本发明涉及病理检测试剂领域，尤其是一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂。
背景技术：
据报道中国每年新增癌症患者占全球新增数量的20%以上，癌症患者的早期诊断和早期治疗是提高患者存活率的关键。目前癌症的早期诊断主要依靠病理切片进行判断，所以实现快速高效的病理切片染色技术就显得非常重要。传统的病理组织石蜡切片的制作过程中，透明、脱蜡效果的好坏直接影响到石蜡制片的质量，常用的透明剂有二甲苯、苯、氯仿等，其中以二甲苯应用最为广泛。二甲苯等传统透明剂易挥发、有毒性，长时间浸泡组织会使组织变脆和收缩，不利于切片，而且医护人员长期吸入或皮肤接触二甲苯等传统透明剂时将直接危害身体健康。
为解决这一问题，部分本领域技术人员研发出了微毒或无毒的脱蜡透明剂。此类试剂大多采用松节油等油类及其油类提取物为主要成分，具有一定透明脱蜡效果，能够替代二甲苯作为病理组织处理过程的脱蜡透明剂。但是松节油等油类及其油类提取物刺鼻性气味太大，而且由于自然资源的枯竭或价格太贵等种种原因，并不适宜在病理组织切片制作过程中推广应用。
因此，如何提供一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂，无毒、无刺激性气味，且长时间浸泡组织不会使组织变脆和收缩，是本领域技术人员亟待解决的问题。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂，克服前述现有技术中存在的不足，配方简单，搭配合理，能够充当病理组织切片制作过程中的透明剂和脱蜡剂，使得在病理组织切片过程中完全脱离二甲苯。
本发明解决其技术问题所采取的技术方案是：
一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂，主要由以下体积份数的原料配制而成：长链碳氢化合物30-50份，长链碳氢化合物衍生物30-50份，高级醇1-10份，白油1-10份，异构烷烃30-50份。
进一步的，所述不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂，主要由以下体积份数的原料配制而成：长链碳氢化合物40份，长链碳氢化合物衍生物40份，高级醇5份，白油5份，异构烷烃40份。
进一步的，所述长链碳氢化合物为正庚烷，或为正己烷，或为正庚烷和正己烷按2-5:3-9的体积比配制而成。
进一步的，所述长链碳氢化合物衍生物为异构十三烷醇，或为异构十四烷醇，或为异构十三烷醇和异构十四烷醇按1-5:2-7的体积比配置而成。
进一步的，所述高级醇为正己醇，或为正庚醇，或为正己醇和正庚醇按2-4:3-5的体积比配制而成。
进一步的，所述白油为3号白油、5号白油、10号白油中的任意一种，或为3号白油和5号白油按2:5-7的体积比配制而成，或为3号白油和10号白油按1:3-4的体积比配制而成，或为5号白油和10号白油按1-5:2-9的体积比配制而成。
进一步的，所述异构烷烃为异构十二烷、异构十六烷、异构二十烷中的任意一种，或为异构十二烷和异构十六烷按1-3:2-4的体积比配制而成，或为异构十二烷和异构二十烷按2-6:3-5的体积比配制而成，或为异构十六烷和异构二十烷按1-3:5-8的体积比配制而成。
一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂的制备方法，包括如下制备步骤：
s1、按规定体积份数依次称取长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃；
s2、将步骤s1中称取的长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃倒入液体搅拌机中，液体搅拌机转数设置为80-130r/min，搅拌5-10min，即得。
一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂在病理组织切片的制备过程中充当透明剂、脱蜡剂的应用。
一种病理切片的制备方法，包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、染色、再脱水、再透明和封片步骤，其中：
透明步骤中，将酒精脱水后的病理组织放入所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡40-80min，重复浸泡1次；
脱蜡步骤中，将处理好的病理组织石蜡切片放入所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡5-10min，重复浸泡2次；
再透明步骤中，将酒精再脱水后的病理组织放入所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡2-5min，重复浸泡2次。
本发明的有益效果是：与现有技术相比，本发明的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂具有以下有益效果：
（1）本发明的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂主要由长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃组成，无毒，无刺激性气味，既能用于透明，又能用于脱蜡，比二甲苯的透明、脱蜡效果好，是病理组织切片制备过程中替代二甲苯的理想试剂；
（2）本发明的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂能够长时间浸泡病理组织，不会使病理组织变脆和收缩，能够增强浸蜡效果，有利于切片；
（3）采用本发明的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂制备的病理组织切片脱蜡透明效果更显著，组织细胞结构清晰、背景对比度高，可长期存放，对组织抗原无影响；
