本发明涉及文物检测领域，尤其涉及一种基于微波检测古代丝织品的方法。
背景技术：
中国自古以来就是纺织品大国，生产的纺织品种类丰富，工艺精美，舒适透气。其中最负盛名的纺织品就是中国的丝绸，故中国又被称为“丝绸之国”。丝绸的主要成分是桑蚕丝，桑蚕丝主要由丝素蛋白和丝胶两部分组成，丝素蛋白是蚕丝的主要组成部分，约占总重量的70%。并且桑蚕丝作为一种有机高分子材料，易受光、热、酸碱、微生物等的影响发生降解，从而造成结晶度、分子量等结构及性能的变化，所以常规的检测方法灵敏度低，受杂质干扰影响大，不适合对文物进行检测，因此需要开发一种灵敏度好，特异性强的检测丝织品的方法。
微波检测具有灵敏度高、操作方便等特点，广泛地应用于各种领域。但是，由于本发明所要检测的为丝织品文物，与常规的检测样不同，因此有必要专门针对丝织品文物这一特殊对象来对微波检测方法进行改进。
技术实现要素：
为了解决上述技术问题，本发明提供了一种基于微波检测古代丝织品的方法。本发明针对丝织品文物样这一特殊的检测对象，对工艺进行了诸多改进。利用本发明方法对古代丝织品进行检测，具有直观、准确、灵敏度高的特点。
本发明的具体技术方案为：一种基于微波检测古代丝织品的方法，以µg、g和ml计，包括以下步骤：
a)称取4-6g桑蚕丝置于180-220ml含0.018-0.022m的碳酸钠溶液中，水浴55-65min，水浴温度为75-85℃，取出用去离子水清洗三次以上，干燥，得到丝素。
b)取1.8-2.2g烘干的丝素，2.3-2.7g硝酸钙，加入甲酸48-52ml，搅拌80-100min，过滤加入碳酸氢钠直至溶液呈中性，透析冷冻干燥后，将得到的丝素蛋白研磨成丝素蛋白粉，备用。
本发明使用硝酸钙、甲酸体系溶解丝素，既能增加对丝素的溶解度，又能减小对丝素分子链的破坏，而且该体系在常温下即可完成对丝素的溶解，无需加热。
c)称取18-22mg硒化镉/硫化锌量子点，118-122mg聚甲基丙烯酸甲酯，78-82mg的聚马来酸酐-十八烯共聚物，加入至1.8-2.2ml的氯仿中，与4.5-5.5ml的3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液混合，超声波均化处理，再将氯仿蒸发；然后将所得水溶性量子点珠离心纯化，用去离子水清洗2-4次得到量子点珠。
本发明制备的量子点珠包含很多个硒化镉/硫化锌量子点，发光强度是单个硒化镉/硫化锌量子点的几千倍，在检测过程中起到荧光信号放大的作用，增大检测的灵敏度。
d)取0.9-1.1µg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺，0.1-0.14mg的步骤c）所得水溶性量子点珠加入到2.5-3.1ml的pbs7.4缓冲液中，边缓慢搅拌边逐滴加入90-110µl用1wt%牛血清蛋白稀释至1000倍的丝素蛋白抗体，在室温下放置35-45min，离心，取沉淀物用600µlpbs7.4缓冲液重悬，然后在1-5℃下备用。
e)取0.02-0.2g文物样溶解于100ml的cb9.6缓冲液，混合搅拌均匀，静置，取80-120µl上清液加入到酶标板a列，将步骤b)所得丝素蛋白粉用cb9.6缓冲液配制成100µg/ml的丝素蛋白溶液，取80-120µl加入到酶标板b、c列，b列作为阳性对照，c列作为空白对照，取80-120µlpbs7.4缓冲液加入到酶标板d列作为阴性对照，将酶标板置于微波炉中低档孵育2-4min，吸出孔内液体，用pbs7.4缓冲液洗涤。
f)每孔中加入封闭液180-220µl，置于微波炉中孵育2-4min，吸出孔内液体，用pbs7.4缓冲液洗涤。
g)取步骤d）所得溶液80-120µl加入到酶标板a，b，d列中，取封闭液80-120µl加入到c列中，置于微波炉中孵育2-4min，吸出孔内液体，用pbs7.4缓冲液洗涤。
与传统方法相比，本发明使用微波孵育通过高频振荡促进抗原抗体加速反应，使实验时间大大缩短，并提高了检测结果的重复性。
