一种淫羊藿对照提取物（箭叶）及其应用的制作方法

本发明涉及中药质量控制
技术领域：
，特别是涉及一种淫羊藿对照提取物(箭叶)的制备方法。
背景技术：
：现行中药质量控制模式基本上是沿着天然药物化学的发展，对中药某一种或几种有效成分为目标的分析方法和既有定性又可定量的质量标准的构思，参照国外植物药的质量控制方法，借鉴化学药品质量控制的模式，并借助文献报道建立相应的简单理化鉴别，再发展到以光谱、色谱为主的鉴别和含量测定的质量标准。每一味中药材都是多成分的综合体，这决定了其特有的整体性和模糊性，也表明以药材中一两个甚至几个成分作为药材质量的评价方法存在很大的局限性。1990版《中国药典》增加了对照药材的薄层色谱鉴别，使得中药及中成药的鉴别有了很大的进展。目前中药和国外的草药越来越重视多成分或多组分的检测，例如德国银杏叶提取物的质量控制。指纹图谱的分析方法，可以从整体上对药材进行质量控制，现在仍然有很大的研究价值。目前中国药典在控制药材质量方面有两种“对照品”，化学对照品和中药对照药材。其中化学对照品可用于药材的定性鉴别和定量分析，中药对照药材则用于显微鉴别和薄层鉴别。然而，化学对照品和中药对照药材在中药质量控制上都有其局限性。首先，中药中化学成分多样化，单一或者几个化合物并不能反映药材的全貌，而现有的标准往往有很多漏洞，以次充好的现象时有发生。中药对照药材受到产地、生长环境的影响，很难保证每一批的质量一致，而且只能用于定性鉴别，无法反映药材成分含量的高低。中药对照提取物是用中药材制备的性状及成分稳定，可以用于定性或者定量分析的提取物，谢培山先生对中药对照提取物提出了四个基本要求(ascs)，也是对照提取物应具备几个基本条件：authenticity，药材来源可靠，具有代表性；specificity，使用的检测方法专属性；con-sistency，不同批次对照提取物应保持一致；stability，性状稳定、均匀、便于使用。运用高效薄层色谱指纹图谱以及高效液相指纹图谱等方法，可以用于药材的定性鉴别，经过外标法标化的对照提取物，可以进一步用来半定量及定量分析检测。中药对照提取物将对中药质量控制有重要的意义。技术实现要素：本发明解决的技术问题是提供一种批次一致性好、性状稳定、均匀且便于使用的淫羊藿对照提取物(箭叶)，本发明还提供了所述淫羊藿对照提取物(箭叶)的应用，即将所述淫羊藿对照提取物(箭叶)用于淫羊藿及含淫羊藿/淫羊藿有效成分的药材或中药制剂的质量控制中。与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：本发明的淫羊藿对照提取物(箭叶)因是不同批次的提取物进行调配而成，克服了因中药对照药材受到产地、生长环境的影响，很难保证每一批的质量一致的缺陷，从而保证了不同批次的淫羊藿对照提取物(箭叶)的一致性；而且其性状稳定、均匀且便于使用。所述淫羊藿对照提取物(箭叶)在应用上，是将淫羊藿对照提取物(箭叶)经过定量分析后，作为对照用于淫羊藿及含淫羊藿/淫羊藿有效成分的药材或中药制剂的质量控制中，在此质量控制过程中，是将淫羊藿对照提取物(箭叶)进行简单处理即可直接使用，操作简便，尤其在多成分含量测定时，对照提取物溶液的配制比对照品溶液的配制更加简便，不仅可以对药材或中药制剂进行定性鉴别，而且还可以用于半定量甚至定量分析。附图说明图1是针对以化学对照品为参照物质对淫羊藿原料药材(箭叶)进行薄层色谱法得到的薄层色谱图。其中标号s1、s2的色谱带分别对应为对照品朝藿定c、淫羊藿苷，1-6依次对应为箭叶淫羊藿原料药材1、箭叶淫羊藿原料药材2、箭叶淫羊藿原料药材3、箭叶淫羊藿原料药材4、箭叶淫羊藿原料药材5和箭叶淫羊藿原料药材6。