本发明属于农业工程和农作物信息检测技术领域，具体涉及一种测定特定夹持力下的植物生理阻抗的方法及装置，可以快速、无损的检测植物叶片的生理阻抗和静息阻抗。
背景技术：
植物细胞由细胞壁和原生质体两部分组成，原生质体是由生命物质-原生质所构成。两个主要的电解内含物：液泡和细胞质分别被液泡膜和原生质膜包围。细胞质含有大量由特定膜包围的细胞器，液泡内的水溶性溶液主要含有无机离子和有机酸。电流通过细胞膜时产生电势差，电势差由细胞膜的有效运输系统和可选择的渗透特性来保持。细胞器具有不同的电学特性，液泡和细胞质类似于电阻器，在叶肉细胞里，液泡和细胞质占据了细胞内绝大部分空间，细胞膜具有电容特性。当交变电流(ac)通过植物组织时，通过胞外间隙和胞内的比例取决于ac频率和组织特性。在ac电路中，由电阻器和电容器阻抗电流，阻抗即为电阻器和电容器对电流抵抗之和。植物细胞的阻抗特性取决于生理条件、发育阶段、养分状况、细胞结构、水分平衡以及温度等。
同一对象在同一环境下的阻抗测定中，阻抗大小主要取决于膜内外离子浓度及其梯度比值，所以膜对各种离子的通透性大小以及含水量决定了细胞阻抗大小，而对于叶片来说，阻抗则更是取决于膜内外离子的浓度。外界激励改变离子的膜通透性，影响了膜内外离子的浓度，而膜内外离子浓度差服从能斯特(nernst)方程，生理阻抗则与细胞内离子浓度成反比，由此可推导出，细胞的生理阻抗与外界激励的关系。
目前测定植物的生理阻抗时通常出现重复性差，不同人不同时间不同地点，或者同一个人不同时间不同地点、甚至同一个人、同一地点不同时间测定同一状态的叶片结果差异较大，严重地影响测定结果的准确性，使测定结果难以分析，更不具备可比性。究其原因是由于每次测定施加不同的夹持力，造成结果的偏差，为了准确地比较植物生理阻抗，使不同批次的测定结果具有可比性，固定lcr电极板的夹持力，获得特定夹持力下的植物生理阻抗是当前植物电生理研究的当务之急！本发明通过调节夹持力，测定在不同夹持力下植物叶片的生理阻抗，构建夹持力与植物叶片生理阻抗耦合模型，依据耦合模型获取特定夹持力下的植物生理阻抗和静息阻抗。
技术实现要素：
本发明的目的在于提供一种测定特定夹持力下的植物生理阻抗的方法及装置，以克服现有技术中无法测定静息阻抗，以及测定结果重复性差，不具备可比性的缺陷。
为了解决以上技术问题，本发明采用的具体技术方案如下：
一种测定特定夹持力下的植物生理阻抗的方法，包括以下步骤：
步骤一，将测定装置与lcr测试仪连接；
步骤二，选取生长在不同环境下带有叶片的待测植物的新鲜枝条，并包住枝条基部；
步骤三，清理新鲜枝条上叶片，并采摘长势较为一致的叶片；
步骤四，将叶片夹在测定装置平行电极板之间，设置测定电压、频率，通过改变铁块的质量来设置所需的特定夹持力，并测定在不同夹持力下的植物生理阻抗；
步骤五，构建植物叶片生理阻抗的耦合模型，获得模型的各个参数；
步骤六，将耦合模型的夹持力代入步骤五模型，计算出不同夹持力下的生理阻抗，比对实测值与计算值，找出模型的适用范围；
步骤七，将需要的被考察的夹持力，代入上述步骤五中，可计算获得被考察植物叶片在特定夹持力下的生理阻抗；
步骤八，令夹持力等于0，代入上述步骤五模型中，可计算获得被考察植物叶片的静息阻抗。
进一步，所述测定装置包括支架、泡沫板、电极板、导线、铁块、塑料棒及固定夹，支架为矩形框架结构、且一侧开放，支架上端开有通孔，供塑料棒伸入，支架下端朝内一侧及塑料棒底端分别粘有两个泡沫板，泡沫板内镶嵌电极板，两个电极板各自引出一根导线，塑料棒的泡沫板上可放置不同质量的铁块，塑料棒位于支架内部的一端由固定夹进行固定；所述电极板为圆形极板，所述电极板的材质为铜。
进一步，所述步骤五中，植物叶片生理阻抗的耦合模型为：
本发明具有有益效果为：
1.本发明通过在塑料棒的上下移动，使得两极板之间的距离能实现灵活调整，从而可以测量不同厚度的植物叶片；通过两个泡沫板分别粘在支架底端和塑料棒上，在塑料棒上添加一定质量的铁块来改变装置的压力，使得测量时不会损坏植物叶片，可以无损地在线检测不同厚度的植物叶片的生理电容，简化了结构；考虑到经济性和实用性，并且由于圆形电极可减少电极的边缘效应，所以本发明选择铜材料的圆形电极板。
2.本发明可以测定特定夹持力下的植物生理阻抗，使不同批次的测定结果具有可比性。
