一种检测蔬果咪鲜胺残留量的方法与流程

本发明涉及蔬果残留量检测技术领域，具体涉及一种检测蔬果咪鲜胺残留量的方法。

背景技术

咪鲜胺又名施保克，广泛应用于多种农林产品的生产、贮存和运输等过程中。尽管咪鲜胺是低毒杀菌剂，但其最终产物是环境中的重要污染物之一，会污染生态环境，并会对人类健康造成潜在威胁，其在水果生产和储藏中的残留问题越来越受人们关注。目前，对咪鲜胺残留量的检测主要采用色普法检测。现有技术中主要采用农业标准ny/t1456-2007测定咪鲜胺残留量，该测定方法包括提取、水解和净化处理和上机的步骤。此法不仅操作繁琐、耗时，而且在净化过程使用浓硫酸容易发生危险，在处理大量样品时需要消耗大量的试剂、玻璃仪器和时间，效率较低。因此，亟需对检测蔬果咪鲜胺残留量的方法改进，以提高咪鲜胺的测定效率。

技术实现要素：

针对现有技术存在上述技术问题，本发明提供一种检测蔬果咪鲜胺残留量的方法，该方法能够高效地回收咪鲜胺，从而提高了检测的准确性，且具有安全性好和成本低优点。

为实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

提供一种检测蔬果咪鲜胺残留量的方法，包括以下步骤，

步骤一、匀浆：把待检测的蔬果匀浆处理，然后把匀浆后的蔬果置于-25～-10℃的温度条件下保存，得到待测试样；

步骤二、提取：称取一定量的待测试样，向该待测试样加入乙腈提取溶剂，然后把待测试样与乙腈提取溶剂充分匀浆，接着过滤匀浆后的待测试样与乙腈提取溶剂，将滤液收集至装有氯化钠的具塞比色管中，其中，滤液与氯化钠的重量之比是40～50：5～7，充分震荡比色管，震荡后静置所述比色管，获得上层分液和下层分液；

步骤三、水解：把所得的上层分液吸取到带瓶盖的水解管中，吹干上层分液，然后向所述水解管内加入吡啶盐酸盐并盖上瓶盖，该瓶盖不完全遮盖水解管开口，将水解管置于210～240℃沙浴中水解1～2h，水解后，冷却所述水解管，然后向所述水解管加入一部分蒸馏水以溶解吡啶盐酸盐，接着把水解管内的溶液移到分液漏斗并用另一部分蒸馏水冲洗所述水解管，且将该部分的蒸馏水冲洗液一并移到所述分液漏斗，萃取分液漏斗的溶液，得到萃取后的有机相，其中，所述上层分液、所述吡啶盐酸盐和所述蒸馏水的重量之比是4：0.5～1：10～12；

步骤四、净化：把步骤三所得的有机相转移到烧杯中，吹干有机相，使用正己烷分次冲洗烧杯，所得的冲洗液转移到正己烷-丙酮混合溶液活化的弗罗里柱中过滤，弃去滤液，然后用正己烷-丙酮混合溶液分数次洗脱所述弗罗里柱，收集洗脱液，气吹所述洗脱液，然后使用正己烷定容所述洗脱液至一定浓度，得到前处理后的待测液，其中，活化所述弗罗里柱的正己烷与丙酮的体积之比是7～9：1，洗脱所述弗罗里柱的正己烷与丙酮的体积之比是1：7～9；

步骤五、将步骤四所得的前处理后的待测液上机测试。

其中，所述步骤一中，选取待检测蔬果的可食部分并用对角分割法将其切割，然后取对角部分的蔬果切碎再进行匀浆处理。

其中，分别采用氮吹的方式吹干上层分液和有机相，以及采用氮吹气吹所述洗脱液。

其中，所述步骤三中，一部分蒸馏水和另一部分蒸馏水的重量之比是1：5。

其中，所述步骤四中，用于冲洗烧杯的正己烷与作为洗脱剂的正己烷与丙酮混合液的重量之比是1：2.5。

其中，所述步骤四中，用于活化所述弗罗里柱的正己烷与丙酮的体积之比是9：1；用于洗脱所述弗罗里柱的正己烷与丙酮的体积之比是1：9

其中，所述步骤三中，使用石油醚萃取2次分液漏斗内的溶液。

本发明的有益效果：

(1)本发明采用乙腈溶剂为提取溶剂并将其与待测试样充分匀浆，乙腈溶剂能充分地与待测试样匀浆，且震荡后能快速地与水溶性杂质快速彻底地分离以形成上层分液和下层分液，降低了水溶性杂质对检测干扰的问题，且大大缩小了实验时间和提高了咪鲜胺残留量的提取率，进而提高测定的精确度。

