本发明涉及一种酢浆草的检测方法，属于药品技术的领域。
背景技术：
酢浆草为酢浆草科植物酢浆草(oxaliscorniculatal.)的新鲜或干燥全草，始载于《本草纲目》，又名酸浆草、三叶酸、斑鸠酸，在我国主要分布于华北、华中、华南、江西、云南、四川等地，尤其在贵州资源丰富。收载于2003年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》，为贵州省苗族常用药材。具有清热解毒、消肿散疾、补肺泻肝、健胃止咳、凉血化瘀等功效，民间常用于治疗泄泻、痢疾、黄疸、淋病、麻疹、吐血、痈肿、疮疖、疥癣、痔疾、脱肛、月经不调、跌打损伤等症。现代药理研究表明酢浆草具有较好的抗炎、抗病毒、抑菌和抗氧化作用。目前，含有酢浆草药材的主要制剂有：泌淋胶囊、泌淋颗粒、泌淋清胶囊、妇炎消胶囊、六味伤复宁酊、肿痛舒喷雾剂、骨康胶囊等，酢浆草为贵州省重要民族药材。
中药的质量直接影响中医的临床疗效及用药安全，在2003年版《贵州省中药材、民族药材质量标准》中酢浆草质量标准仅有性状描述及薄层鉴别试验，其质量标准简单，不能满足中药现代的质量控制要求，为保证酢浆草药材及其制剂的临床用药安全、有效、质量可控，我们对酢浆草药材质量标准进行研究，以提升其药材的质量控制评价方法，为该药材的研究、应用、开发提供基础。因此本发明对酢浆草的质量控制方法进行系统研究，为提升酢浆草的质量标准奠定基础，为了更好地控制酢浆草的质量，确保药效，本发明提供了酢浆草的检测方法。
技术实现要素：
本发明的目的在于，提供一种酢浆草的检测方法；该检测方法的鉴别方法和异牡荆苷含量测定方法结果准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，能有效控制酢浆草的质量，确保酢浆草的药效。
为解决上述技术问题，本发明采用如下技术方案实现：一种酢浆草的检测方法，包括鉴别方法和异牡荆苷的含量测定方法。
前述的酢浆草的检测方法中，所述鉴别方法为：取本品粉末0.1～1g，加甲醇5～15ml，超声处理10～50分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取酢浆草对照药材0.5g，加甲醇5～15ml，超声处理10～50分钟，滤过，取滤液作为对照药材溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1～8μl，分别点于同一硅胶g板上，以三氯甲烷：甲醇：甲酸＝5～10：0.5～1.5：0.05～0.15为展开剂，展开，取出，晾干，置360～370nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
前述的酢浆草的检测方法中，所述鉴别方法为：取本品粉末0.5g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取酢浆草对照药材0.5g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为对照药材溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶g板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸＝8：1：0.1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
前述的酢浆草的检测方法中，所述异牡荆苷的含量测定方法为：
按照《中国药典》高效液相色谱法测定；
色谱条件及系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：0.1％磷酸溶液＝10～20：90～80为流动相；检测波长为330～340nm；理论板数按异牡荆苷峰计算不低于5000；
对照品溶液的制备：取异牡荆苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含20～30μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取过三号筛的本品粉末1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入50％甲醇20～30ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5～15μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
前述的酢浆草的检测方法中，所述异牡荆苷的含量测定方法为：
按照《中国药典》高效液相色谱法测定；
色谱条件及系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：0.1％磷酸溶液＝15：85为流动相；检测波长为338nm；理论板数按异牡荆苷峰计算不低于5000；
