一种检测肺癌分期的标志物和方法与流程

本发明涉及一种检测肺癌的癌旁组织或肺癌患者正常肺组织的生物自发荧光强度，作为判断肺癌分期的生物标志物。

背景技术：

肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，肺癌的病因至今尚不完全明确。肺癌具有恶性程度高、进展快、疗效差等特点。肺癌的两个主要的形式是小细胞肺癌和非小细胞型肺癌(non-smallcelllungcancer,nsclc)，其中非小细胞肺癌占肺癌的绝大多数，约70％～80％，肺腺癌和肺鳞癌是其中主要的两种病理亚型。

2012年，全球有180万的人口患有肺癌，其中有160万死于肺癌。据统计，在男性中，因癌症死亡人数中，肺癌占据首位。而女性方面，肺癌占据第二位，仅次于乳腺癌。

在美国，所有患有肺癌的病人，只有16.8％的患者在诊断出肺癌后，存活超过5年。在英国，2005年-2009年之间，存活超过5年的患者低于10％。这些数据在发展中国家更糟糕。目前，有30-40％的非小细胞型肺癌，60％的小细胞型肺癌患者属于iv期。越早诊断出肺癌对于存活率的影响也很大。据英国报道，70％的早期诊断患者存活可以超过1年，但是当患者被诊断出是癌症晚期，存活超过1年的患者数量只有14％。所以，癌症的早期诊断和判断癌症分期的方法，在临床中十分重要。

尽管现在用于癌症诊断的手段众多，例如x光诊断、内窥镜诊断、超声、血液生化、pet-ct、ctc循环细胞检测。但对于判断癌症分期的方法，仍然还只能使用切片进行染色确定。而针对肺癌而言，获取癌症组织样本需要开胸手术或微创手术对癌症组织处切片，这对于患者的创伤是巨大的，且当癌症组织较小不易判断时，为了获取癌症组织样本而进行手术，也极大地提高了医疗成本。

因此，目前亟需一种活体无创或超微创且能准确检测体积较小肺癌的分期的新型检测方法，本发明的目的旨在于此。

技术实现要素：

一方面，本发明提供了一种分子标记物在制备用于诊断和预测肺癌或其分期的产品中的应用，其中，所述分子标记物为使用440nm至700nm之间的激发光激发受试者肺部正常组织后的自发荧光强度，所述自发荧光的波长范围在460nm至800nm之间。

另一方面，本发明公开一种分子标记物在制备用于诊断和预测肺癌或其分期的产品中的应用，其中，所述分子标记物为使用440nm至700nm之间的激发光激发受试者癌旁组织后的自发荧光强度，所述自发荧光的波长范围在460nm至800nm之间。

另一方面，本发明公开了一种分子标记物在制备用于诊断和预测肺癌或其分期的产品中的应用，其中，所述分子标记物为使用440nm至700nm之间的激发光激发受试者肺部正常组织和疑似的癌旁组织后的自发荧光强度，所述自发荧光的波长范围在460nm至800nm之间。

在一个具体实施例中，当所述激发光激发受试者肺部正常组织后的自发荧光强度值小于非肺癌患者肺部正常组织后的自发荧光强度值，则确定受试者患有癌症。

在一个具体实施例中，当所述激发光激发受试者疑似的癌旁组织的自发荧光强度值小于非肺癌患者肺部正常组织后的自发荧光强度值，则确定受试者患有癌症。

在一个具体实施例中，所述激发光范围优选为460nm-640nm，更优选为460nm-580nm。

在一个具体实施例中，所述接收光范围优选为480nm-700nm，优选为500nm-620nm。

另一方面，本发明公开了一种诊断和预测肺癌分期的方法，其中，包括以下步骤：

(1)通过440nm至700nm之间的激发光激发患者肺部正常组织和/或癌旁组织；

(2)接收460nm至800nm之间的自发荧光；

(3)分析自发荧光的强度，确定是否是肺癌或癌症分期。

在一个具体实施例中，当激发光激发受试者肺部正常组织后的自发荧光强度值小于非肺癌患者肺部正常组织后的自发荧光强度值，则确定受试者患有癌症。

在一个具体实施例中，当激发光激发受试者疑似的癌旁组织的自发荧光强度值小于非肺癌患者肺部正常组织后的自发荧光强度值，则确定受试者患有癌症。

在一个具体实施例中，所述激发光范围优选为460nm-640nm，更优选为460nm-580nm。

在一个具体实施例中，所述接收光范围为优选为480nm-700nm，更优选为500nm-620nm。

另外，本发明还提供了一种用于判断肿瘤或其分期的装置，包括440nm至700nm之间的激发光部件和接收460nm至800nm之间的自发荧光的部件，以及分析受试者肺部正常组织或疑似的癌旁组织的自发荧光强度值的分析部件。