（4）本发明的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂作用柔和，符合国家gb18583-2001环保标准。
附图说明
图1为采用传统石蜡切片制备方法且以二甲苯作为透明剂处理后得到的卵巢组织石蜡切片；
图2为采用本发明的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂处理后得到的卵巢组织石蜡切片。
具体实施方式
实施例1
一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂，主要由以下体积份数的原料配制而成：长链碳氢化合物30份，长链碳氢化合物衍生物30份，高级醇1份，白油1份，异构烷烃30份。所述长链碳氢化合物为正庚烷，所述长链碳氢化合物衍生物为异构十三烷醇，所述高级醇为正己醇，所述白油为3号白油，所述异构烷烃为异构十二烷。
本实施例的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂的制备方法，包括如下步骤：
s1、按规定体积份数依次称取长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃；
s2、将步骤s1中称取的长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃倒入液体搅拌机中，液体搅拌机转数设置为105r/min，搅拌5min，即得。
本实施例的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂在制备甲状腺病理切片过程中充当透明剂、脱蜡剂的应用，所述甲状腺病理切片制备过程包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、染色、再脱水、再透明和封片步骤，其中：
透明步骤中，将酒精脱水后的甲状腺病理组织放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡60min，重复浸泡1次；
脱蜡步骤中，将处理好的甲状腺病理组织石蜡切片放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡10min，重复浸泡2次；
再透明步骤中，将酒精再脱水后的甲状腺病理组织放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡5min，重复浸泡2次。
本实施例中得到的甲状腺的病理切片完整、染色鲜艳、结构清晰、层次分明、组织无明显收缩，符合优质he切片的要求。
实施例2
一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂，主要由以下体积份数的原料配制而成：长链碳氢化合物50份，长链碳氢化合物衍生物50份，高级醇10份，白油10份，异构烷烃50份。所述长链碳氢化合物为正己烷，所述长链碳氢化合物衍生物为异构十四烷醇，所述高级醇为正庚醇，所述白油为5号白油，所述异构烷烃为异构十六烷。
本实施例的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂的制备方法，包括如下步骤：
s1、按规定体积份数依次称取长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃；
s2、将步骤s1中称取的长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃倒入液体搅拌机中，液体搅拌机转数设置为105r/min，搅拌10min，即得。
本实施例的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂在制备肺病理切片过程中充当透明剂、脱蜡剂的应用，所述肺病理切片制备过程包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、染色、再脱水、再透明和封片步骤，其中：
透明步骤中，将酒精脱水后的肺病理组织放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡50min，重复浸泡1次；
脱蜡步骤中，将处理好的肺病理组织石蜡切片放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡6min，重复浸泡2次；
再透明步骤中，将酒精再脱水后的肺病理组织放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡3min，重复浸泡2次。
本实施例中得到的肺的病理切片完整、染色鲜艳、结构清晰、层次分明、组织无明显收缩，符合优质he切片的要求。
实施例3
一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂，主要由以下体积份数的原料配制而成：长链碳氢化合物35份，长链碳氢化合物衍生物45份，高级醇3份，白油6份，异构烷烃40份。所述长链碳氢化合物为正庚烷和正己烷按2:3的体积比配制而成，所述长链碳氢化合物衍生物为异构十三烷醇和异构十四烷醇按3:4的体积比配置而成，所述高级醇为正己醇，所述白油为3号白油和10号白油按1:4的体积比配制而成，所述异构烷烃为异构二十烷。
本实施例的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂的制备方法，包括如下步骤：
s1、按规定体积份数依次称取长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃；
s2、将步骤s1中称取的长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃倒入液体搅拌机中，液体搅拌机转数设置为105r/min，搅拌8min，即得。