对照品溶液的制备：取异牡荆苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含26μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取过三号的本品粉末筛1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入50％甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
前述的酢浆草的检测方法中，所述检测方法为：
【性状】本品根呈圆柱形，略扭曲，有分支，表面棕色或棕红色，具纵纹，根头部稍膨大，质硬，易折断，断面灰白色；茎、枝被疏长毛；叶互生，掌状复叶，有柄，托叶与叶柄连生，小叶3枚，倒心脏形，长5～10cm，无柄；花黄色，萼片、花瓣均5片；蒴果近圆柱形，棱5条，被柔毛，种子小，扁卵形，褐色；具酸气，味咸而酸涩。
【鉴别】(1)本品粉末灰褐色至黄褐色；非腺毛甚多，主要为单细胞，先端尖，壁厚，具疣状突起；可见另一种非腺毛，先端钝圆，壁薄光滑；草酸钙方晶在茎薄壁细胞，呈方形，直径3～20μm；纤维纹孔明显，壁厚，直径5～32μm；导管为螺纹导管、梯纹导管及具缘纹孔导管。
(2)取本品粉末0.5g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取酢浆草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶g板上，以三氯甲烷：甲醇：甲酸＝8：1：0.1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【检查】
水分取干酢浆草，照《中国药典》2015年版四部通则0832第二法进行检测；
总灰分取干酢浆草，照《中国药典》2015年版四部通则2302进行检测；
酸不溶性灰分取干酢浆草，照《中国药典》2015年版四部通则2302进行检测；
【浸出物】取干酢浆草，照《中国药典》2015年版四部通则2201醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂；
【含量测定】照《中国药典》高效液相色谱法测定；
色谱条件及系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：0.1％磷酸溶液＝15：85为流动相；检测波长为338nm；理论板数按异牡荆苷峰计算不低于5000；
对照品溶液的制备：取异牡荆苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含26μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取过三号筛的本品粉末1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入50％甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
发明人进行了大量的实验，以下是本发明所述检测方法的研究：
实验例1：薄层色谱鉴别
1仪器与试药
1.1仪器
camagreprostar3薄层色谱成像系统(瑞士卡玛公司)；cq-250a-st超声波清洗仪(上海跃进医用光学器械厂)；xtp-a500型多功能粉碎机(永康市红太阳机电有限公司)；el204电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)；wp-μp-ii-20实验室超纯水机(四川沃特尔水处理设备有限公司)。
1.2试药
对照药材采自贵州花溪，由贵州医科大学药学院标本馆龙庆德副教授鉴定其为oxaliscorniculatal.。乙酸乙酯(ar，上海泰坦科技有限公司)；甲醇、乙醚、乙醇、苯(ar，国药集团化学试剂有限公司)；三氯甲烷、醋酸、二氯甲烷(ar，上海申博化工有限公司)；甲酸、环己烷(ar，天津市科密欧试剂有限公司)；硫酸、盐酸(ar，重庆川东化工(集团)有限公司)；薄层色谱硅胶板g(青岛海洋化工有限公司、烟台江友硅胶开发有限公司、青岛鼎康硅胶有限公司)。
酢浆草，共12批，由贵州医科大学大学药学院标本馆龙庆德副教授鉴定其为oxaliscorniculatal.的新鲜或干燥全草，编号及收集地见表1。
表1酢浆草药材信息
2、试验方法
2.1原质量标准薄层鉴别方法