图2是针对以化学对照品为参照物质对淫羊藿原料药材(箭叶)进行高效液相色谱法得到的hplc指纹图谱叠加图，从上往下1-6分别对应箭叶淫羊藿原料药材1、箭叶淫羊藿原料药材2、箭叶淫羊藿原料药材3、箭叶淫羊藿原料药材4、箭叶淫羊藿原料药材5和箭叶淫羊藿原料药材6，s1、s2对应化学对照品：朝藿定c、淫羊藿苷，r对应共有模式。图3为淫羊藿对照提取物(箭叶)制备流程图。图4为淫羊藿对照提取物(箭叶)与箭叶淫羊藿提取原料药材共有模式叠加图，s1、s2对应化学对照品，ers对应淫羊藿对照提取物(箭叶)，r为箭叶淫羊藿原料药材共有模式。图5是针对以化学对照品和淫羊藿对照提取物为参照物质对市售药材进行薄层色谱法得到的薄层色谱图。其中标号s的色谱带从下往上分别对应为对照品朝藿定c、淫羊藿苷，5-14依次对应为淫羊藿1、淫羊藿2、淫羊藿3、淫羊藿4、淫羊藿5、淫羊藿6、淫羊藿7、淫羊藿8、淫羊藿9和淫羊藿10。1对应为淫羊藿对照提取物，2对应为淫羊藿配方颗粒，3对应为淫羊藿对照药材，4对应为朝鲜淫羊藿对照药材。图5-1是针对淫羊藿对提取物(箭叶)与淫羊藿配方颗粒，淫羊藿对照药材、朝鲜淫羊藿对照药材及淫羊藿药材进行高效薄层色谱图数码扫描图谱。条带1为淫羊藿对照提取物(箭叶)，条带2为淫羊藿对照药材，条带3为朝鲜淫羊藿对照药材，条带4为淫羊藿配方颗粒，条带5-14依次对应淫羊藿1、淫羊藿2、淫羊藿3、淫羊藿4、淫羊藿5、淫羊藿6、淫羊藿7、淫羊藿8、淫羊藿9和淫羊藿10。图6是针对以化学对照品和淫羊藿对照提取物为参照物质对市售药材进行高效液相色谱法得到的hplc指纹图谱叠加图，从上往下4-15依次对应淫羊藿1、淫羊藿2、淫羊藿3、淫羊藿4、淫羊藿5、淫羊藿6、淫羊藿7、淫羊藿8、淫羊藿9和淫羊藿10。1为淫羊藿对照提取物，2对应为淫羊藿对照药材，3对应为朝鲜淫羊藿对照药材，4对应为淫羊藿配方颗粒，s1、s2对应为化学对照品：朝藿定c、淫羊藿苷。具体实施方式下面详细描述本发明的实施例。下面描述的实施例是示例性的，仅用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。实施例中未注明具体技术或条件的，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。以下实施例中使用到的仪器和材料的来源如下：拟用于制备对照提取物的药材：淫羊藿药材购于全国各大药材市场，经谢培山教授鉴定为小檗科植物箭叶淫羊藿epimediumsagittatum(sieb.etzucc.)maxim的干燥叶。linomat5薄层色谱半自动点样仪、ats4薄层色谱全自动点样仪、薄层色谱双槽展开缸、chromatogramimmersiondeviceiii色谱显色用浸渍槽和tlcvisualizer薄层色谱摄像仪(瑞士，camag)。agilent1260series高效液相色谱仪，配有dad检测器(美国，agilenttechnologies)。甲醇、乙醇、甲酸、乙酸、磷酸、乙酸丁酯、丙酮均为分析纯(广州化学试剂厂)。