精浆生化锌离子快速检测试剂条及检测方法与流程

本发明涉及体外诊断试剂领域，特别涉及一种精浆生化锌离子快速检测试剂条及检测方法。

背景技术：

随着自然环境的恶化，男性精子质量普遍下降，精浆生化检查对评估附属性腺的功能以及研究附属性腺对男性生育的影响有重要意义。精浆锌离子可与蛋白质结合，分布在精子表面，起到保护生物膜的作用，有利于延缓膜的脂质过氧化及保持精子活力，而且锌还是抗病菌因子及酶活性的辅助因子。另外锌具有稳定精子核染色体的作用。长期锌缺乏会导致性腺发育不全，性腺功能减退，精子活力和精子密度下降。目前各大医院生殖中心测试精浆生化采用传统的酶标仪测试，操作繁琐、费时费力，而且出报告时间长达1周，不能满足及时诊断的需求。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题在于针对上述现有技术中的不足，提供一种精浆生化锌离子快速检测试剂条及检测方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：一种精浆生化锌离子快速检测试剂条，其通过以下方法制备得到：

1)将涂膜液均匀涂布于透明基底膜上，干燥后形成显色层；

2)将高分子膜粘贴于所述显色层之上，制得试剂条；

其中，所述涂膜液包括缓冲液、显色剂、成膜剂、表面活性剂、掩蔽剂和防腐剂。

优选的是，所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷，所述掩蔽剂为柠檬酸钠，所述防腐剂为叠氮钠。

优选的是，所述显色剂为4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚或者4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚钠盐或者2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-(n-丙基-n-磺丙氨)-酚。

优选的是，所述成膜剂包括明胶、羟乙基纤维素和聚丙烯酰胺中的一种或多种。

优选的是，所述表面活性剂包括聚乙烯吡咯烷酮、聚氧乙烯月桂酸醚和聚乙二醇中的一种或多种。

优选的是，其中，1000ml所述涂膜液中各成分的含量为：缓冲液1000ml，成膜剂80-150g，显色剂1～6g，表面活性剂8～15g，掩蔽剂10～16g，防腐剂6～12g；其中缓冲液的ph为8～10。

优选的是，所述高分子膜为硝酸纤维素膜、聚醚砜膜或聚酯膜。

优选的是，所述显色层表面还涂布有屏蔽膜，所述屏蔽膜的材料为明胶或聚丙烯酰胺或琼脂糖。

优选的是，所述试剂条的最上层还设置有亲水性尼龙膜。

一种精浆生化锌离子快速检测方法，其采用上述的精浆生化锌离子快速检测试剂条进行检测。

本发明的有益效果是：本发明制备的精浆生化锌离子快速检测试纸条，在碱性条件下，精浆锌离子能够与试纸条中的显色层迅速发生反应，反应产物在特定波长有很强的吸收峰，在一定的锌离子浓度范围内，试纸条变色明显，易于目视分辨和机读，且不受精浆中其他物质的干扰，试纸条制备方法简单，易操作。本发明的精浆生化锌离子快速检测方法，采用该试纸条进检测，测试快速(一两分钟内完成单个测试)，性能稳定，测定结果准确。

附图说明

图1为本发明的一种实施例中的精浆生化锌离子标准曲线图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不排除一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。

本实施例的一种精浆生化锌离子快速检测试剂条，其通过以下方法制备得到：

1)将涂膜液均匀涂布于透明基底膜上，干燥后得到显色层；

2)将高分子膜粘贴于所述显色层之上，制得试剂条。

再切割制得的试剂条，以保存备用。

其中，所述涂膜液包括缓冲液、显色剂、成膜剂、表面活性剂、掩蔽剂和防腐剂。所述缓冲液为三羟甲基氨基甲烷(tris)，所述掩蔽剂为柠檬酸钠，所述防腐剂为叠氮钠。所述显色剂为4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚或者4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚钠盐或者2-(5-溴-2-吡啶偶氮)-5-(n-丙基-n-磺丙氨)-酚。所述成膜剂包括明胶、羟乙基纤维素和聚丙烯酰胺中的一种或多种。所述表面活性剂包括聚乙烯吡咯烷酮(pvp)、聚氧乙烯月桂酸醚(brij35)和聚乙二醇中的一种或多种。