《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版收载“酢浆草”药材【鉴别】项下鉴别(2)为“取本品粉末3g，加水10ml，用盐酸调ph值至2～3，加热回流3小时，放冷，滤过，滤液用等量乙醚萃取，分取醚层，挥至1ml，作为供试品溶液。另取酢浆草对照药材3g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》一部附录ⅵb)试验，吸取上述溶液5μl，分别点于同一硅胶g薄层板上，以苯-甲醇-醋酸(45：8：4)为展开剂，展开，取出，晾干，置于紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；将该薄层板挥去醋酸，喷以0.05％溴酚蓝溶液。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的蓝色斑点。”照该方法进行试验，其结果如图1所示(批号分别为20161001、20161017、20170701)。
2.2薄层色谱鉴别修订
2.2.1色谱条件和系统适用性试验(专属性试验)
取本品粉末0.5g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液。另取酢浆草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶g板上，以三氯甲烷-甲醇-甲酸(8：1：0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365nm)下检视。
利用该方法对5批酢浆草样品(批号分别为20161001、20161002、20161017、20160507、20170529)进行分析，结果如图2所示。在供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，该方法较原标准方法供试品溶液制备简便，快捷，色谱信息丰富，
2.2.2耐用性试验
2.2.2.1不同品牌薄层色谱硅胶g板考察
照上述的薄层色谱鉴别方法，分别考察了青岛海洋硅胶g板、青岛鼎康硅胶g板和烟台江友硅胶hsg板的展开效果，结果见图3。
根据三个品牌的硅胶g板可知，青岛海洋与青岛鼎康硅胶g板的分离度基本一致，说明其耐用性较好，烟台江友黄海硅胶hsg板是高效板，其分离开的斑点较其它两种普通硅胶g板多，从经济适用的角度选择普通硅胶g板。
2.2.2.2不同展开湿度的考察
分别以不同浓度硫酸调节的展开环境相对湿度为32％、58％、72％，在25℃温度下分别考察不同相对湿度展开的效果。
从图4结果所示，虽不同湿度下色谱图的条带清晰，但rf值一定差异，然而仍能较好鉴别药材，说明该湿度耐用性较好。
2.2.2.3不同展开温度的考察
分别在10℃，25℃，35℃，相对湿度为58％下展开，考察不同温度对展开的影响，如图5所示。
从图5结果所示，不同温度下色谱图的条带清晰，rf值差异不明显，说明该药材受温度的影响不大。
2.2.2.4供试品溶液稳定性考察
将同一批次的本品粉末于3天前、2天前、1天前、当天按上述的方法制备供试品溶液，分别点于同一硅胶g板上，展开，显色，如图6所示。
结果显示，放置1～3天的供试品溶液展开后的色谱图基本一致，表明供试品溶液在3天稳定性良好。
3.样品测定
照上述薄层色谱鉴别方法，对12批样品进行测定，结果图7所示。
结果显示，各批样品均符合规定。
实验例2：水分测定
照《中国药典》2015年版通则0832水分测定法(第二法烘干法)测定，取本品粉末(过二号筛)2g，精密称定，平铺于干燥恒重的扁形称量瓶中，厚度不超过5mm，精密称定，开启瓶盖在105℃干燥5小时，将瓶盖盖好，移置干燥器中，放冷30分钟，精密称定，再在上述温度干燥1小时，放冷，称重，至连续两次称重的差异不超过5mg为止，根据减失重量，计算供试品中含水量(％)，结果如表2所示。
表2酢浆草的水分测定结果
从表2结果可见，12批酢浆草水分含量范围是6.66％～12.1％。
实验例3：总灰分含量测定
照《中国药典》2015年版通则2302灰分测定法测定，取本品粉末3g，置炽灼至恒重的坩埚中，称定重量(准确0.01g)，缓缓炽灼，注意避免燃烧，至完全炭化时，逐渐升高温度至550℃，使完全灰化并至恒重，根据残渣重量，计算供试品中总灰分的含量(％)，结果见表3。
表3酢浆草的总灰分测定结果
从表3结果显示，12批酢浆草药材中总灰分9.16％～13.73％。
实验例4：酸不溶性灰分测定
取上项所得的灰分，在坩埚中小心加入稀盐酸10ml，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热10分钟，表面皿用热水5ml冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内的残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移置同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。根据残渣重量，计算供试品中酸不溶性灰分的含量(％)，结果见表4。结果显示，12批酢浆草药材中酸不溶性灰分1.58％～4.63％。