本实施例的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂在制备肝病理切片过程中充当透明剂、脱蜡剂的应用，所述肝病理切片制备过程包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、染色、再脱水、再透明和封片步骤，其中：
透明步骤中，将酒精脱水后的肝病理组织放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡70min，重复浸泡1次；
脱蜡步骤中，将处理好的肝病理组织石蜡切片放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡8min，重复浸泡2次；
再透明步骤中，将酒精再脱水后的肝病理组织放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡3min，重复浸泡2次。
本实施例中得到的肝的病理切片完整、染色鲜艳、结构清晰、层次分明、组织无明显收缩，符合优质he切片的要求。
实施例4
一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂，主要由以下体积份数的原料配制而成：长链碳氢化合物40份，长链碳氢化合物衍生物40份，高级醇5份，白油5份，异构烷烃40份。所述长链碳氢化合物为正庚烷，所述长链碳氢化合物衍生物为异构十三烷醇，所述高级醇为正己醇和正庚醇按3:4的体积比配制而成，所述白油为3号白油和5号白油按2:5的体积比配制而成，所述异构烷烃为异构十二烷。
本实施例的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂的制备方法，包括如下步骤：
s1、按规定体积份数依次称取长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃；
s2、将步骤s1中称取的长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃倒入液体搅拌机中，液体搅拌机转数设置为105r/min，搅拌7min，即得。
本实施例的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂在制备卵巢病理切片过程中充当透明剂、脱蜡剂的应用，所述卵巢病理切片制备过程包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、染色、再脱水、再透明和封片步骤，其中：
透明步骤中，将酒精脱水后的卵巢理组织放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡50min，重复浸泡1次；
脱蜡步骤中，将处理好的卵巢病理组织石蜡切片放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡10min，重复浸泡2次；
再透明步骤中，将酒精再脱水后的卵巢病理组织放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡3min，重复浸泡2次。
本实施例中得到的卵巢的病理切片完整、染色鲜艳、结构清晰、层次分明、组织无明显收缩，符合优质he切片的要求。
实施例5
一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂，主要由以下体积份数的原料配制而成：长链碳氢化合物45份，长链碳氢化合物衍生物45份，高级醇1-106份，白油8份，异构烷烃35份。所述长链碳氢化合物为正庚烷和正己烷按5:9的体积比配制而成，所述长链碳氢化合物衍生物为异构十三烷醇和异构十四烷醇按2:5的体积比配置而成，所述高级醇为正己醇，所述白油为5号白油和10号白油按3:7的体积比配制而成，所述异构烷烃为异构十六烷和异构二十烷按1:6的体积比配制而成，
本实施例的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂的制备方法，包括如下步骤：
s1、按规定体积份数依次称取长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃；
s2、将步骤s1中称取的长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃倒入液体搅拌机中，液体搅拌机转数设置为105r/min，搅拌10min，即得。
本实施例的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂在制备乳腺病理切片过程中充当透明剂、脱蜡剂的应用，所述乳腺病理切片制备过程包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、染色、再脱水、再透明和封片步骤，其中：
透明步骤中，将酒精脱水后的乳腺病理组织放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡60min，重复浸泡1次；
脱蜡步骤中，将处理好的乳腺病理组织石蜡切片放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡8min，重复浸泡2次；
再透明步骤中，将酒精再脱水后的乳腺病理组织放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡2min，重复浸泡2次。
本实施例中得到的乳腺的病理切片完整、染色鲜艳、结构清晰、层次分明、组织无明显收缩，符合优质he切片的要求。
实施例6
一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂，主要由以下体积份数的原料配制而成：长链碳氢化合物38份，长链碳氢化合物衍生物45份，高级醇4份，白油6份，异构烷烃35份。所述长链碳氢化合物为正庚烷和正己烷按3:7的体积比配制而成，所述长链碳氢化合物衍生物为异构十三烷醇，所述高级醇为正己醇，所述白油为10号白油；所述异构烷烃为异构十二烷和异构十六烷按3:4的体积比配制而成。