(2)本发明采用沙浴加热水解管，沙浴中的沙子便于同时固定多个水解管从而提高了实验效率，且沙浴不存在沸腾现象，避免了因爆沸所致的水解管炸裂的问题，提高了实验的安全性；并且，沙浴后的水解管的管身较清洁，减少了清洗水解管的工作，进一步提高实验效率。

(3)本发明采用弗罗里柱净化有机相中的杂质，避免了现有技术硫酸净化杂质容易引发实验事故的问题，并且采用弗罗里柱不需调节ph值，可减少了因调ph值所带来的实验误差，进而提高了实验的精确性。

(4)本发明采用采用一定配比的正己烷与丙酮的混合液为洗脱剂，正己烷与丙酮的混合液能高效地回收咪鲜胺，与现有技术相比，不会回收杂质，避免了测试时杂峰影响咪鲜胺定量测定的问题。

附图说明

图1为采用浓硫酸净化有机相的咪鲜胺残留量色谱图；

图2为采用弗罗里柱净化有机相的咪鲜胺残留量色谱图；

图3为采用丙酮与正己烷混合液为弗罗里柱的洗脱剂的咪鲜胺残留量色谱图。

具体实施方式

以下结合具体实施例及附图对本发明进行详细说明。

实施例1。

本实施例的一种检测蔬果咪鲜胺残留量的方法，包括以下步骤：

步骤一、匀浆：选取待检测蔬果的可食部分并用对角分割法将其切割，然后取对角部分的蔬果切碎混匀再进直接放入食品加工机中捣碎和匀浆，所得的匀浆试样并置于-20℃条件下保存，得到待测试验。

步骤二、提取：称取待测试样40g放入匀浆机中，加入50ml乙腈溶剂，在匀浆机中高速匀浆3min后用滤纸过滤，滤液收集到装有7g氯化钠的50ml具塞比色管中，收集滤液50ml，盖上塞子，剧烈震荡1min，在室温下静置30min，得到上层分液和下层分液。

步骤三、水解：准确吸取上述20ml上层溶液到25ml带螺旋瓶盖的水解管中，氮吹上层溶液完全干，加入5g吡啶盐酸盐，拧上盖子(不需要拧紧)，置于240℃沙浴中水解1.5h，冷却后，加入10ml蒸馏水，振摇使吡啶盐酸盐溶解，并用50ml蒸馏水分次冲洗水解管转移到250ml分液漏斗中，用石油醚萃取2次(每次50ml)，弃去萃取的水相，将萃取所得的有机相合并。

步骤四、净化：将上述有机相转移到100ml烧杯中，浓缩至干，用10ml正己烷分次洗烧杯，溶液转移到经正己烷-丙酮混合溶液活化的弗罗里柱，该正己烷与丙酮混合溶液的体积之比是9：1，弃去弗罗里柱中的滤液，再用25ml丙酮与正己烷混合溶液分数次洗脱弗罗里柱，该正己烷与丙酮混合溶液的体积之比是1：9，然后收集洗脱液，氮吹并洗脱液定容5ml，定容后的洗脱液供测定。

步骤五、将步骤四所得的前处理后的待测液上机测试。

实施例2。

步骤一、匀浆：选取待检测蔬果的可食部分并用对角分割法将其切割，然后取对角部分的蔬果切碎混匀再进直接放入食品加工机中捣碎和匀浆，所得的匀浆试样并置于-25℃条件下保存，得到待测试验。

步骤二、提取：称取待测试样40g放入匀浆机中，加入50ml乙腈溶剂，在匀浆机中高速匀浆3min后用滤纸过滤，滤液收集到装有5g氯化钠的50ml具塞比色管中，收集滤液40ml，盖上塞子，剧烈震荡1min，在室温下静置30min，得到上层分液和下层分液。

步骤三、水解：准确吸取上述20ml上层溶液到25ml带螺旋瓶盖的水解管中，氮吹上层溶液完全干，加入5g吡啶盐酸盐，拧上盖子(不需要拧紧)，置于210℃沙浴中水解1.5h，冷却后，加入10ml蒸馏水，振摇使吡啶盐酸盐溶解，并用50ml蒸馏水分次冲洗水解管转移到250ml分液漏斗中，用石油醚萃取2次(每次50ml)，弃去萃取的水相，将萃取所得的有机相合并。