表4酢浆草的总灰分测定结果
实验例5：浸出物含量测定
根据酢浆草含的主要化学成分溶解性及使用习惯，选择研究其醇溶性浸出物。照《中国药典》2015年版四部通则2201浸出物测定法中醇溶性浸出物测定法热浸法，采用乙醇为溶剂进行浸出物测定；
取本品粉末(过二号筛)2g，精密称定，置100ml的锥形瓶中，精密加乙醇50ml，密塞，称定重量，静置1小时后，连接回流冷凝管，加热至沸腾，并保持微沸1小时，放冷后，取下锥形瓶，密塞，再称定重量，用乙醇补足减失重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25ml置已干燥至恒重的蒸发皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3小时，置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量，以干燥品计算供试品中醇溶性浸出物的含量(％)。结果如表5所示。
表5酢浆草的醇溶性浸出物测结果
根据12批次酢浆草醇溶性浸出物在5.22％～15.8％。
实验例5：异牡荆苷的含量测定
发明人在研究过程中发现，对于酢浆草，已有较多文献报道酢浆草含量有较多黄酮类和酚酸类化合物，报道其含有的化合物有牡荆素、异牡荆素、刺槐素、刺槐苷、酒石酸、香草酸、木樨草素、羟基肉桂酸、咖啡酸、槲皮素和没食子酸等，通过指纹图谱分析技术，用紫外及质谱检测器等，采用中国食品药品检定研究院购买的对照品，对咖啡酸、槲皮素、木樨草素、没食子酸、荭草素等指标成分进行多批次的指纹图谱分析，分析结果表明这些化合物含量过低，或在各批次药材差异较大，因此不适宜作为质量控制指标，通过对酢浆草的主要化学成分分析研究，发现异牡荆苷为其主要代表性黄酮类化合物，因此选用异牡荆苷作为酢浆草含量测定控制用指标成分。
根据本品的特点，参照(《中国药典》2015年版通则9101药品质量标准分析方法验证指导原则)和《贵州省中药材、民族药材质量标准及起草说明编写技术要求》相关内容，制定了hplc法测定酢浆草药材异牡荆苷的含量。
1仪器与试药
1.1仪器
ulmate3000型高效液相色谱仪(thermofisher，包括系统控制器、输液泵、脱气组件、低压梯度组件、自动进样器、柱温箱、温控样品室、μv-vis检测器及chromeleon色谱数据工作站)；el204型电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；allegra64r台式冷冻离心机(美国贝克曼)；wp-μp-iv-20型超纯水机(四川沃特尔科技发展有限公司)。
1.2试药
异牡荆苷(成都植标化纯生物技术有限公司，纯度98.47％，批号：170904)；乙腈(gr，国药集团化学试剂有限公司，批号：20170619)；甲醇(ar，国药集团化学试剂有限公司，批号：20170925)；磷酸；水为超纯水。
酢浆草药材信息同表1。
2色谱条件
色谱柱为venusilxbpc18(l)(4.6mm×250mm，5μm)；乙腈-0.1％磷酸溶液(15：85)为流动相，流速为1ml/min，色谱柱温度35℃，检测波长为338nm；进样量10μl，理论板数以异牡荆苷峰计算应不低于5000。
3供试品溶液制备
3.1提取方法考察
取同一批次酢浆草药材(20160924)，分别进行超声处理、索氏和回流提取三种提取方法的考察，分别提取1小时，结果如表6所示，结果表明采用回流提取时异牡荆苷提取率最高，因此确定回流提取为提取方法。
表6提取方法考察结果
3.2提取溶剂考察
取同一批次酢浆草药材(20160924)，分别对不同体积分数的甲醇、75％甲醇、50％甲醇、25％甲醇和95％乙醇、75％乙醇、50％乙醇、25％乙醇进行提取溶剂考察，分别回流提取1小时，结果如表7所示，结果表明50％甲醇对异牡荆苷提取率最高，故选择50％甲醇作为提取溶剂。
表7提取溶剂考察结果
3.3提取时间考察
取同一批次酢浆草药材(20160924)，以50％甲醇作为提取溶剂，采用回流方提取法分别提取0.5小时、1小时、2小时、4小时以考察提取时间，结果表明提取时间为1小时，异牡荆苷已提取完全，当时间继续增加时，提取率不再增加，因此确定提取时间为1小时。
表8提取时间考察结果
通过以上考察优化，供试品溶液制备方法为：取过三号筛的酢浆草药材粉末1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入50％甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀、滤过，取续滤液，即得。
4对照品溶液制备