本实施例的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂的制备方法，包括如下步骤：
s1、按规定体积份数依次称取长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃；
s2、将步骤s1中称取的长链碳氢化合物、长链碳氢化合物衍生物、高级醇、白油和异构烷烃倒入液体搅拌机中，液体搅拌机转数设置为105r/min，搅拌7min，即得。
本实施例的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂在制备前列腺病理切片过程中充当透明剂、脱蜡剂的应用，所述前列腺病理切片制备过程包括取材、固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、脱蜡、染色、再脱水、再透明和封片步骤，其中：
透明步骤中，将酒精脱水后的前列腺病理组织放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡60min，重复浸泡1次；
脱蜡步骤中，将处理好的前列腺病理组织石蜡切片放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡8min，重复浸泡2次；
再透明步骤中，将酒精再脱水后的前列腺病理组织放入本实施例所述的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂中，于常温下浸泡3min，重复浸泡2次。
本实施例中得到的前列腺的病理切片完整、染色鲜艳、结构清晰、层次分明、组织无明显收缩，符合优质he切片的要求。
实施例7
本实施例为对比例，本实施例的目的在于制备一种卵巢病理切片，本实施例的一种卵巢病理切片的制备过程与实施例4中的卵巢病理切片制备过程类似，其区别在于：透明步骤、脱蜡步骤和再透明步骤中将实施例4中采用的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂换成二甲苯。
实验例8一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂和二甲苯性能比较
实验材料：实施例7中制备得到的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂和卵巢病理切片，以及实施例7中使用的二甲苯和使用二甲苯制备得到的卵巢病理切片；
实验方法如下：
溶蜡速率测定：准确称取两份医用切片石蜡各2g，分别放入50ml的烧杯中，将烧杯放入烘箱，烘箱温度调到70℃，0.5h，待蜡完全溶解后取出烧杯冷却，使石蜡凝结。分别向两个烧杯中加入30ml实施例4中制得的不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂和30ml实施例7中的二甲苯，将两烧杯分别置于磁力搅拌器上，常温下以相同转速搅拌，记录两个烧杯中石蜡完全溶解的时间。
饱和溶蜡量测定：准确称取两份医用切片石蜡各30g，分别放入150ml的烧杯中，将烧杯放入烘箱，烘箱温度调到70℃，0.5h，待蜡完全溶解后取出烧杯冷却，使石蜡凝结。分别向两个烧杯中加入30ml实施例4中制得的不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂和30ml实施例7中的二甲苯，将两个烧杯在常温下放置12h后在设置为室温温度的烘箱中过滤，将两个烧杯中的不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂和二甲苯抽干，根据溶解前后蜡的质量差，计算饱和溶蜡量。
气味、毒性、切片裂痕观察：分别取实施例4和实施例7中制备得到的卵巢病理切片，观察其气味，分析其毒性，并观察切片有无裂痕情况。
制备病理切片的效果：分别观察实施例4和实施例7张制备得到的卵巢病理切片，对制得的病理切片外管进行分析。
实验比对结果如表1所示：
表1
由表1可知，本发明制备得到的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂与二甲苯相比无味无毒，且溶蜡量大、脱蜡速度快、脱蜡效果好，采用实施例4中的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂处理制得的卵巢石蜡切片如图2所示，切片完整、染色鲜艳、结构清晰、层次分明、组织无明显收缩，且硬度适中，蜡块容易连续切片。对比图1中采用传统石蜡切片制备方法且以二甲苯作为透明剂处理后得到的卵巢组织石蜡切片，本发明的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂脱蜡、透明效果更优。
采用前述溶蜡速率测定方法和饱和溶蜡量测定方法测定实施例1-6中制备得到的不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂的溶蜡速率和饱和溶蜡量，测试结果如表2所示：
表2
由表2可知，本发明的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂溶蜡速率均介于7.7-8.1mg/ml.min之间，饱和溶蜡量介于905-926mg/ml之间，缩短了脱蜡透明处理时间，脱蜡和透明效果显著，对病理切片的快速制备起到了促进作用，极大地提高了病人拿到病理诊断结果的效率。
综上所述，本发明的一种不含二甲苯的新型环保脱蜡透明剂配方简单，搭配合理，作用柔和，无毒，无刺激性气味，既能用于透明，又能用于脱蜡，能够长时间浸泡病理组织，不会使病理组织变脆和收缩，能够增强浸蜡效果，有利于切片，制得的病理切片组织细胞结构清晰、背景对比度高，比二甲苯的透明、脱蜡效果好，是病理组织切片制备过程中替代二甲苯的理想试剂。
上述具体实施方式仅是本发明的具体个案，本发明的专利保护范围包括但不限于上述具体实施方式的产品形态和式样，任何符合本发明权利要求书且任何所属技术领域的普通技术人员对其所做的适当变化或修饰，皆应落入本发明的专利保护范围。