本发明涉及药效评价技术领域，尤其涉及生物助剂安融乐对除草剂增效效果的判别方法。
背景技术
安融乐是由南非西北大学开发的一种生物助剂专利产品，它通过对除草剂，微肥，叶面肥等的分子进行包裹，并将包裹的分子（泡囊）有效地吸收并运输到植物的各个部位。其主要过程为：溶解并包裹亲水性和非亲水性分子；降低溶液的表面张力，穿过叶片表面的蜡质层及叶片气孔；通过细胞壁的跨膜运输，实现不同组织间的植物体内运输。产品主要功效为：提高肥效（以微肥、叶面肥喷雾为主），实现钙等移动性差元素的可移动性，有助于靶标作物对肥料的吸收；提高杀菌剂，除草剂（特别是灭生性除草剂）的防治效果；提高杀虫剂（菊酯类，有机磷类）的击倒速度（击倒时间缩短一半）；改善除草剂的吸收和传导特性，延缓除草剂的抗性产生；可与大多数除草剂（杀菌剂、除草剂、杀虫剂和植物生长调节剂）混合使用。
目前亟需一种能够科学、准确、快速地判别生物助剂安融乐对除草剂增效效果的方法。草铵膦是一种具有较低内吸作用的触杀型除草剂。草铵膦在实际施用中常因为环境因素或人为因素使得药效降低，若在其中加入生物助剂安融乐，将利于其吸收能够提高效能、减少用量以减少环境污染以及带来更多的经济效益。
目前已报道的判别生物助剂安融乐的增效效果的方法为生物测定法，即在温室或田间种植供试植物，待供试植物到一定生育时期喷施添加生物助剂安融乐的不同浓度的除草剂以及未添加生物助剂安融乐的不同浓度的除草剂，施药后20~30天观察植株死亡情况测定其鲜重以及干重根据添加生物助剂安融乐与未添加生物助剂安融乐施药后对植株生长的抑制程度对生物助剂安融乐的增效效果作出判别。生物测定法从播种到测定结果约需60天左右时间，耗时长、工作量大、效率低、对检测对象存在破坏性。
当植物受到外来胁迫时其光合作用强度减弱，可通过光合作用受抑制的程度来测定植物受到胁迫的情况。在除草剂中添加生物助剂安融乐能够在一定程度上增加除草剂的药效从而更大程度上抑制其光合作用强度。imaging-pam是一种通过测量植物光合作用相关指标来判断植物生长情况的仪器，imaging-pam新型调制荧光成像系统能检测叶片上每个像素的光合作用，保证叶片表面受光均匀且光强足够强；采用ccd作为检测器，光合作用横向异质性分析，多达17个荧光参数，测量荧光诱导、暗弛豫、光响应曲线等，通过这些参数以及曲线能够了解植物光合作用受抑制的内在机理。叶绿素荧光参数fv/fm代表植物潜在最大光合作用能力，在正常条件下该参数变化极小，不受物种和生长条件的影响，逆境下该参数明显下降，该参数在目前植物逆境生物学研究中也是众多学者极为关注的指标。
技术实现要素：
解决的技术问题：本申请主要是提出生物助剂安融乐对除草剂增效效果的判别方法，解决现有技术中存在耗时长、工作量大、效率低和对检测对象存在破坏性等技术问题。
技术方案：生物助剂安融乐对除草剂增效效果的判别方法，包括如下步骤：
第一步：在一组浓度不同的除草剂溶液中分别添加等量的生物助剂安融乐；
第二步：将第一步中添加过生物助剂安融乐的除草剂溶液和未添加过生物助剂安融乐的除草剂溶液分别对一组相同植物的相同部位进行喷施，所述未添加过生物助剂安融乐的除草剂溶液是与第一步中添加过生物助剂安融乐的除草剂溶液浓度相同的除草剂溶液对照组；
第三步：喷施后1~3天，取第二步所述相同植物相同部位的完整叶片；
第四步：将第三步取出来的叶片在暗中适应≥30min后，将叶片置于imaging-pam仪器中测量其叶绿素荧光参数fv/fm值并记录；
第五步：通过比较添加过生物助剂安融乐与未添加生物助剂安融乐的浓度不同的除草剂溶液喷施在相同植物的相同部位后测得叶片的叶绿素荧光参数fv/fm值的差异来判别生物助剂安融乐对除草剂的增效效果。
作为本发明的一种优选技术方案：所述第一步中除草剂溶液浓度分别为50ml/亩、100ml/亩、150ml/亩和200ml/亩。
作为本发明的一种优选技术方案：所述除草剂为草铵膦。
作为本发明的一种优选技术方案：所述第二步中植物为野芥菜，野芥菜的栽培包括以下步骤：在一组上口7cm、底部4.5cm、高度7cm的塑料杯中装入培养基质，所述培养基质为普通土壤与营养土混匀，普通土壤与营养土体积比为1:1，控制培养基质内有机质含量为2.5-5%，ph为7.0-7.5，将培养基质浇水润湿，分别播种发芽率≥95%的野芥菜种子，每个塑料杯中2~3粒，播种后再次浇水润湿，野芥菜出苗后间苗每容器留1株继续培育；所述的喷施的相同部位为从野芥菜根部向上数第二片叶，喷施时期为野芥菜叶龄3~4叶期。
作为本发明的一种优选技术方案：所述的第三步野芥菜的相同部位为从野芥菜根部向上数第二片叶，取样时间为上午9点至11点。
作为本发明的一种优选技术方案：所述叶绿素荧光参数fv/fm值测量时间为施药后1天。