取异牡荆苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇溶解，制成每1ml含异牡荆苷0.5219mg的溶液，摇匀，即得对照品储备液。精密量取对照品溶液储备液适量，配置成浓度为26.10μg/ml对照品溶液。
5方法学验证
5.1专属性试验
分别吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱(图8)。从图中可见，异牡荆苷的保留时间为14.0分钟，在本试验条件下异牡荆苷与其他组分峰的分离度大于1.5，供试品色谱中与对照品色谱中保留时间一致的色谱峰紫外光谱图一致(图9)，说明本方法专属性良好。理论板数以异牡荆苷峰计算为6000，故规定理论板数以异牡荆苷计算，应不低于5000。
5.2线性关系试验
分别精密量对照品储备液取适量，置于10ml容量瓶中，用50％甲醇稀释至刻度，摇匀，配得浓度为5.20，10.4，26.1，52.2，78.3μg/ml的系列对照品溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱峰面积，以对照品浓度(μg/ml)为横坐标(x)，峰面积为纵坐标(y)绘制工作曲线，进行回归处理，结果表明对照品浓度与峰面积呈良好的线性关系，回归方程：y＝573.18x-0.0319，r＝0.9990，线性范围：5.20～78.3μg/ml，其线性曲线如图10。
表9线性范围
5.3精密度试验
5.3.1重复性试验
分别取酢浆草药材(20160924)粉末0.5g、1g、1.5g各3份，精密称定，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液9份；按对照品溶液制备方法制备对照品溶液。分别进样对照品溶液和供试品溶液测定计算，结果见表10，表明该方法重复性良好。
表10重复性试验表
5.3.2中间精密度试验
以不同的实验人，在不同时间按上述方法分别取酢浆草药材(20160924)粉末1g3份，精密称定，分别按供试品溶液制备方法制备供试品溶液；按对照品溶液制备方法制备对照品溶液，分别进样对照品溶液和各供试品溶液。结果见表11，不同日期、不同分析人员检测结果表明方法的中间精密度良好。
表11中间精密度试验表
5.4回收率试验
取6份已知含量的酢浆草药材(20160924)粉末0.5g，精密称定，按称量样品被测定成分的本底值加入异牡荆苷对照品，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液；按对照品溶液制备方法制备对照品溶液，分别进样对照品溶液和供试品溶液。结果见表12，表明该方法准确度良好。
表12回收率试验结果
5.5耐用性试验
5.5.1供试品溶液稳定性试验
按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，在0、1、2、4、8、24小时分别进样5次记录色谱图，考察供试品溶液稳定性，计算结果见表13，表明供试品溶液在24小时内稳定。
表13稳定性试验考察
5.5.2不同流动相比例
按供试品溶液制备方法平行制备3份供试品溶液，按对照品溶液制备方法制备对照品溶液，按拟定色谱条件，只改变流动相比例，即分别以乙腈-0.1％磷酸溶液(14：86)、乙腈-0.1％磷酸溶液(15：85)和乙腈-0.1％磷酸溶液(16：84)为流动相，进样对照品溶液和供试品溶液，记录色谱图，计算含量，结果见表14。
表14不同流动相比例测定结果比较
5.5.3不同ph值考察
按供试品溶液制备方法平行制备3份供试品溶液，按对照品溶液制备方法制备对照品溶液，按拟定色谱条件，只改变水相酸度，即分别以乙腈-0.05％磷酸溶液(15：85)、乙腈-0.1％磷酸溶液(15：85)和乙腈-0.15％磷酸溶液(15：85)为流动相，进样对照品溶液和供试品溶液，记录色谱图，计算含量，结果见表15。
表15不同ph值测定结果比较
5.5.4不同流速考察
按供试品溶液制备方法平行制备3份供试品溶液，按对照品溶液制备方法制备对照品溶液，按拟定色谱条件，只改变流速，即分别以0.9、1.0和1.1ml/min为流速，进样对照品溶液和供试品溶液，记录色谱图，计算含量，结果见表16。
表16不同流速测定结果比较
5.5.5不同色谱柱比较
按供试品溶液制备方法平行制备3份供试品溶液，按对照品溶液制备方法制备对照品溶液，按拟定色谱条件，以不同色谱柱，进样对照品溶液和供试品溶液，记录色谱图，计算含量，结果见表17。
表17不同色谱柱测定结果比较
5.5.6不同检测波长
按供试品溶液制备方法平行制备3份供试品溶液，按对照品溶液制备方法制备对照品溶液，按拟定色谱条件，以同一支色谱柱，只改变检测波长，即分别以335、338和340nm为波长，进样对照品溶液和供试品溶液，记录色谱图，计算含量，结果见表18。
表18不同检测波长测定结果比较
5.5.7不同色谱柱温度