步骤四、净化：将上述有机相转移到100ml烧杯中，浓缩至干，用10ml正己烷分次洗烧杯，溶液转移到经正己烷-丙酮混合溶液活化的弗罗里柱，该正己烷与丙酮混合溶液的体积之比是7：1，弃去弗罗里柱中的滤液，再用25ml丙酮与正己烷混合溶液分数次洗脱弗罗里柱，该正己烷与丙酮混合溶液的体积之比是1：7，然后收集洗脱液，氮吹并洗脱液定容5ml，定容后的洗脱液供测定。

步骤五、将步骤四所得的前处理后的待测液上机测试。

实施例3。

步骤一、匀浆：选取待检测蔬果的可食部分并用对角分割法将其切割，然后取对角部分的蔬果切碎混匀再进直接放入食品加工机中捣碎和匀浆，所得的匀浆试样并置于-10℃条件下保存，得到待测试验。

步骤二、提取：称取待测试样40g放入匀浆机中，加入50ml乙腈溶剂，在匀浆机中高速匀浆3min后用滤纸过滤，滤液收集到装有6g氯化钠的50ml具塞比色管中，收集滤液40-50ml，盖上塞子，剧烈震荡1min，在室温下静置30min，得到上层分液和下层分液。

步骤三、水解：准确吸取上述20ml上层溶液到25ml带螺旋瓶盖的水解管中，氮吹上层溶液完全干，加入5g吡啶盐酸盐，拧上盖子(不需要拧紧)，置于220℃沙浴中水解1.5h，冷却后，加入10ml蒸馏水，振摇使吡啶盐酸盐溶解，并用50ml蒸馏水分次冲洗水解管转移到250ml分液漏斗中，用石油醚萃取2次(每次50ml)，弃去萃取的水相，将萃取所得的有机相合并。

步骤四、净化：将上述有机相转移到100ml烧杯中，浓缩至干，用10ml正己烷分次洗烧杯，溶液转移到经正己烷-丙酮混合溶液活化的弗罗里柱，该正己烷与丙酮混合溶液的体积之比是8：1，弃去弗罗里柱中的滤液，再用25ml丙酮与正己烷混合溶液分数次洗脱弗罗里柱，该正己烷与丙酮混合溶液的体积之比是1：8，然后收集洗脱液，氮吹并洗脱液定容5ml，定容后的洗脱液供测定。

步骤五、将步骤四所得的前处理后的待测液上机测试。

一、净化步骤的试验

(1)采用实施例1的前处理方法处理待测样品，然后将所得的待测样品上机测试，得到如图2所示的弗罗里柱净化有机相的咪鲜胺残留量色谱图，另外，测得如表1所示的咪鲜胺回收率；

(2)按照实施例1的匀浆、提取和水解步骤来处理样品，然后将所得的样品按照ny/t1456-2007的农业标准利用浓硫酸进行净化，即，将上述烧杯用20ml正己烷分数次冲洗并全部转移到分液漏斗中，加入5ml硫酸，震荡1min，精致分层后，弃去硫酸，重复3次。然后用蒸馏水洗涤有机相中的残留硫酸，洗涤至中性，收集有机相，经无水硫酸钠脱水干燥后浓缩低于5ml，并用正己烷定容至5ml，上机测定，得到如图1所示的采用浓硫酸净化有机相的咪鲜胺残留量色谱图，另外，测得如表1所示的咪鲜胺回收率。

表1不同净化方法的咪鲜胺回收率

由表1可知，弗罗里柱净化方法的咪鲜胺回收率与浓硫酸净化方法的咪鲜胺回收率相当；图2所示的弗罗里柱净化有机相的咪鲜胺残留量色谱图的杂峰较少，可知便于咪鲜胺的定量测定；而图1所示的浓硫酸净化有机相的咪鲜胺残留量色谱图的杂峰较多，则不便咪鲜胺的定量测定，由此可见，本发明弗罗里柱净化有机相不但减少安全事故发生，更能提高了咪鲜胺测定的准确性。

二、弗罗里柱洗脱剂的试验

以对咪鲜胺的回收率和净化效果为判定标准，按照实施例1的净化步骤中以不同配比的丙酮+正己烷、乙腈+二氯甲烷、丙酮+二氯甲烷三组洗脱溶剂对弗罗里柱进行样品咪鲜胺及其代谢产物洗脱实验，对回收率的测定结果见表2。

表2丙酮+正己烷、乙腈+二氯甲烷、丙酮+二氯甲烷洗脱溶剂的回收率

由表2可见，丙酮+正己烷的溶剂组合配比的回收率最高，因此，丙酮与正己烷混合液作为弗罗里柱的洗脱液具有较好的回收效果。

另外，考虑成本及回收率效果，选取丙酮与正已烷的体积之比为9：1来测定对应的咪鲜胺残留量色谱图，该色谱图如图3所示，可见杂峰较少，相应的净化效率高。

最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。