基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂及制备方法与流程

本发明属于宫颈癌检测技术领域，尤其涉及一种基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂及其制备方法。

背景技术：

传统方法主要借助病理检查及pcr技术，尚不能在宫颈检查中即时得出结果，做出初步判断，且液基细胞学(tct)结合hpv检测价格较高，不便于门诊就诊患者及体检患者的常规筛查和及时分流。目前在经济不发达地区或缺少资源的地区仍采用肉眼筛查方法(via/vili)进行初筛，阳性者再行阴道镜检查，但肉眼筛查误差较大。而叶酸受体介导的宫颈特殊染色法(frd)上皮组织染色技术是一种新的较便捷的检测宫颈病变技术，该方法通过检测尿液判断颜色变化即可观察病变。传统的上皮组织染色技术和tct、hpv一样，都需要通过妇科窥器深入到宫颈内部取样，容易对宫颈进行二次伤害。

综上所述，现有技术存在的问题是：现有的tct、hpv检测速度慢，价格高，误差大，操作繁琐；传统上皮细胞染色：深入宫颈取样，容易造成二次伤害。

技术实现要素：

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂及制备方法。

本发明是这样实现的，一种基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂，所述基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂由叶酸、活化剂(磷酸乙二胺、磷酸丙二胺中的一种或组合使用)、染色液1和染色液2组成；

所述染色液1为亚甲基蓝，亚甲基蓝浓度为10mmol/l；所述染色液2为中性红、伊红、美兰一种或者几种，染色液2浓度为2mmol/l；

vc浓度为5mmol/l，叶酸浓度为12mmol/l，

本发明的另一目的在于提供一种所述基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂的制备方法，所述基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂的制备方法包括以下步骤：

步骤一，用vc还原亚甲基蓝，用叶酸介导；

步骤二，加入染色液2。

本发明的另一目的在于提供一种所述基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂的的检测方法，所述基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂的检测方法包括：将染色液加入基准液中形成混合液，再将尿液加入混合液中，黄色为阴性，蓝色为阳性。

进一步，基准液：染色液：样本＝1200ul:100ul:1000ul。

本发明的优点及积极效果为：通过加入尿液观察颜色变化来检测宫颈癌，避免了深入宫颈对人体造成伤害。在妇科窥器检查前使用上皮组织染色方法，30s内完成检测，可以对宫颈病变进行实时评价，以便科学分流患者，提高了患者的依从性，从而减少患者就诊次数。上皮组织染色技术比现有的tct和hpv技术的敏感性好，不需要设备仪器，直接取样检测即可，并且可以对宫颈管病变进行检测，弥补了现有技术的不足。同时上皮组织染色技术价格低，易于患者接受。

本发明通过检测尿液中的宫颈脱落上皮细胞，具有安全性高、检测方便、用户易于接受等特点；直接将尿液加入到反应液中，30s后观察反应液的颜色变化，方便快捷，安全可靠。

附图说明

图1是本发明实施例提供的基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂的制备方法流程图。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

叶酸受体数量在肿瘤细胞表面高表达，而在正常细胞较少或无表达。肿瘤细胞处于强烈的氧化应激的环境中，与正常组织相比，存在着大量的活性氧；生物染色剂亚甲基蓝与肿瘤细胞有高度亲和性，亚甲基蓝的氧化还原性使亚甲基蓝在肿瘤的氧化还原体系中具有不同的变色反应光谱。基于氧化显色反应的还原兰组织细胞染色液被接触于上皮组织脱落细胞后，如果有病变细胞存在，叶酸及生物复合物就会经过这些细胞表面的叶酸受体介导，迅速进入细胞浆，同时还原型的亚甲基蓝也被带入细胞浆。叶酸被还原成四氢叶酸，参与一碳单位的代谢过程。还原型的亚甲基蓝则被细胞内广泛存在的活性氧(reactiveoxygenspecies，pos)氧化，变为亚甲基蓝。由于这些生物大分子的进入，使得细胞内的渗透压升高，致使亚甲基蓝逸出细胞外，则可在反应液上显现出颜色，如反应液无变色或变为浅黄色，则提示无病变细胞；如反应液变化(蓝绿色、浅绿色、紫黑色)，则提示有宫颈炎或宫颈癌病变。

下面结合附图对本发明的应用原理作详细的描述。

本方法通过抽样检测某三甲医院1000人的尿液，发现患有宫颈癌的病人检测时候有明显的的颜色变化，呈现蓝色或深蓝色。而无宫颈癌的人群中检测颜色则为黄色。

本发明实施例提供的基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂由叶酸、活化剂、染色液1(主要成分亚甲基蓝)和染色液2(主要成分中性红、依红、美兰一种或者几种)组成。

亚甲基蓝浓度为10mmol/l，vc浓度为5mmol/l，叶酸浓度为12mmol/l，染色液2浓度为2mmol/l。

如图1所示，本发明实施例提供的基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂的制备方法包括以下步骤：

s101：用vc还原亚甲基蓝，用叶酸介导；亚甲基蓝浓度为10mmol/l，vc浓度为5mmol/l，叶酸浓度为12mmol/l；

s102：加入染色液2，染色液2浓度为2mmol/l，乙酸10％。

本发明实施例提供的基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂的检测方法：将染色液加入基准液中，再将样本(尿液)加入上述二者的混合液中，看颜色变化，黄色为阴性，蓝色为阳性。用上皮组织染色液加入基准液中，再加入尿样检测，黄色为阴性，蓝色或者深蓝色为阳性。基准液：染色液：样本＝1200ul:100ul:1000ul。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

技术特征：

技术总结
本发明属于宫颈癌检测技术领域，公开了一种基于尿液中宫颈脱落细胞染色的检测宫颈癌试剂及制备方法，由叶酸、活化剂、染色液1和染色液2组成；染色液1为亚甲基蓝，亚甲基蓝浓度为10mmol/L；染色液2为中性红、伊红、美兰中的一种或者几种，染色液2浓度为2mmol/L；Vc浓度为5mmol/L，叶酸浓度为12mmol/L；用Vc还原亚甲基蓝，用叶酸介导；加入染色液2；染色液为叶酸介导的亚甲基蓝加入染色液2中形成的溶液；基准液为10％的乙酸。本发明30s内完成检测，对宫颈病变进行实时评价，提高了患者的依从性，减少患者就诊次数，比现有的TCT和HPV技术的敏感性好，可以对宫颈管病变进行检测，弥补了现有技术的不足，同时上皮组织染色技术价格低，易于患者接受。

技术研发人员：温云飞;黄冬琴;王成林
受保护的技术使用者：青岛浩铂生物科技有限公司
技术研发日：2018.01.29
技术公布日：2018.07.17