作为本发明的一种优选技术方案：所述第四步中暗中适应具体操作为测量前将叶片放置于0.1m³的不透光纸盒制作的暗室中30~60分钟。
作为本发明的一种优选技术方案：所述第五步中判别方法的判断标准为：喷施添加生物助剂安融乐的浓度为50ml/亩的草铵膦后测定野芥菜叶绿素荧光参数fv/fm值与未添加生物助剂安融乐的浓度为50ml/亩的草铵膦的测定值在统计学意义上无显著差异，为无增效作用；喷施添加生物助剂安融乐的浓度为50ml/亩的草铵膦后测定野芥菜叶绿素荧光参数fv/fm值与未添加生物助剂安融乐的浓度为50ml/亩的草铵膦的测定值在统计学意义上有显著差异且喷施添加生物助剂安融乐的浓度为50ml/亩的草铵膦后测定野芥菜叶绿素荧光参数fv/fm值与未添加生物助剂安融乐的浓度为100ml/亩的草铵膦的测定值在统计学意义上无显著差异，为有轻微增效作用；喷施添加生物助剂安融乐的浓度为50ml/亩的草铵膦后测定野芥菜叶绿素荧光参数fv/fm值与未添加生物助剂安融乐的浓度为100ml/亩的草铵膦的测定值在统计学意义上有显著差异且喷施添加生物助剂安融乐的浓度为50ml/亩的草铵膦后测定野芥菜叶绿素荧光参数fv/fm值与未添加生物助剂安融乐的浓度为150ml/亩的草铵膦的测定值在统计学意义上无显著差异，为有较高增效作用；喷施添加生物助剂安融乐的浓度为50ml/亩的草铵膦后测定野芥菜叶绿素荧光参数fv/fm值与未添加生物助剂安融乐的浓度为150ml/亩的草铵膦的测定值在统计学意义上有显著差异且喷施添加生物助剂安融乐的浓度为50ml/亩的草铵膦后测定野芥菜叶绿素荧光参数fv/fm值与未添加生物助剂安融乐的浓度为200ml/亩的草铵膦的测定值在统计学意义上无显著差异，为有极高增效作用。
有益效果：本申请所述一种生物助剂安融乐对除草剂增效效果的判别方法及其制备方法采用以上技术方案与现有技术相比，具有以下技术效果：
1、方法能够快速、准确地判别生物助剂安融乐对除草剂的增效效果；
2、可操作性与时效性优先于目前已报道的评价方法；
3、比传统的生物测定法提前20~30天得出结果；
4、该方法在生物助剂效果评价领域具有广泛推广应用价值；
5、该方法对所测对象无伤害，优于对检测对象存在破坏性的传统检测方法。
具体实施方式
下面通过具体实施例对本发明的技术方案作进一步的具体说明，但是本发明并不限于这些实施例。
实施例中用到的营养土均为南京农业大学生产，野芥菜的生长环境均优选为南京农业大学牌楼科研基地日光温室中，晴天光照12000lux以上，用于测定叶绿素荧光参数fv/fm值的仪器为imaging-pam，德国walz公司生产，除草剂为草铵膦，德国拜耳公司生产，剂型为水剂，有效成份含量为18%，喷施除草剂的设备均为市下牌手持式压力喷雾器。
实施例1
生物助剂安融乐对除草剂增效效果的判别方法，第一步：在一组浓度分别为50ml/亩、100ml/亩、150ml/亩、200ml/亩的草铵膦溶液中分别添加等量的生物助剂安融乐，所述生物助剂安融乐添加量为推荐添加剂量。
第二步：在一组上口7cm、底部4.5cm、高度7cm的塑料杯中装入培养基质，所述培养基质为普通土壤与营养土混匀，普通土壤与营养土体积比为1:1，控制培养基质内有机质含量为2.5-5%，ph为7.0-7.5，将培养基质浇水润湿，分别播种发芽率≥95%的野芥菜种子，每个塑料杯中2~3粒，播种后再次浇水润湿，野芥菜出苗后间苗每容器留1株继续培育，共留8株。
第三步：待野芥菜叶龄为3~4叶期，从野芥菜根部向上数第二片叶，其中四株用手持式压力喷雾器均匀喷施添加过生物助剂安融乐的浓度分别为50ml/亩、100ml/亩、150ml/亩、200ml/亩的草铵膦溶液，剩余四株用手持式压力喷雾器均匀喷施未添加生物助剂安融乐的草铵膦溶液，所述未添加生物助剂安融乐的草铵膦溶液与添加过生物助剂安融乐的草铵膦溶液中草铵膦溶液浓度相同，浓度分别为50ml/亩、100ml/亩、150ml/亩、200ml/亩。
第四步：喷施后1天，上午9:00至11：00取植株从根部向上数第二片叶离体，将叶片放置于0.1m³的不透光纸盒制成的暗室中暗适应30-60分钟后，将叶片置于imaging-pam仪器中测定其叶绿素荧光参数fv/fm值，结果见表1。
与现有技术相比，能够快速、准确地判别生物助剂安融乐对除草剂的增效效果，其可操作性与时效性优先于目前已报道的评价方法，本申请提供的检测方法可比传统的生物测定法提前20~30天得出结果，该方法在生物助剂效果评价领域具有广泛推广应用价值。
表1
通过spss20.0统计软件分析显著性差异，表中数字后相同字母表示两数据在α=0.05水平差异不显著，α代表显著性差异水平。从表1结果可以看出，生物助剂安融乐对草铵膦具有极高增效作用。以上实例仅为本发明的优选方式，但本发明的实施方式并不受实施例的限制，其它任何未背离本发明原理所做的改变、修饰都应视为本发明的保护范围。