乙腈为色谱纯(merckkgaa)；甲醇为色谱纯(merckkgaa)；纯净水；朝藿定c，标示纯度≥95.5％，(中国食品药品检定研究院，批号：111780-201503)；淫羊藿苷(中国食品药品检定研究院，批号：110737-200415)；淫羊藿对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：121632-201502)朝鲜淫羊藿对照药材(中国食品药品检定研究院，批号：121032-201302)测试药材淫羊藿：箭叶淫羊藿原料药材6批采购于全国各大药材市场，箭叶淫羊藿原料药材1-6；淫羊藿药材10批采购于广州各大药店及药材市场，淫羊藿1-10；淫羊藿配方颗粒采购于大药店及药材市场；实施例1：淫羊藿原料药材的筛选本实施例提供了本发明淫羊藿对照提取物(箭叶)的原料药材的筛选方法。用薄层色谱法以及高效液相色谱法分别以化学对照品为参照物质对淫羊藿原料药材(箭叶)进行分析以及筛选。淫羊藿药材购于全国各大药材市场，经谢培山教授鉴定为小檗科植物箭叶淫羊藿epimediumsagittatum(sieb.etzucc.)maxim的干燥叶。经鉴定6批淫羊藿药材为箭叶淫羊藿，符合标准可以备用。1薄层色谱1.1样品制备化学对照品溶液：精密称取淫羊藿苷和朝藿定c化学对照品适量，分别加甲醇配制成每1ml约含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。药材供试品溶液：取淫羊藿原料药材粉末0.5g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，加入50％乙醇50ml，水浴加热热回流80℃30min，放冷过滤，转移至蒸发皿蒸干，残渣用70％乙醇溶解，转移至5ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，取上清液过0.22μm的滤膜，即得药材供试品溶液。药材买自全国各大药材市场，分别为箭叶淫羊藿原料药材1，箭叶淫羊藿原料药材2、箭叶淫羊藿原料药材3、箭叶淫羊藿原料药材4、箭叶淫羊藿原料药材5和箭叶淫羊藿原料药材6。1.2薄层色谱检测检测条件如下：薄层板：tlcg60预制板(merck)；点样：药材供试品溶液：2μl，其余样品4μl；条带状点样长8mm；展开剂：乙酸丁酯：丙酮：甲酸：水＝11:2:10:10，(10℃下分层，取上层溶液)；展开方式：于双槽展开缸一侧加展开剂，预平衡15分钟，展开上行9cm；检视：展开完毕后均匀喷以5％三氯化铝乙醇溶液，薄层板置薄层加热板上105℃加热2分钟，置于紫外灯(366nm)下检视荧光色谱图像。检测结果：如图1所示，为紫外灯(366nm)下检视薄层色谱图(t：25℃，rh：70％)。标号s1、s2的色谱带分别为对照品朝藿定c和淫羊藿苷，1-6依次对应箭叶淫羊藿原料药材1，箭叶淫羊藿原料药材2、箭叶淫羊藿原料药材3、箭叶淫羊藿原料药材4、箭叶淫羊藿原料药材5和箭叶淫羊藿原料药材6；由图1可知，朝藿定c和淫羊藿苷分离情况好，各批次箭叶淫羊藿药材在同一位置都可以显示相同的斑点，各批次箭叶淫羊藿药材间相似度高，初步筛选为标准对照提取物提取原料药材。2高效液相色谱2.1样品制备化学对照品溶液：取化学对照品朝藿定c、淫羊藿苷适量，精密称定，分别用甲醇配制成100μg/ml的溶液即得。药材供试品溶液：取各药材粉末0.1g，精密称定，加50％乙醇80ml，水热回流1h，取出，抽滤，滤液蒸干，残渣加30％甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，冰箱(4℃)放置过夜，取上清液经0.22μm滤膜过滤，即得。药材买自全国各大药材市场，分别为箭叶淫羊藿原料药材1，箭叶淫羊藿原料药材2、箭叶淫羊藿原料药材3、箭叶淫羊藿原料药材4、箭叶淫羊藿原料药材5和箭叶淫羊藿原料药材6。