本发明涉及类风湿关节炎技术领域，具体涉及一种使用血清中卵泡抑素样蛋白-1辅助评估早期类风湿关节炎的研究方法。
背景技术：
类风湿性关节炎是现在困扰很多人的疾病，给很多患者带来了长久的痛苦，因为类风湿性关节炎病因未明，且是一种慢性的疾病。类风湿性关节炎可能会对肾脏、内脏、呼吸系统等造成危害，还可能造成关节畸形，因此，类风湿性关节炎越早发现越好，便于治疗。
技术实现要素：
本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种使用血清中卵泡抑素样蛋白-1辅助评估早期类风湿关节炎的研究方法。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：
一种使用血清中卵泡抑素样蛋白-1辅助评估早期类风湿关节炎的研究方法，包括：
(1)使用非抗凝管静脉抽取早期类风湿关节炎患者的血液3-4毫升，自然凝结分离出血浆；
(2)利用elisa试剂盒检测其中fstl1蛋白的表达水平；
(3)将检测到的fstl1蛋白的表达数据与正常人的fstl1表达范围作对比。
上述方法中，所述步骤(2)具体包括：
(2.1)检测前一晚包被96孔板用于elisa，用pbs缓冲液将捕获抗体稀释至工作浓度，按照每孔100μl加入96孔板中，用封板膜封闭后室温过夜；
(2.2)检测当天先将孔中的液体吸除，进行板清洗；最后在每孔中加入300μl的试剂稀释液，室温封闭至少1个小时，重复一遍之前的板清洗步骤；
(2.3)提前将样品从-80℃冰箱取出，冰上溶解，然后按照说明书梯度稀释试剂盒内附带的人fstl1标准品蛋白，于15分钟内将100μl的标准品及检测样品依次加入之前包被好的96孔中，用封板膜封闭后室温孵育2小时；
(2.4)先将孔中的液体吸除，然后进行板清洗；每孔加入100μl稀释好的检测抗体，用封板膜封闭后室温孵育2小时；
(2.5)先将孔中的液体吸除，然后进行板清洗；每孔加入100μlhrp藕联的链霉亲和素溶液，避光孵育20分钟；
(2.6)先将孔中的液体吸除，然后进行板清洗；每孔加入100μl的显色底物溶液，避光孵育20分钟；每孔加入50μl的终止溶液，轻拍96孔板混合均匀；立即使用微板光度计于450nm处读取吸光度值，进行数据分析，得到fstl1蛋白的表达数据。
上述方法中，步骤(2.2)、步骤(2.4)、(2.5)、(2.6)中，进行孔板清洗的方法为：每孔加入400μl清洗缓冲液清洗3遍，每一遍都用吸引器将孔中的清洗缓冲液吸干或者在纸巾上拍干。
血清中卵泡抑素样蛋白-1在早期类风湿关节炎诊断中的应用，其中，将血清中卵泡抑素样蛋白-1作为诊断早期类风湿关节炎的生物标记物，早期类风湿关节炎患者血清中的卵泡抑素样蛋白-1的浓度高于正常范围。
综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明与现有技术相比，有以下优点：
本发明通过研究，可以将血清中卵泡抑素样蛋白-1应用在诊断早期类风湿关节炎中，将血清中卵泡抑素样蛋白-1的浓度作为一个诊断的指标，稳定性好，且对比明显，可以及早诊断类风湿关节炎，有利于控制病情发展及治疗。
具体实施方式
下面对本发明的具体实施方式作进一步详细介绍。
本发明提供了一种使用血清中卵泡抑素样蛋白-1辅助评估早期类风湿关节炎的研究方法，因为早期类风湿关节炎的指标并不明确，很有可能类风湿因子(rf)是阴性，但是及早诊断有利于控制病情发展及治疗。
本发明的研究方法包括：
(1)使用非抗凝管静脉抽取早期类风湿关节炎患者的血液3-4毫升，自然凝结分离出血浆；
(2)利用elisa试剂盒检测其中fstl1蛋白的表达水平；
(3)将检测到的fstl1蛋白的表达数据与正常人的fstl1表达范围作对比。
上述方法中，所述步骤(2)具体包括：
(2.1)检测前一晚包被96孔板用于elisa，用pbs缓冲液将捕获抗体稀释至工作浓度，按照每孔100μl加入96孔板中，用封板膜封闭后室温过夜；
(2.2)检测当天先将孔中的液体吸除，进行板清洗；最后在每孔中加入300μl的试剂稀释液，室温封闭至少1个小时，重复一遍之前的板清洗步骤；
(2.3)提前将样品从-80℃冰箱取出，冰上溶解，然后按照说明书梯度稀释试剂盒内附带的人fstl1标准品蛋白，于15分钟内将100μl的标准品及检测样品依次加入之前包被好的96孔中，用封板膜封闭后室温孵育2小时；
(2.4)先将孔中的液体吸除，然后进行板清洗；每孔加入100μl稀释好的检测抗体，用封板膜封闭后室温孵育2小时；
(2.5)先将孔中的液体吸除，然后进行板清洗；每孔加入100μlhrp藕联的链霉亲和素溶液，避光孵育20分钟；
(2.6)先将孔中的液体吸除，然后进行板清洗；每孔加入100μl的显色底物溶液，避光孵育20分钟；每孔加入50μl的终止溶液，轻拍96孔板混合均匀；立即使用微板光度计于450nm处读取吸光度值，进行数据分析，得到fstl1蛋白的表达数据。
在上述步骤(2.2)、步骤(2.4)、(2.5)、(2.6)中，进行孔板清洗的方法为：每孔加入400μl清洗缓冲液清洗3遍，每一遍都用吸引器将孔中的清洗缓冲液吸干或者在纸巾上拍干。
将早期类风湿关节炎患者血清中卵泡抑素样蛋白-1的表达数据与正常表达范围进行对比得知，早期类风湿关节炎患者血清中的卵泡抑素样蛋白-1的浓度高于正常范围。
因此，可以将血清中卵泡抑素样蛋白-1应用在诊断早期类风湿关节炎中，将血清中卵泡抑素样蛋白-1的浓度作为一个诊断的指标，稳定性好，且对比明显，可以及早诊断类风湿关节炎，有利于控制病情发展及治疗。
以上所述的实施例仅用于说明本发明的技术思想及特点，其目的在于使本领域内的技术人员能够了解本发明的内容并据以实施，不能仅以本实施例来限定本发明的专利范围，即凡依本发明所揭示的精神所作的同等变化或修饰，仍落在本发明的专利范围内。