后的细胞高表达cirp蛋白。

b、利用cck-8方法检测cirp表达变化对瘤细胞增殖能力影响：收集对数生长期的各组细胞，接种96孔板，cck-8分别检测细胞生长1-6天的增殖率，绘制细胞生长曲线，比较增殖力变化。如图5所示，利用cck-8方法检测cirp表达变化对瘤细胞增殖能力影响结果发现，升高胶质瘤细胞中cirp的表达水平可以显著抑制细胞的体外生长能力。

c、利用划痕实验分别检测cirp表达变化对胶质瘤细胞侵袭力、迁移力的变化。如图6所示，利用划痕实验检测cirp了表达变化对胶质瘤细胞侵袭力、黏附力和迁移力的影响，结果证实胶质瘤细胞u251中cirp的表达水平升高可以显著抑制细胞的体外侵袭能力。

二、cirp表达变化对胶质瘤细胞成瘤能力的影响

a、获得稳定表达荧光素基因与cirp表达或干扰基因的大鼠胶质瘤细胞：构建含gfp标签的荧光素酶慢病毒表达载体，将慢病毒载体质粒与包装质粒共孵育转染293ft细胞，获得病毒上清；利用病毒感染已稳定表达/干涉cirp基因的胶质瘤细胞，后利用流式分选筛选稳定表达荧光素酶基因与cirp(+/-)的细胞。

b、利用小动物活体成像仪观察cirp表达变化对胶质瘤细胞体内成瘤能力的影响：将以1x10⁶/100ul接种于裸鼠体内，移植细胞后不同时间点，给动物注射荧光素酶底物，通过活体成像仪示踪移植细胞的成瘤速度，瘤体大小，肿瘤转移情况及动物的生存期。如图7所示，成功构建稳定表达荧光素基因与cirp表达基因的大鼠胶质瘤细胞系u251，利用小动物活体成像仪观察了cirp表达变化对胶质瘤细胞体内成瘤能力的影响，结果发现升高胶质瘤细胞中cirp的表达水平可以显著抑制细胞的体内成瘤能力，动物实验观察到的最高抑制率可达50％。

以上所述，仅为本发明的较佳实施例，并非对本发明任何形式上和实质上的限制，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还将可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。凡熟悉本专业的技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，当可利用以上所揭示的技术内容而做出的些许更动、修饰与演变的等同变化，均为本发明的等效实施例；同时，凡依据本发明的实质技术对上述实施例所作的任何等同变化的更动、修饰与演变，均仍属于本发明的技术方案的范围内。

序列表

<110>中国人民解放军总医院第一附属医院

<120>cirp的功能与用途

<130>174932

<160>1

<170>siposequencelisting1.0

<210>1

<211>519

<212>dna

<213>人工序列(artificialsequence)

<400>1

atggcatcagatgaaggcaaactttttgttggagggctgagttttgacaccaatgagcag60

tcgctggagcaggtcttctcaaagtacggacagatctctgaagtggtggttgtgaaagac120

agggagacccagagatctcggggatttgggtttgtcacctttgagaacattgacgacgct180

aaggatgccatgatggccatgaatgggaagtctgtagatggacggcagatccgagtagac240

caggcaggcaagtcgtcagacaaccgatcccgtgggtaccgtggtggctctgccgggggc300

cggggcttcttccgtgggggccgaggacggggccgtgggttctctagaggaggaggggac360

cgaggctatggggggaaccggttcgagtccaggagtgggggctacggaggctccagagac420

tactatagcagccggagtcagagtggtggctacagtgaccggagctcgggcgggtcctac480

agagacagttatgacagttacgctacacacaacgagtaa519