2.2高效液相色谱检测高效液相色谱法检测条件如下：色谱仪器：agilent1260series高效液相色谱仪，配有dad检测器(美国，agilenttechnologies)色谱柱：agilentzorbaxsb-c18(4.6×250mm,5μm)；流动相：a-甲醇，b-乙腈，c-0.5％乙酸；梯度洗脱程序：0-30min：0％a→0％a，30-45min：0％a→11％a，45-65min：11％a→4％a，65-85min：4％a→4％a，85-90min：4％a→0％a，90-100min：0％a→0％a；0-30min：12％b→25％b，30-45min：25％b→23.5％b，45-65min：23.5％b→35％b，65-85min：35％b→35％b，85-90min：35％b→50％b，90-100min：50％b→50％b；0-30min：88％c→75％c，30-45min：75％c→65.5％c，45-65min：65.5％c→61％c，65-85min：61％c→61％c，85-90min：61％c→50％c，90-100min：50％c→50％c；检测波长270nm(dad检测器)；流速1.0ml/min；进样量20μl；柱温20℃，运行时间：100min。高效液相色谱法检测方法：分别精密吸取化学对照品溶液和箭叶淫羊藿药材供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪。高效液相色谱法检测结果：测定，记录色谱图，即得图2所示的hplc指纹图谱叠加图，从上往下1-6分别对应箭叶淫羊藿原料药材1，箭叶淫羊藿原料药材2、箭叶淫羊藿原料药材3、箭叶淫羊藿原料药材4、箭叶淫羊藿原料药材5和箭叶淫羊藿原料药材6，s1、s2对应化学对照品：朝藿定c、淫羊藿苷，r对应为共有模式。由图2可以看出，箭叶淫羊藿1-箭叶淫羊藿6原料药材的指纹图谱具有高度的一致性，由此建立箭叶淫羊藿药材的指纹图谱共有模式，并对所有样品进行相似度分析。根据既定的箭叶淫羊藿药材指纹图谱共有模式，采用夹角余弦算法根据各样品组分及其峰面积对6批箭叶淫羊藿药材样品进行相似度评价，结果如表1所示。表1样品相似度箭叶淫羊藿原料药材11.00箭叶淫羊藿原料药材20.99箭叶淫羊藿原料药材30.99箭叶淫羊藿原料药材40.99箭叶淫羊藿原料药材50.99箭叶淫羊藿原料药材60.99共有模式1.00根据以上相似度分析结果，6批箭叶淫羊藿原料药材的相似度≥0.99，相似度很高，可选用为淫羊藿标准对照提取物(箭叶)提取得原料药材。实施例2：淫羊藿对照提取物的制备本实施例提供了本发明淫羊藿对照提取物(箭叶)的制备方法，其方法流程图如图3所示。一：提取选取淫羊藿药材(箭叶)，制成粉末，然后加入其质量25倍体积的的50％乙醇(即固液比为1：25(w/v))，加热回流提取30min后中速定性滤纸过滤，收集滤渣1和滤液1，滤渣1按相同方法再次提取一次，并将再次提取一次收集的滤液与滤液1合并即为提取液，将提取液蒸干溶剂至无乙醇味即得淫羊藿粗提物(箭叶)，以1:20大孔树脂柱固定淫羊藿粗提物(箭叶)，吸附30～60min，纯水洗至无颜色，以70％乙醇洗脱，洗脱至无颜色，合并醇洗脱液回收至干即得淫羊藿精提物(箭叶)；二：制备淫羊藿提取物(箭叶)用适量80％乙醇淫羊藿精(箭叶)提物溶解完全后，再加淫羊藿精提物(箭叶)的30％的微粉硅胶(山河药辅)，用旋转蒸发仪蒸干，粉碎过110目筛，得到淫羊藿提取物(箭叶)。