一种透明质酸脂质体紫外指纹图谱方法测定透明质酸含量与流程

本发明涉及到一种透明质酸脂质体含量的紫外指纹图谱检测方法测定透明质酸含量。

背景技术：

透明质酸(hyaluronicacid,ha)是由两个双糖单位(d-葡萄糖醛酸及n-乙酰葡糖胺)重复聚合组成的大型多糖类物质，广泛存在于动物和人体结缔组织细胞外基质中。ha具有良好的保湿性、润滑性、黏弹性、非免疫原性和生物相容性，广泛应用于临床治疗、诊断、生物材料(眼科手术辅助剂、预防腹腔粘连、治疗关节疾病等)以及化妆品(保湿、防皱)行业。

脂质体是一种类似微型胶囊的剂型，以磷脂与胆固醇作为骨架物质，将药物包封于类脂双分子层形成的薄膜中间所制成的超微型球状体，是对机体无毒性作用、无免疫原性及易实现靶向性的纳米载体。以脂质体作为载体的药物或其他功效成分易进入角质层，在表皮和真皮内形成药物储库，药物可持续发挥功效，现已成为皮肤病药物治疗和化妆品的研究热点。

目前脂质体定性定量分析指标主要粒径测定、磷脂含量测定、包封率测定、体内分布测定等。

由于各种物质具有各自不同的分子、原子和不同的分子空间结构，其吸收光能量的情况也就不会相同，因此，每种物质有其特有的、固定的吸收光谱曲线，根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低可判别或测定该物质的含量。由于ha脂质体中脂质体骨架成分含有磷脂和胆固醇等，对ha含量的直接检测会造成干扰，所以本专利申请的方法建立了一种简单、快速的ha脂质体紫外指纹图谱检测方法检测其中ha的含量，无论是对化妆品行业和制药行业以及生物材料行业、还是对实验室ha脂质体缓释模型的快速检测都有着重要意义。

本发明的原理：ha脂质体是将ha包裹在以磷脂与胆固醇作为骨架物质的超微型球状体中，通过紫外的强穿透能力直接对ha脂质体进行扫描，每种物质有其特有的、固定的吸收光谱曲线，根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低可判别或测定该物质的含量。根据ha特有的基本结构(d-葡萄糖醛酸及n-乙酰葡糖胺组成的双糖单位)的特定波长下特定的吸收峰，和其他物质分开(比如磷脂和胆固醇等)，并可利用特征峰下面积计算ha含量

本发明的特点：操作简便，无需有机试剂等破乳，设备简单，可以快速检测ha脂质体中ha的含量。

技术实现要素：

1.样品制备简述：

1.1ha标准溶液制备：称取适量医用级ha，加入双蒸水稀释，配制成10mg/ml。

1.2ha脂质体标准品制备：称取2.0g磷脂、0.4g吐温80、0.4g胆固醇、10g乙醇于烧杯中，加入转子于磁力搅拌器上搅拌均匀，直至磷脂全部溶解。将此磷脂溶液经注射器匀速、快速注入预热至50℃的上述ha标准溶液中，搅拌直至乙醇除尽。通过高压均质机对脂质体混悬液反复均质，malvernzetasizernanozs90检测脂质体粒径。

1.3空白脂质体对照制备：步骤如上所述，配制磷脂溶液，将此磷脂溶液经注射器匀速、快速注入预热至50℃的dh2o中，搅拌直至乙醇除尽，高压均质机对混悬液进行均质。

2.检测方法简述：

2.1紫外分光光度计全波长扫描(200-1000nm)

分别取1mlha、ha脂质体、空白脂质体于各试管，置于冰水浴中，各管缓慢加5ml

0.025m四硼酸钠硫酸溶液，摇匀，95℃水浴15min后冰水浴迅速冷却，各管加0.2ml

0.125％咔唑乙醇溶液，摇匀后95℃水浴15min，冷却至室温。用紫外分光光度计全波长扫描反应液。

2.2建立ha脂质体浓度和ha指纹特征波谱峰下面积的标准曲线。

2.3按照上述标准曲线，计算各类ha脂质体样品中ha含量。

3.本发明的优点：

方法简便，设备简单，无需有机试剂等破乳，检测时间短。

附图说明

图1.ha脂质体粒径检测

如图所示，制备的ha脂质体溶液95.91％粒径达到98.6nm，测得平均粒径为82.4nm。

图2.ha脂质体/空白脂质体/ha紫外特征光谱

由图可见，与空白脂质体相比，ha脂质体在510nm处有一吸收峰，这与ha在510nm处的吸收峰相对应。

本发明的有益效果是简单快速，无需有机试剂等破乳，重要的是填补了现行检测ha脂质体方法的不足。

技术特征：

技术总结
透明质酸(HA)是由糖醛酸和葡糖胺为双糖结构聚合组成的大型多糖，已广泛应用于临床治疗、生物材料以及化妆品行业。脂质体是类似微型胶囊的剂型，以脂质体为载体的药物或其他功效成分易进入角质层，在表皮和真皮内形成药物储库，药物持续发挥功效，现已成为皮肤病药物治疗和化妆品的研究热点。每种物质有其特有的、固定的吸收光谱曲线，根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低可判别或测定该物质的含量。由于HA脂质体中脂质体骨架成分含有磷脂和胆固醇等，对HA含量的直接检测会造成干扰，所以本发明建立了简单、快速的HA脂质体紫外指纹图谱检测方法检测其中HA的含量。本发明的特点是操作简便，设备简单，无需有机试剂等破乳。

技术研发人员：周晓鹰;魏涛
受保护的技术使用者：常州大学
技术研发日：2018.05.28
技术公布日：2018.11.09