h)使用荧光酶标仪测定荧光值，将阴性对照的od均值+3个sd作为cut-off值，若a列的荧光平均值＞d列的cut-off值，则判定文物样中含有桑蚕丝。
本发明先采用硝酸钙、甲酸体系制备桑蚕丝素蛋白，继而制备了一种量子点珠标记的丝素蛋白抗体，随之将丝素蛋白和丝织品文物样进行微波检测，通过荧光强度值即可判断文物样中是否含有桑蚕丝。本发明样品用量少，具有快速，准确，灵敏度高的特点，对腐坏的丝织品有良好的检测效果。
作为优选，步骤a）中，所得溶液用截留分子量为8000-10000的纤维素透析袋在去离子水中透析2-3天，并每隔5-7h换一次水，将丝素蛋白溶液真空冷冻干燥2-3天。
作为优选，步骤c）中，离心速率为8000-12000rpm，离心时间为8-12min。
作为优选，步骤e）中，cb9.6缓冲液配制方法为：称取1.5g碳酸钠和2.9g碳酸氢钠加入到800ml去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000ml，调节溶液的ph至9.6。
作为优选，步骤d）和步骤e）中，pbs7.4缓冲液的配制方法为：称取0.2g氯化钾，0.27g磷酸二氢钾，8g氯化钠和1.42g磷酸氢二钠加入到800ml去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000ml，调节溶液的ph至7.4。
作为优选，步骤f）中，所述封闭液为1wt%牛血清蛋白。
作为优选，步骤e）步骤f）步骤g）中，用pbs7.4缓冲液洗涤3-5次，每次2-4min。
作为优选，步骤h）中，荧光酶标仪检测荧光时，激发波长为360nm，发射波长为500nm。
与现有技术对比，本发明的有益效果是：
(1)本发明使用硝酸钙、甲酸体系在常温下即可溶解丝素，既能增加对丝素的溶解度，又能减小对丝素分子链的破坏。
(2)本发明制备的量子点珠包含很多个硒化镉/硫化锌量子点，发光强度是单个硒化镉/硫化锌量子点的几千倍，在检测过程中起到荧光信号放大的作用，增大检测的灵敏度。
(3)本发明中使用的微波通过高频振荡促进抗原抗体加速反应，使实验时间大大缩短，并提高了检测结果的重复性。
(4)本发明样品用量少，具有快速，准确，灵敏度高的特点，对腐坏的丝织品有良好的检测效果。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的描述。
实施例1：
a)称取5g桑蚕丝置于180ml含0.018m的碳酸钠溶液中，水浴55min，水浴温度为80℃，取出用去离子水清洗三次以上，放入烘箱干燥。
b)取2g烘干的丝素，2.3g硝酸钙，加入甲酸48ml，用磁力搅拌80min，过滤加入碳酸氢钠直至溶液呈中性用截留分子量为8000的纤维素透析袋在去离子水中透析2天，并每隔5h换一次水，将丝素蛋白溶液在真空冷冻干燥机中冷冻干燥2天，将得到的丝素蛋白研磨成粉备用。
c)称取20mg硒化镉/硫化锌量子点，118mg聚甲基丙烯酸甲酯，78mg的聚马来酸酐-十八烯共聚物，加入1.8ml的氯仿中，与4.5ml的3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液混合后用超声波均化器处理，之后再将氯仿蒸发。然后将所得水溶性量子点珠离心纯化，离心速率为8000rpm，时间为8min，用去离子水清洗2次得到量子点珠。
d)取0.9µg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺，0.1mg的步骤c）中的量子点珠加入到2.5mlpbs7.4缓冲液中，然后一边缓慢搅拌一边逐滴加入90µl用1wt%牛血清蛋白稀释到1000倍的丝素蛋白抗体，在室温下放置35min，离心，取沉淀物用600µlpbs7.4缓冲液重悬，然后存放在4℃冰箱里备用。