制备6批淫羊藿提取物(箭叶)，通过对照品利用高效液相色谱法测定，检测结果如表3所示：表3三：调配将步骤二的6个批次的淫羊藿提取物(箭叶)按1:1比例混合勾兑得到淫羊藿对照提取物(箭叶)，最终产品对应原药材比例大约为1：7(g/g)，通过对照品利用高效液相色谱法测定，其中各成分的含量的测定结果如表4所示。表4调配标准为：应使最终的淫羊藿对照提取物(箭叶)中朝藿定c不得低于13.00％且不高于17.00％和淫羊藿苷的含量不得低于3.00％且不高于5.00％(含量以wt％计)。此调配标准中的各成分的含量的范围也是经过多次反复实验综合保持稳定性、一致性以及后面的应用等得出的最佳数据。四：检测将步骤三调配成的淫羊藿对照提取物(箭叶)通过对照品利用高效液相色谱法测定得到指纹图谱，与制备原料药材共有模式图谱进行相似度检测，如图4，ers对应淫羊藿对照提取物(箭叶)，r为箭叶淫羊藿原料药材共有模式，s1、s2对应化学对照品：朝藿定c、淫羊藿苷。得到相似度为1.00，淫羊藿对照提取物(箭叶)和箭叶淫羊藿药材指纹图谱共有模式的相似度很高，这说明本发明的淫羊藿对照提取物(箭叶)能代表箭叶淫羊藿药材。实施例3淫羊藿对照提取物(箭叶)的性状分析1.表观状态：实施例2得到的淫羊藿对照提取物(箭叶)为浅灰紫色粉末。2.水分测定：按照2015版中国药典附录ixg(减压干燥法)进行。检测结果为淫羊藿对照提取物(箭叶)含水量为0.50％。3.一致性测试：按照实施例2的方法制备3批次淫羊藿对照提取物(箭叶)，经测定各批次间的针对朝藿定c和淫羊藿苷的薄层色谱检测结果差异很小，朝藿定c和淫羊藿苷的荧光斑点有明显的显示，且分布非常一致；经高效液相色谱检测其朝藿定c和淫羊藿苷含量在调配标准范围之内。因此利用本发明的淫羊藿对照提取物(箭叶)的制备方法制备得到的淫羊藿对照提取物(箭叶)一致性非常好。4.稳定性测试：取3个不同批次的按照实施例2的方法制备的淫羊藿对照提取物(箭叶)的供试品，按照国家药典委员会制订的“国家药品标准物质研制技术要求”的相关规定，考察指标包括性状和溶解性。供试品开口置适宜的洁净容器中，60℃温度下放置10天，于第5天和第10天取样，按稳定性重点考察项目进行检测。结果显示，高温试验前后供试品性状无明显变化，高温试验前后薄层色谱图也无明显变化，溶出率测定结果用spss进行独立样本t-检验，计算结果p＞0.05，说明无显著性差异。实施例4本实施例提供了对实施例2制备得到的淫羊藿对照提取物(箭叶)的应用。用薄层色谱法以及高效液相色谱法分别以化学对照品、淫羊藿对照药材、朝鲜淫羊藿对照药材和淫羊藿对照提取物(箭叶)为参照物质对市售药材进行分析。1薄层色谱1.1样品制备化学对照品溶液：精密称取淫羊藿苷和朝藿定c化学对照品适量，分别加甲醇配制成每1ml约含0.5mg的溶液，作为对照品溶液。淫羊藿对照提取物(箭叶)溶液：精密称取实施例2制备得到的淫羊藿对照提取物(箭叶)15mg，置5ml容量瓶中，加甲醇4ml，超声处理15分钟，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，过0.22μm滤膜即得。淫羊藿配方颗粒：取相当于药材0.5g的配方颗粒，70％乙醇溶解定容到5ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，取上清液过0.22μm的滤膜，即得；药材供试品溶液：取淫羊藿药材粉末0.5g，精密称定，置150ml具塞锥形瓶中，加入50％乙醇50ml，水浴加热热回流80℃30min，放冷过滤，转移至蒸发皿蒸干，残渣用70％乙醇溶解，转移至5ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，取上清液过0.22μm的滤膜，即得药材供试品溶液。