3.本发明可以通过构建的夹持力与植物叶片的生理阻抗模型计算任一夹持力下的植物生理阻抗，因此，减少了工作量，适用于夹持力微小变化下的植物生理阻抗的测定。
4.本发明简便，适合夹持力低的植物生理阻抗测定，尤其是对无夹持力的情况下的植物叶片静息阻抗的预测，非常适用。
附图说明
图1为本发明的结构示意图；
图2为本发明测定方法流程图；
图中：1.支架；2.泡沫板；3.电极板；4.电导线；5.铁块；6.塑料棒；7.固定夹。
具体实施方式
下面结合附图与实施例对本发明作进一步说明。
本发明的基本原理为：
由重力学公式：
f＝(m+m)g(1)
式中f为重力(夹持力)，n；m为铁块质量，m为塑料棒与电极片的质量，kg；g是重力加速度为9.8，n/kg。
同一对象在同一环境下的阻抗测定中，阻抗大小主要取决于膜内外离子浓度及其梯度比值，所以膜对各种离子的通透性大小以及含水量决定了细胞阻抗大小，而对于叶片来说，阻抗则更是取决于膜内外离子的浓度。外界激励改变离子的膜通透性，影响了膜内外离子的浓度，而膜内外离子浓度差服从能斯特(nernst)方程，在膜外离子浓度一定时，生理阻抗则与细胞内离子浓度成反比，由此可推导出，细胞的生理阻抗与外界激励的关系。
植物细胞水分的多少关系着植物叶片细胞弹性的强弱，在特定夹持力下，不同植物细胞膜的通透性发生不同的改变，因此其生理阻抗是不同的。
能斯特方程的表达式如(2)式：
其中，e为电动势；e0为标准电动势；r是理想气体常数，等于8.314570j.k-1.mol-1，t是温度，单位k；ci为细胞膜内浓度；co为细胞膜外浓度；f0是法拉第常数，等于96485c.mol-1；n是通透离子转移数，单位mol。
电动势e的内能可转化成压力做功，与pv成正比pv＝ae，即：
其中：p为植物细胞受到的压强，a是电动势转换能量系数，v为植物细胞体积；
植物细胞受到的压强p可由压强公式求出，压强公式：
在叶肉细胞里，液泡和细胞质占据了细胞内绝大部分空间。对叶肉细胞而言，co与ci之和是一定的，等于膜内外通透离子总量c，ci则与电导率成正比，而电导率为阻抗z的倒数，因此，
(4)式变形，得
(5)可变成：
(6)式两边取指数，可变成：
进一步变形，可得：
式(8)中z为生理阻抗，对于同一个待测叶片在同一环境下，v、s、a、e0、r、t、n、f0、c、f都为定值，令
z＝y0+ke-bf(9)
(9)式y0、k和b为模型的参数。
本发明就是将需要的被考察的夹持力，代入上述模型(9)中，来获得被考察植物叶片在特定夹持力下的生理阻抗；其中在没有夹持力的情况下，得到的植物叶片的静息阻抗z0，计算公式为：z0＝y0+k。
一种基于生理电阻的植物叶片导水度和固有导水度的测定装置，如图1所示，由支架1、泡沫板2、电极板3、电导线4、铁块5、塑料棒6、固定夹7组成；支架1为矩形框架结构、且一侧开放，支架1上端开有通孔，供塑料棒6伸入，支架1下端朝内一侧及塑料棒6底端分别粘有两个泡沫板2，泡沫板2内镶嵌电极板3，两个电极板3各自引出一根导线4，用于与lcr测试仪(hioki3532-50型，日本日置)连接，塑料棒6的泡沫板2上可放置不同质量的铁块5，从而改变装置的压力，测定在不同夹持力下植物叶片的生理电容；塑料棒6位于支架内部的一端由固定夹7进行固定，当塑料棒下端与支架端合在一起时，两个电极板3就完全对应在一起；电极板3为材质为铜的圆形极板，以减少电极的边缘效应。
本发明的使用步骤如下：使用时先将本发明装置的两根导线4与lcr测试仪的9140四端子测试探头相连，再抬起塑料棒6，使两电极板3将待测量的植物叶片夹持住，电极板的直径为10mm，设置测定电压1.5伏，测定频率为3000hz，塑料棒与电极片的质量为0.017kg，通过添加已知质量为0.1kg的铁块数目来改变铁块5的质量，从而改变装置的压力，测定在不同夹持力下植物叶片的生理电阻。
实施例1：以构树为例。在江苏大学校园内采摘长势较为一致的不同生长环境下带有叶片的构树新鲜枝条来进行测定，快速检测构树在特定夹持力下的植物生理阻抗。
步骤一，将测定装置与lcr测试仪连接；
步骤二，选取生长在水边和土里带有叶片的构树新鲜枝条，并用湿棉花包住枝条基部，以减缓水分散发；
步骤三，迅速返回实验室，清理所述新鲜枝条上叶片表面灰尘后，采摘所述新鲜枝条上长势较为一致的叶片；