按供试品溶液制备方法平行制备3份供试品溶液，按对照品溶液制备方法制备对照品溶液，按拟定色谱条件，只改变色谱柱温度，即分别以32、35和38℃为柱温，进样对照品溶液和供试品溶液，记录色谱图，计算含量，结果见表19。
表19不同色谱柱温度测定结果比较
5.5.8不同型号仪器
按供试品溶液制备方法平行制备3份供试品溶液，按对照品溶液制备方法制备对照品溶液，按拟定色谱条件，以同一支色谱柱，在不同液相色谱仪，即分别以ulmate3000(双三元)、ulmate3000和岛津prominencelc-20a进样对照品溶液和供试品溶液，记录色谱图，计算含量，结果见表20。
表20不同厂家和型号hplc测定结果比较
6样品测定
取各批次酢浆草药材粉末1g各两份，精密称定，按供试品溶液制备方法制备供试品溶液，按对照品溶液制备方法制备对照品溶液，在拟定的条件下进样分析，记录色谱图，计算含量，结果见表21。结果表明12批酢浆草药材异牡荆苷含量在0.036％～0.14％之间。
表21酢浆草药材含量测定结果
本发明的有益效果在于：提供一种酢浆草的检测方法；采用薄层色谱鉴别试验对酢浆草进行鉴别，对酢浆草水分、总灰分、酸不溶性灰分、浸出物进行测定，并对异牡荆苷的含量进行测定，该检测方法准确，灵敏度高，重复性好，结果可靠，能有效控制酢浆草的质量，确保酢浆草的药效。
附图说明
图1是原标准方法tlc色谱图；1～3为3批样品；4为对照药材；
图2是酢浆草薄层色谱鉴别系统适用性试验图；1～5为5批样品；6为对照药材；
图3是不同品牌薄层色谱硅胶g板展开tlc图；1～3为3批样品；4为对照药材；
图4是不同展开湿度tlc图；1～3为3批样品；4为对照药材；
图5是不同展开温度tlc图；1～3为3批样品；4为对照药材
图6是供试品溶液稳定性考察tlc图；1为当天；2为放置1天；3为放置2天；4为放置3天；5为对照药材；
图7是12批样品的tlc图；1～12为12批样品；13为对照药材；
图8是对照品及供试品溶液色谱图；
图9是对照品及供试品溶液光谱图；
图10是线性曲线；
图11是酢浆草药材显微鉴别图；1-非腺毛，2-气孔，3-花粉粒，4-导管，5-草酸钙方晶，6-表皮细胞，7-种皮细胞，8-纤维。
下面结合实施例对本发明作进一步的说明
具体实施方式
实施例：
一种酢浆草的检测方法，
【性状】本品根呈圆柱形，略扭曲，有分支，表面棕色或棕红色，具纵纹，根头部稍膨大，质硬，易折断，断面灰白色；茎、枝被疏长毛；叶互生，掌状复叶，有柄，托叶与叶柄连生，小叶3枚，倒心脏形，长5～10cm，无柄；花黄色，萼片、花瓣均5片；蒴果近圆柱形，棱5条，被柔毛，种子小，扁卵形，褐色；具酸气，味咸而酸涩。
【鉴别】(1)本品粉末灰褐色至黄褐色；非腺毛甚多，主要为单细胞，先端尖，壁厚，具疣状突起；可见另一种非腺毛，先端钝圆，壁薄光滑；草酸钙方晶在茎薄壁细胞，呈方形，直径3～20μm；纤维纹孔明显，壁厚，直径5～32μm；导管为螺纹导管、梯纹导管及具缘纹孔导管。
(2)取本品粉末0.5g，加甲醇10ml，超声处理30分钟，滤过，取滤液作为供试品溶液；另取酢浆草对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液；照《中国药典》薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl，分别点于同一硅胶g板上，以三氯甲烷：甲醇：甲酸＝8：1：0.1为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【检查】
水分取干酢浆草，照《中国药典》2015年版四部通则0832第二法进行检测；
总灰分取干酢浆草，照《中国药典》2015年版四部通则2302进行检测；
酸不溶性灰分取干酢浆草，照《中国药典》2015年版四部通则2302进行检测；
【浸出物】取干酢浆草，照《中国药典》2015年版四部通则2201醇溶性浸出物测定法项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂；
【含量测定】照《中国药典》高效液相色谱法测定；
色谱条件及系统适用性试验，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈：0.1％磷酸溶液＝15：85为流动相；检测波长为338nm；理论板数按异牡荆苷峰计算不低于5000；
对照品溶液的制备：取异牡荆苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含26μg的溶液，即得；
供试品溶液的制备：取过三号筛的本品粉末1g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入50％甲醇25ml，称定重量，加热回流1小时，放冷，再称定重量，用50％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。