药材买自广州各大药店，分别为淫羊藿1、淫羊藿2、淫羊藿3、淫羊藿4、淫羊藿5、淫羊藿6、淫羊藿7、淫羊藿8、淫羊藿9和淫羊藿10；同法制备淫羊藿对照药材溶液，朝鲜淫羊藿对照药材溶液。1.2薄层色谱检测检测条件如下：薄层板：tlcg60预制板(merck)；点样：药材供试品溶液：2μl，其余样品4μl；条带状点样长8mm；展开剂：乙酸丁酯：丙酮：甲酸：水＝11:2:10:10，(10℃下分层，取上层溶液)；展开方式：于双槽展开缸一侧加展开剂，预平衡15分钟，展开上行9cm；检视：展开完毕后均匀喷以5％三氯化铝乙醇溶液，薄层板置薄层加热板上105℃加热2分钟，置于紫外灯(366nm)下检视荧光色谱图像；检测结果：如图5所示，为紫外灯(366nm)下检视薄层色谱图(t：25℃，rh：70％)。标号s的色谱带从下往上分别为对照品朝藿定c和淫羊藿苷，5-14依次对应淫羊藿1、淫羊藿2、淫羊藿3、淫羊藿4、淫羊藿5、淫羊藿6、淫羊藿7、淫羊藿8、淫羊藿9和淫羊藿10。1对应为淫羊藿对照提取物，2对应为淫羊藿配方颗粒，3对应为淫羊藿对照药材，4对应为朝鲜淫羊藿对照药材。结果分析：由图5-1可知，朝藿定c和淫羊藿苷分离情况较好，淫羊藿对照提取物(箭叶)与淫羊藿配方颗粒，淫羊藿对照药材、朝鲜淫羊藿对照药材以及淫羊藿药材(淫羊藿1-10)主要斑点(朝藿定c和淫羊藿苷)位置一致。从图谱看出淫羊藿对照提取物(箭叶)与淫羊藿1在同一位置都可以显示相同的斑点，应为箭叶淫羊藿；淫羊藿对照提取物(箭叶)与淫羊藿配方颗粒，淫羊藿对照药材、朝鲜淫羊藿对照药材以及淫羊藿药材(淫羊藿2-10)稍有差异；从图谱上可以得知现在市场上药店里的药材大多为朝鲜淫羊藿以及少量其他品种的淫羊藿药材，极少箭叶淫羊藿药材。2高效液相色谱2.1样品制备化学对照品溶液：取化学对照品朝藿定c、淫羊藿苷适量，精密称定，分别用甲醇配制成100μg/ml的溶液即得。淫羊藿对照提取物(箭叶)溶液：精密称取淫羊藿ers15mg，置于5ml容量瓶中，加水4ml，超声处理15分钟。放冷，加甲醇至刻度，摇匀，溶液经0.22μm滤膜过滤，取续滤液，即得淫羊藿对照提取物(箭叶)溶液；淫羊藿配方颗粒：取相当于药材0.1g的配方颗粒，30％乙醇溶解定容到5ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，冰箱(4℃)放置过夜，取上清液经0.22μm滤膜过滤，即得；药材供试品溶液：取各药材粉末0.1g，精密称定，加50％乙醇80ml，水热回流1h，取出，抽滤，滤液蒸干，残渣加30％甲醇溶解，转移至5ml容量瓶中，定容至刻度，摇匀，冰箱(4℃)放置过夜，取上清液经0.22μm滤膜过滤，即得。药店药材均买自广州，分别为：淫羊藿1、淫羊藿2、淫羊藿3、淫羊藿4、淫羊藿5、淫羊藿6、淫羊藿7、淫羊藿8、淫羊藿9和淫羊藿10；同法制备淫羊藿对照药材溶液、朝鲜淫羊藿对照药材溶液。