在一个具体实施例中，本发明还公开了所述装置在确定受试者否是肺癌或癌症分期中的用途。

附图说明

图1示出使用488nm激发光和接收500-550nm的接收光下检测不同时期肺癌患者或非肺癌患者的肺部正常组织的自发荧光强度柱状图。

图2示出使用488nm激发光和接收500-550nm的接收光下检测不同时期肺癌患者或非肺癌患者的癌旁组织的自发荧光强度柱状图。

具体实施方式

下面将通过具体描述，对本发明作进一步的说明。

除非另有限定，本文中所使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解相同的含义。

如本文所述，术语“自荧光”、“自发荧光”、“自发性荧光”、“auto-fluorescence”可互换，其是指组织、细胞、生物物质在受到适当波长的激发光照射后，吸收激发光的能量进入激发态，当退出激发态时发射出比激发光波长更长的光的现象，其中自荧光为比激发光波长更长的光。

如本文所述，术语“激发光”，是指能够激发生物分子发生自发荧光现象的光，其波长应比自发荧光短。

如本文所述，术语“肺部正常组织”、“癌旁正常肺组织”可互换，其是指距离肺癌肿块(病灶)边缘大于5cm的肺部组织，包括近癌组织和远癌组织。在非肺癌患者中，肺部正常组织指距离良性病灶边缘大于5cm的肺部组织；在受试者中，肺部正常组织指距离疑似癌症病灶边缘大于5cm的肺部组织。

如本文所述，术语“癌旁组织”、“肿周组织”可互换，其是指距癌症病灶边缘5cm以下的组织，例如2cm，癌旁组织通过免疫组化abc法染色后再光镜下可见细胞浆或核被染成黄色或棕色，呈现阳性反应。癌旁组织不同于癌旁正常组织。癌旁组织不同于癌旁正常组织。在非肺癌患者中，癌旁组织指病灶旁组织；在受试者中，癌旁组织指疑似癌症病灶旁的组织，简称疑似癌旁组织。

如本文所述，术语“肺癌分期”是指国际抗癌联盟(unionforinternationalcancercontrol，uicc)推出tnm分期标准对肺癌进行的分期，包括ia、ib、iia、iib、iiia、iiib、iva、ivb。

实施例1：激发光波长为488nm时肺部各个部位组织自荧光的强度与肺癌分期

根据本发明，取各个时期肺癌病人或者非肺癌病人，肿块(病灶)组织、癌旁组织和肺部正常组织，使用激光共聚焦显微镜对肺部组织样本进行实时成像。其中，激发光波长为488nm，接收波长范围500-550nm的接收光。

实验结果显示，相比非肺癌患者的肺部正常组织的自发荧光强度，癌症患者的肺部正常组织的自发荧光强度显著下降，更重要的是，在不同分期的肺癌患者或非肺癌患者中，肺部正常组织的自荧光强度与肺癌分期呈负相关，r为0.8614(图1)。即在晚期病人中(iiib)肺部正常组织的自荧光强度比早期患者显著性降低，且荧光强度与分期之间具有相关性，说明可以使用患者的肺部正常组织的自发荧光强度诊断或预测癌症分期。对于肺癌病灶很小或癌症组织不均一的情况下，直接检测癌症病灶并不方便或准确时(容易产生较大的数值变异度)，而检测肺部正常组织会更方便和准确，重现性较好。

同时，实验结果显示癌旁组织自发荧光强度与肺癌分期呈负相关，r为0.9691(图2)。即在晚期病人中(iiib)肺部癌旁组织的自荧光强度比早期患者显著性降低，且荧光强度与分期之间具有相关性，说明可以使用患者的癌旁组织的自发荧光强度诊断或预测癌症分期。对于肺癌病灶很小或癌症组织不均一的情况下，直接检测癌症病灶并不方便或准确时(容易产生较大的数值变异度)，而检测癌旁组织会更方便和准确，重现性较好。

实施例2：激发光波长为633nm时肺部各个部位组织自荧光的强度与肺癌分期

根据本发明，取各个时期肺癌病人或者非肺癌病人，肿块(病灶)组织、癌旁组织和肺部正常组织，使用激光共聚焦显微镜对肺部组织样本进行实时成像。其中，激发光波长为633nm，接收波长范围650-690nm的接收光。

相比非肺癌患者的肺部正常组织的自发荧光强度，癌症患者的肺部正常组织和肺癌的癌旁组织的自发荧光强度显著下降。

实施例3：发现激发光波长为405nm时，不能激发肺部组织的自荧光。

实验结果显示，发光波长为405nm时，不能激发肺部组织的自荧光。这一结果说明本研究中肺部组织产生自荧光的物质不是胶原蛋白(collagen)或弹性蛋白(elastin)。

本领域的技术人员应当明了，尽管为了举例说明的目的，本文描述了本发明的具体实施方式，但可以对其进行各种修改而不偏离本发明的精神和范围。因此，本发明的具体实施方式和实施例不应当视为限制本发明的范围。本发明仅受所附权利要求的限制。本申请中引用的所有文献均完整地并入本文作为参考。