一种鉴别南瓜亲缘关系远近的方法与流程

本发明属于南瓜育种
技术领域：
，具体涉及一种鉴别南瓜亲缘关系远近的方法。
背景技术：
：南瓜(学名：cucurbitamoschata(duch.exlam.)duch.expoiret)葫芦科南瓜属的一个种，一年生蔓生草本植物，茎常节部生根，叶柄粗壮，叶片宽卵形或卵圆形，质稍柔软，叶脉隆起，卷须稍粗壮，雌雄同株，果梗粗壮，有棱和槽，因品种而异，外面常有数条纵沟，种子多数，长卵形或长圆形，具有良好的食疗作用。南瓜原产墨西哥到中美洲一带，世界各地普遍栽培，亚洲栽培面积最多，其次为欧洲和南美洲，中国普遍栽培。南瓜栽培品种资源丰富，仅中国品种，就可分为蜜本南瓜、黄狼南瓜、大磨盘南瓜、小磨盘南瓜、牛腿南瓜、蛇南瓜、甘利王、红栗王和砍瓜。现有技术中，大多采用植物形态学特征判断南瓜亲缘关系的远近，通过植物形态学判断南瓜亲缘关系的远近，准确率低。因此，为准确鉴别南瓜亲缘关系远近，尚需一种新的鉴别方法。技术实现要素：为解决现有技术中，通过植物形态学特征难以准确鉴别南瓜亲缘关系远近的问题，本发明提供了一种鉴别南瓜亲缘关系远近的方法。为实现上述目的，本发明采用以下技术方案：一种鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，包括以下步骤：(1)构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱；(2)以与步骤(1)相同的方法建立待测南瓜的酶电泳图谱；(3)将步骤(2)所述的酶电泳图谱与步骤(1)所述的酶电泳总图谱进行聚类分析，计算图谱相异系数c；所述酶为多酚氧化酶；所述图谱的迁移率rf为0.3～0.8。优选地，步骤(1)所述构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：(a)取南瓜组织1g，加入浓度为0.05mol/l的磷酸缓冲液3ml，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；(b)采用凝胶电泳系统，对步骤(a)所述酶电泳液进行电泳；(c)根据步骤(b)的结果绘制模式图并计算条带数。进一步优选地，步骤(a)所述南瓜组织包括南瓜根、茎、叶、果实和种子中的一种。进一步优选地，步骤(a)所述磷酸缓冲液的ph为6.5～7.5。进一步优选地，步骤(a)所述甘油的添加量为15～25(wt)％。进一步优选地，步骤(a)所述低温保存的温度为-15～-25℃。进一步优选地，步骤(b)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统。进一步优选地，步骤(b)所述电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1ma，分离胶电流为2ma。进一步优选地，步骤(b)所述电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。优选地，所述相异系数c＝2w/(a+b)，w表示步骤(2)所述的待测南瓜与步骤(1)中的已知产地南瓜中的一种两相比较类型不同的酶带数，a+b表示两相比较各自类型的酶带总数。本发明的有益效果1、本发明提供的鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，操作方便，图谱直观，能客观准确地反映待测南瓜与已知南瓜的亲缘关系远近；2、本发明的鉴别方法，不受南瓜形态、大小和生长时间的限制，可以使用南瓜的不同部位来完成鉴别。说明书附图图1是已知产地南瓜a～f的酶电泳总图谱；图2是两种待测南瓜g和h的酶电泳图谱。具体实施方式以下是本发明的具体实施例，并结合附图说明对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。实施例1构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：(a)取南瓜根1g，加入浓度为0.05mol/l的磷酸缓冲液3ml，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；(b)采用凝胶电泳系统，对步骤(a)所述酶电泳液进行电泳；(c)根据步骤(b)的结果绘制模式图并计算条带数。步骤(a)所述磷酸缓冲液的ph为6.8，甘油的添加量为20(wt)％，低温保存的温度为-20℃；步骤(b)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统；电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1ma，分离胶电流为2ma，电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。实施例2构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：(a)取南瓜茎1g，加入浓度为0.05mol/l的磷酸缓冲液3ml，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；(b)采用凝胶电泳系统，对步骤(a)所述酶电泳液进行电泳；(c)根据步骤(b)的结果绘制模式图并计算条带数。