2.2高效液相色谱检测高效液相色谱法检测条件如下：色谱仪器：agilent1260series高效液相色谱仪，配有dad检测器(美国，agilenttechnologies)色谱柱：agilentzorbaxsb-c18(4.6×250mm,5μm)；流动相：a-甲醇，b-乙腈，c-0.5％乙酸；梯度洗脱程序：0-30min：0％a→0％a，30-45min：0％a→11％a，45-65min：11％a→4％a，65-85min：4％a→4％a，85-90min：4％a→0％a，90-100min：0％a→0％a；0-30min：12％b→25％b，30-45min：25％b→23.5％b，45-65min：23.5％b→35％b，65-85min：35％b→35％b，85-90min：35％b→50％b，90-100min：50％b→50％b；0-30min：88％c→75％c，30-45min：75％c→65.5％c，45-65min：65.5％c→61％c，65-85min：61％c→61％c，85-90min：61％c→50％c，90-100min：50％c→50％c；检测波长270nm(dad检测器)；流速1.0ml/min；进样量20μl；柱温20℃，运行时间：100min。高效液相色谱法检测方法：分别精密吸取化学对照品溶液、淫羊藿对照药材溶液、朝鲜淫羊藿对照药材溶液、淫羊藿对照提取物(箭叶)溶液和药材供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪。高效液相色谱法检测结果：测定，记录色谱图，即得图6所示的hplc指纹图谱叠加图，从上往下5-14依次对应淫羊藿1、淫羊藿2、淫羊藿3、淫羊藿4、淫羊藿5、淫羊藿6、淫羊藿7、淫羊藿8、淫羊藿9和淫羊藿10。1对应为淫羊藿对照提取物(箭叶)，2对应为淫羊藿对照药材，3对应为朝鲜淫羊藿对照药材，4对应为淫羊藿配方颗粒；s1、s2对应化学对照品：朝藿定c、淫羊藿苷。由图6可以看出，淫羊藿1-淫羊藿10药材的指纹图谱相差较大。根据淫羊藿对照提取物指纹图谱，采用夹角余弦算法根据各样品组分及其峰面积对10批淫羊藿药材指纹图谱进行相似度评价，结果如表5所示。表5样品相似度淫羊藿10.96淫羊藿20.63淫羊藿30.45淫羊藿40.40淫羊藿50.40淫羊藿60.43淫羊藿70.93淫羊藿80.60淫羊藿90.55淫羊藿100.46淫羊藿对照药材0.51朝鲜淫羊藿对照药材0.39淫羊藿配方颗粒0.67淫羊藿ers1.00根据以上相似度分析结果，10批药材淫羊藿1、淫羊藿7和淫羊藿对照提取物(箭叶)的相似度分别为0.98和0.95，相似度很高，其余商品药材和淫羊藿对照提取物相似度很低，这是由于淫羊藿商品药材种类繁多，市场上较少箭叶淫羊藿。根据tlc及hplc指纹图谱的结果可知，对所述淫羊藿对照提取物(箭叶)采用薄层色谱法检测得到的色谱图与其对应的原料药材一致，更确切的说，对所述淫羊藿对照提取物采用薄层色谱法检测得到的色谱图中的朝藿定c和淫羊藿苷位置处的荧光斑点和采用高效液相色谱法检测得到的色谱图在朝藿定c和淫羊藿苷位置处的色谱峰分别与其对应的化学对照品或其对应的原料药材一致，因此本发明的淫羊藿对照提取物(箭叶)可应用于药材或中药制剂的定性鉴别，例如对药材或中药制剂的朝藿定c和淫羊藿苷成分进行定性分析根据hplc测定结果以及统计分析，建立的箭叶淫羊藿提取药材指纹图谱共有模式与箭叶淫羊藿药材的相似度极高，而本发明的淫羊藿对照提取物(箭叶)和箭叶淫羊藿提取药材指纹图谱共有模式的相似度又极高，这说明使用本发明的淫羊藿对照提取物(箭叶)对淫羊藿药材或中药制剂进行朝藿定c和淫羊藿苷的含量测定可靠性极高，因此本发明的淫羊藿对照提取物(箭叶)可应用于淫羊藿药材或中药制剂的半定量鉴别分析，也可应用于淫羊藿及含淫羊藿/淫羊藿有效成分的药材或中药制剂的质量控制中，例如对药材或中药制剂的朝藿定c和淫羊藿苷成分进行半定量鉴别分析，或者对箭叶淫羊藿及含淫羊藿/淫羊藿有效成分的药材或中药制剂进行半定量检测进而控制其质量。当前第1页12