e)取0.02g文物样溶解于100mlcb9.6缓冲液，混合搅拌均匀，静置，取80µl上清液加入到酶标板a列，将步骤b)中的桑蚕丝素蛋白粉末用cb9.6缓冲液配制成100µg/ml的丝素蛋白溶液，取80µl加入到酶标板b、c列，b列作为阳性对照，c列作为空白对照，取80µlpbs7.4缓冲液加入到酶标板d列作为阴性对照，将酶标板置于微波炉中低档孵育2min，吸出孔内液体，用pbs7.4缓冲液洗涤3次，每次2min。
cb9.6缓冲液配制：称取1.5g碳酸钠和2.9g碳酸氢钠加入到800ml去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000ml，调节溶液的ph至9.6。
f)每孔中加入1wt%牛血清蛋白180µl，置于微波炉中低档孵育2min，吸出孔内液体，用pbs7.4缓冲液洗涤3次，每次2min。
g)取步骤d）中的溶液80µl加入到酶标板a，b，d列中，取封闭液80µl加入到c列中，置于微波炉中低档孵育2min，吸出孔内液体，用pbs7.4缓冲液洗涤3次，每次2min。
pbs7.4缓冲液的配制：称取0.2g氯化钾，0.27g磷酸二氢钾，8g氯化钠和1.42g磷酸氢二钠加入到800ml去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000ml，调节溶液的ph至7.4。
h)使用荧光酶标仪测定荧光值，激发波长为360nm，发射波长为500nm，将阴性对照的od均值+3个sd作为cut-off值，若a列的荧光平均值＞d列的cut-off值，则说明文物样中含有桑蚕丝。
实施例2：
a)称取5g桑蚕丝置于200ml含0.02m的碳酸钠溶液中，水浴60min，水浴温度为80℃，取出用去离子水清洗三次以上，放入烘箱干燥。
b)取2g烘干的丝素，2.5g硝酸钙，加入甲酸50ml，用磁力搅拌90min，过滤加入碳酸氢钠直至溶液呈中性用截留分子量为9000的纤维素透析袋在去离子水中透析2.5天，并每隔6h换一次水，将丝素蛋白溶液在真空冷冻干燥机中冷冻干燥2.5天，将得到的丝素蛋白研磨成粉备用。
c)称取20mg硒化镉/硫化锌量子点，120mg聚甲基丙烯酸甲酯，80mg的聚马来酸酐-十八烯共聚物，加入2ml的氯仿中，与5ml的3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液混合后用超声波均化器处理，之后再将氯仿蒸发。然后将所得水溶性量子点珠离心纯化，离心速率为10000rpm，时间为10min。用去离子水清洗3次得到量子点珠。
d)取1µg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺，0.12mg的步骤c）中的量子点珠加入到2..8mlpbs7.4缓冲液中，然后一边缓慢搅拌一边逐滴加入100µl用1wt%牛血清蛋白稀释到1000倍的丝素蛋白抗体，在室温下放置40min，离心，取沉淀物用600µlpbs7.4缓冲液重悬，然后存放在4℃冰箱里备用。
e)取0.11g文物样溶解于100mlcb9.6缓冲液，混合搅拌均匀，静置，取100µl上清液加入到酶标板a列，将步骤b)中的桑蚕丝素蛋白粉末用cb9.6缓冲液配制成100µg/ml的丝素蛋白溶液，取100µl加入到酶标板b、c列，b列作为阳性对照，c列作为空白对照，取100µlpbs7.4缓冲液加入到酶标板d列作为阴性对照，将酶标板置于微波炉中低档孵育3min，吸出孔内液体，用pbs7.4缓冲液洗涤4次，每次3min。
cb9.6缓冲液配制：称取1.5g碳酸钠和2.9g碳酸氢钠加入到800ml去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000ml，调节溶液的ph至9.6。
f)每孔中加入1wt%牛血清蛋白200µl，置于微波炉中低档孵育3min，吸出孔内液体，用pbs7.4缓冲液洗涤4次，每次3min。
g)取步骤d）中的溶液100µl加入到酶标板a，b，d列中，取封闭液100µl加入到c列中，置于微波炉中低档孵育3min，吸出孔内液体，用pbs7.4缓冲液洗涤4次，每次3min。