步骤(a)所述磷酸缓冲液的ph为6.8，甘油的添加量为20(wt)％，低温保存的温度为-20℃；步骤(b)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统；电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1ma，分离胶电流为2ma，电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。实施例3构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：(a)取南瓜叶1g，加入浓度为0.05mol/l的磷酸缓冲液3ml，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；(b)采用凝胶电泳系统，对步骤(a)所述酶电泳液进行电泳；(c)根据步骤(b)的结果绘制模式图并计算条带数。步骤(a)所述磷酸缓冲液的ph为6.8，甘油的添加量为20(wt)％，低温保存的温度为-20℃；步骤(b)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统；电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1ma，分离胶电流为2ma，电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。实施例4构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：(a)取南瓜叶1g，加入浓度为0.05mol/l的磷酸缓冲液3ml，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；(b)采用凝胶电泳系统，对步骤(a)所述酶电泳液进行电泳；(c)根据步骤(b)的结果绘制模式图并计算条带数。步骤(a)所述磷酸缓冲液的ph为6.8，甘油的添加量为20(wt)％，低温保存的温度为-20℃；步骤(b)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统；电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1ma，分离胶电流为2ma，电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。实施例5构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：(a)取南瓜果实1g，加入浓度为0.05mol/l的磷酸缓冲液3ml，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；(b)采用凝胶电泳系统，对步骤(a)所述酶电泳液进行电泳；(c)根据步骤(b)的结果绘制模式图并计算条带数。步骤(a)所述磷酸缓冲液的ph为6.8，甘油的添加量为20(wt)％，低温保存的温度为-20℃；步骤(b)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统；电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1ma，分离胶电流为2ma，电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。实施例6构建各已知产地南瓜的酶电泳总图谱的方法包括：(a)取十个产地南瓜种子1g，加入浓度为0.05mol/l的磷酸缓冲液3ml，于预冷研钵中匀浆后离心，取上清液，加入甘油后摇匀，得酶电泳液并低温保存；(b)采用凝胶电泳系统，对步骤(a)所述酶电泳液进行电泳；(c)根据步骤(b)的结果绘制模式图并计算条带数。步骤(a)所述磷酸缓冲液的ph为6.8，甘油的添加量为20(wt)％，低温保存的温度为-20℃；步骤(b)所述凝胶电泳系统为不连续丙烯酰胺凝胶电泳系统；电泳为稳流电泳，浓缩胶电流为1ma，分离胶电流为2ma，电泳的时间为4h，电泳的温度为4～6℃。实施例7一种鉴别南瓜亲缘关系远近的方法，包括以下步骤：(1)采用实施例6的方法，构建6种已知产地南瓜a～f的酶电泳总图谱，如图1；(2)以与步骤(1)相同的方法建立两种待测南瓜g和h的酶电泳图谱，如图2；(3)将步骤(2)所述的酶电泳图谱与步骤(1)所述的酶电泳总图谱进行聚类分析，计算图谱相异系数c，如表1所示，得到待测南瓜j的产地；所述酶为过氧化物酶，所述图谱的迁移率rf>0.2。所述相异系数c＝2w/(a+b)，w表示步骤(2)所述的待测产地南瓜与步骤(1)中的已知产地南瓜中的一种两相比较类型不同的酶带数，a+b表示两相比较各自类型的酶带总数。表1待测南瓜g和h与已知产地a～f的图谱相异系数品种abcdefg10.3850.3850.20000.250h0.2200.1770.1770.00710从表1可以看出，待测南瓜g与已知产地南瓜a的图谱相异系数为1，表示待测南瓜g与已知产地南瓜a的亲缘关系最远，待测南瓜g与已知产地南瓜e的图谱相异系数为0，表示待测南瓜g与已知产地南瓜e的亲缘关系最近，为同类南瓜。待测南瓜h与已知产地南瓜e的图谱相异系数为1，表示待测南瓜h与已知产地南瓜e的亲缘关系最远，待测南瓜h与已知产地南瓜f的图谱相异系数为0，表示待测南瓜h与已知产地南瓜f的亲缘关系最近，为同类南瓜。当前第1页12