在一种优选实施例中，1000ml所述涂膜液中各成分的含量为：缓冲液1000ml，成膜剂80-150g，显色剂1～6g，表面活性剂8～15g，掩蔽剂10～16g，防腐剂6～12g；其中缓冲液的ph为8～10。

在一种优选实施例中，所述高分子膜为硝酸纤维素膜、聚醚砜膜或聚酯膜。

在一种优选实施例中，所述显色层表面还涂布有屏蔽膜，所述屏蔽膜由高分子材料制成，其材料可为明胶或聚丙烯酰胺或琼脂糖。防止加入样品后反应过程中显色剂返回到硝酸纤维素膜中

在一种优选实施例中，所述试剂条的最上层还设置有亲水性尼龙膜，亲水性尼龙膜能实现样品快速均匀的扩散。

本实施例还提供一种精浆生化锌离子快速检测方法，其采用上述精浆生化锌离子快速检测试剂条进行检测。

以下再提供具体实施例，以对本发明进行进一步说明。

实施例1

精浆生化锌离子快速检测试剂条的制备步骤包括：

1)配置溶液a，溶液a中含有：

4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚钠盐：3g

明胶：100g，

聚乙二醇：12g，

柠檬酸钠：13g，

叠氮钠：8g，

tris缓冲液(ph＝9.0)定容至1000ml；

2)将溶液a均匀涂布于塑料基底膜之上，干燥10分钟后，形成显色层；

3)将硝酸纤维素膜铺于显色层之上形成高分子膜，低湿环境干燥后，得到试剂条。

将该试纸用于精浆生化锌离子测试，检测结果表明其显色效果好，梯度明显。

实施例2

精浆生化锌离子快速检测试剂条的制备步骤包括：

1)配置溶液a，溶液a中含有：

4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚钠盐：5g

明胶：100g，

聚乙二醇：12g，

柠檬酸钠：13g，

叠氮钠：8g，

tris缓冲液(ph＝9.0)定容至1000ml；

2)溶液a均匀涂布于塑料基底膜之上，干燥3小时，形成显色层；

3)配置溶液b，溶液b中含有：

明胶：90g

tris缓冲液(ph＝9.0)定容至1000ml。

4)将溶液b均匀涂布于显色层之上；

5)b液干燥15分钟后形成屏蔽膜，将硝酸纤维素膜铺于其之上形成高分子膜，低湿环境干燥；

6)将亲水性尼龙膜铺于硝酸纤维素膜之上，切割成特定尺寸得到试剂条，固定于卡壳中。

将该试纸用于精浆生化锌离子测试，检测结果表明其显色效果好，梯度明显。

实施例3

一种精浆生化锌离子快速检测方法，其包括以下步骤：

1)配置0mmol/l，0.625mmol/l，1.25mmol/l，2.5mmol/l,5.0mmol/l,7.5mmol/l,10mmol/l的锌离子标准溶液；

2)将上述7种标准溶液分别滴加到实施例2制备好的精浆生化锌离子试纸条；

3)使用干化学分析仪测定1分钟的反射吸光度，根据7个点绘制标准曲线，如图1；

4)检测样本时，将样本加入到按照实施例2制备好的精浆生化试纸条，1分钟后使用干化学分析仪测定反射吸光度，测得的反射吸光度与标准曲线上对应的浓度即为待测样本液锌离子浓度。

实施例4

进行抗干扰测试：

分别配置含有ca²⁺(2.5mmol/l)，mg²⁺(2.5mmol/l)，牛血清白蛋白(bsa)(15g/l)的锌离子标准溶液(0mmol/l，0.625mmol/l，1.25mmol/l，2.5mmol/l,5.0mmol/l,7.5mmol/l,10mmol/l)进行抗干扰测试。测试结果表明样本中含有ca²⁺(2.5mmol/l)，mg²⁺(2.5mmol/l)，bsa(15g/l)对测试没有影响。

本发明的精浆生化锌离子快速检测试纸条，在碱性条件下，精浆锌离子能够与试纸条种的4-(2-吡啶偶氮)-间苯二酚一钠迅速发生反应，反应产物在490nm有很强的吸收峰，锌离子浓度在0-10mm/l范围内，试纸呈现从浅黄到深红色的明显色阶，易于目视分辨和机读，且不受精浆中其他物质的干扰，试纸制备方法简单，易操作，测试快速(一两分钟内完成单个测试)，性能稳定，测定结果准确。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。