步骤四，将叶片夹在平行板之间，设置测定电压1.5伏，测定频率为3000hz，通过增加不同质量的铁块来设置所需的特定夹持力，迅速测定在不同夹持力下的构树叶片生理阻抗(如表1)；
步骤五，利用sigmplot软件将不同夹持力及其对应的生理阻抗数据拟合成构建基于能斯特方程的植物叶片的生理阻抗与夹持力变化的耦合模型，获得模型的各个参数，如表2；其中r2为决定系数的平方，n为样本数，p为显著性指标；
步骤六，将构建模型的夹持力代入上述耦合模型，计算出不同夹持力下的生理阻抗如表3，比对实测值与计算值，找出模型的适用范围；
步骤七，将需要的在适用范围内的被考察的夹持力1.43n、2.63n以及3.81n，代入上述耦合模型中，计算出构树叶片在1.43n、2.63n和3.81n夹持力下的生理阻抗，如表4。
步骤八，将夹持力等于0，代入上述模型中，可计算获得构树叶片的静息阻抗如表5。
表1不同环境下生长的构树在不同夹持力f(单位n)下的生理阻抗z(单位mω)
表2不同环境下生长的构树叶片生理阻抗z与夹持力f变化的耦合模型及参数
表3依据耦合模型计算的不同环境下生长的构树在不同夹持力f(单位n)下的生理阻抗z(单位mω)
表4在不同环境下生长的构树叶片在不同的被考察的夹持力f(单位n)下的生理阻抗z(单位mω)
表5在不同环境下生长的构树叶片的静息阻抗z(单位mω)
实施例2：以桑树为例，在江苏大学校园内采摘长势较为一致的不同生长环境下带有叶片的桑树新鲜枝条来进行测定，快速检测桑树在特定夹持力下的植物生理阻抗。所有步骤同实施例1。
设置测定电压1.5伏，测定频率为3000hz，测得的在不同夹持力下的桑树叶片生理阻抗，如表6所示。基于能斯特方程推导出的植物叶片生理阻抗与夹持力变化的耦合模型以及各个参数如表7；将构建模型的夹持力代入上述模型，计算出不同夹持力下的生理阻抗如表8，桑树叶片在1.43n、2.63n和3.81n夹持力下的生理阻抗如表9，桑树叶片的静息阻抗如表10。
表6不同环境下生长的桑树在不同夹持力f(单位n)下的生理阻抗z(单位mω)
表7不同环境下生长的桑树叶片生理阻抗z与夹持力f变化的耦合模型及参数
表8依据耦合模型计算的不同环境下生长的桑树在不同夹持力f(单位n)下的生理阻抗z(单位mω)
表9在不同环境下生长的桑树叶片在不同的被考察的夹持力f(单位n)下的生理阻抗z(单位mω)
表10在不同环境下生长的桑树叶片的静息阻抗z(单位mω)
本发明的实施效果如下：
从表2和表7可以看出，构建的叶片生理阻抗与夹持力变化的耦合模型能够很好地表征叶片生理阻抗与夹持力变化关系(p<0.0001)。对比表3与表1、表8与表6，可以发现，在较低的夹持力范围内测定的误差较小，两种植物的适用测定夹持力均为1.17-4.17n，对于构树来说，在测定夹持力为1.17-4.17n范围内的测定总体偏差(偏正与偏负误差抵消)仅为4.48％，对于桑树来说，在测定夹持力为1.17-4.17n范围内的测定总体偏差(偏正与偏负误差抵消)为3.90％。实施例1和2的夹持力均在这个范围。而从平均误差来看，两种植物的测定夹持力最适用范围在1.17-3.17n范围内，建议测定在此范围内进行。
实施例1和2中，被考察的夹持力1.43n、2.63n以及3.81n难以找到合适的铁块来实现，在实验中，只能方便地获得1.17n、2.17n、3.17n、4.17n等夹持力的铁块(塑料棒与电极片的质量为17g)，因此只能用本发明通过已构建的耦合模型计算出在1.43n、2.63n以及3.81n夹持力下的生理阻抗。从表4和表9的结果可以看出，计算结果与实际相符。也就是说本实施例能够实现夹持力在合适的夹持力范围内微小变化下的植物生理阻抗的测定。
另外，从表5和表10中可以看出，构树叶片的静息阻抗明显小于桑树，说明构树的离子的进出受到的阻力较小，运输耗费的能量也小，这说明构树比桑树更具有适应性，这也与实际相符的。
上述虽然结合附图对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制,所属领域技术人员应该明白,在本发明的技术方案的基础上,本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。