pbs7.4缓冲液的配制：称取0.2g氯化钾，0.27g磷酸二氢钾，8g氯化钠和1.42g磷酸氢二钠加入到800ml去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000ml，调节溶液的ph至7.4。
h)使用荧光酶标仪测定荧光值，激发波长为360nm，发射波长为500nm，将阴性对照的od均值+3个sd作为cut-off值，若a列的荧光平均值＞d列的cut-off值，则说明文物样中含有桑蚕丝。
实施例3：
a)称取5g桑蚕丝置于220ml含0.022m的碳酸钠溶液中，水浴65min，水浴温度为80℃，取出用去离子水清洗三次以上，放入烘箱干燥；
b)取2g烘干的丝素，2.7g硝酸钙，加入甲酸52ml，用磁力搅拌100min，过滤加入碳酸氢钠直至溶液呈中性用截留分子量为10000的纤维素透析袋在去离子水中透析3天，并每隔7h换一次水，将丝素蛋白溶液在真空冷冻干燥机中冷冻干燥3天，将得到的丝素蛋白研磨成粉备用；
c)称取20mg硒化镉/硫化锌量子点，122mg聚甲基丙烯酸甲酯，82mg的聚马来酸酐-十八烯共聚物，加入2.2ml的氯仿中，与5.5ml的3mg/ml的十二烷基磺酸钠水溶液混合后用超声波均化器处理，之后再将氯仿蒸发。然后将所得水溶性量子点珠离心纯化，离心速率为12000rpm，时间为12min。用去离子水清洗4次得到量子点珠；
d)取1.1µg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺，0.1-0.14mg的步骤c）中的量子点珠加入到3.1mlpbs7.4缓冲液中，然后一边缓慢搅拌一边逐滴加入110µl用1wt%牛血清蛋白稀释到1000倍的丝素蛋白抗体，在室温下放置45min，离心，取沉淀物用600µlpbs7.4缓冲液重悬，然后存放在4℃冰箱里备用；
e)取0.2g文物样溶解于100mlcb9.6缓冲液，混合搅拌均匀，静置，取120µl上清液加入到酶标板a列，将步骤b)中的桑蚕丝素蛋白粉末用cb9.6缓冲液配制成100µg/ml的丝素蛋白溶液，取120µl加入到酶标板b、c列，b列作为阳性对照，c列作为空白对照，取120µlpbs7.4缓冲液加入到酶标板d列作为阴性对照，将酶标板置于微波炉中低档孵育4min，吸出孔内液体，用pbs7.4缓冲液洗涤5次，每次4min；
cb9.6缓冲液配制：称取1.5g碳酸钠和2.9g碳酸氢钠加入到800ml去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000ml，调节溶液的ph至9.6。
f)每孔中加入1wt%牛血清蛋白220µl，置于微波炉中低档孵育4min，吸出孔内液体，用pbs7.4缓冲液洗涤5次，每次4min；
g)取步骤d）中的溶液120µl加入到酶标板a，b，d列中，取封闭液120µl加入到c列中，置于微波炉中低档孵育4min，吸出孔内液体，用pbs7.4缓冲液洗涤5次，每次4min；
pbs7.4缓冲液的配制：称取0.2g氯化钾，0.27g磷酸二氢钾，8g氯化钠和1.42g磷酸氢二钠加入到800ml去离子水中均匀搅拌直至完全溶解后用容量瓶定容至1000ml，调节溶液的ph至7.4。
h)使用荧光酶标仪测定荧光值，激发波长为360nm，发射波长为500nm，将阴性对照的od均值+3个sd作为cut-off值，若a列的荧光平均值＞d列的cut-off值，则说明文物样中含有桑蚕丝。
本发明中所用原料、设备，若无特别说明，均为本领域的常用原料、设备；本发明中所用方法，若无特别说明，均为本领域的常规方法。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例，并非对本发明作任何限制，凡是根据本发明技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、变更以及等效变换，均仍属于本发明技术方案的保护范围。