专利名称：兽用血促性素生产工艺及其产品的制作方法
技术领域：
本发明提供一种兽用血促性素生产工艺及其产品，涉及兽用血促性素生产工艺的改进，属于兽用生物制剂生产方法技术领域。
背景技术：
兽用血促性素为从孕马血清中提取的一种具有促进动物性功能作用的物质，该物质最早由Cole和Hart于1930年发现于孕马血清中，因其具有促进性腺发育功能，故此命名为Pregnant Mare SerumGonadotrophin PMSG汉译名为孕马血清促性腺激素。兽用血促性素为中国兽药典对此物质的命名，其化学本质为糖蛋白，由非共价键相连的α亚基和β亚基组成，共有255个氨基酸，其中α亚基含有96个氨基酸，β亚基含有149个氨基酸。PMSG的α亚基与马LH、FSH和TSH的α亚基序列是完全相同的，但与其它哺乳动物LH、FSH和TSH的α亚基序列不同。PMSG的β亚基具有专属特异性。PMSG在所有哺乳动物的糖蛋白激素中是含糖量最高的，其含糖量占整个分子量的41.7％，主要为半乳糖、N-乙酰基葡糖胺和唾液酸。PMSG的等电点为2.60-2.65，分子量为64,030道尔顿。血促性素制品是通过对孕马血液的分离、纯化、冷冻真空干燥等工序制取的，我国农业部部颁标准为兽用制品纯度达到100IU/mg即可。
目前，生产血促性素的主要工艺是偏磷酸-乙醇分步沉淀法。该法的主要不足为，在实验室中小样本提取可获较高收率，但放大到1万ml血清/批时，收率明显降低，常常不到30％，分析原因，可能是偏磷酸沉淀一步因样本量较大，偏磷酸与样品的反应不均匀，而使活性物质大量丢失。
发明内容
本发明公开一种兽用血促性素生产工艺，解决现有兽用血促性素生产工艺存在着的收率较低等问题。
本发明的技术解决方案包括以下步骤取孕马血清(平均效价100IU/ml以上)，用等量蒸馏水稀释，边搅拌边加固体硫酸铵至终浓度32～36％，用浓氨水调PH至6.0～7.0，充分搅拌后，滤布过滤，清液边搅拌边缓慢滴加0.5～1N偏磷酸调PH至3.8～4.6，充分搅拌后，滤布过滤。清液经中空纤维超滤器浓缩(截留分子量20KU)，使体积浓缩至原体积的40～50％左右，此浓缩液称量体积后，缓慢加入预冷酒精，使40％乙醇沉淀，用浓氨水调PH至6.2～6.8，静止分层后，虹吸上清，称量体积。加预冷医用酒精至终浓度80％，用冰醋酸调PH至3.6～4.4，静止分层后，虹吸法吸弃上清，剩余的部分混浊液离心取沉淀。将此沉淀用适量生理盐水溶起，装入透析袋中透析24小时，80％酒精沉淀，沉淀物置干燥器中负压抽气至干燥，称重，取少许进行生物活性检测，计算收率和纯度。
本发明与现有技术相比具有以下积极效果提高了兽用血促性素收率。现有的偏磷酸-乙醇分步沉淀法，适于实验室小批量提取，当放大到生产规模时(10000ml以上)，则收率一般只有30％左右。本生产工艺的收率约为70％，高于现在技术2倍以上。保持纯度在兽药标准之上。本工艺获得的产品，纯度为100~300IU/mg，可满足兽药生产需要。节约酒精。本工艺采用中空纤维超滤技术浓缩中间品，使酒精用量比未使用浓缩技术前减少了60％，酒精是本工艺中最为贵重的试剂，因此大幅降低了成本。减少离心机的使用。本工艺充分利用自然沉降或滤布过滤法分离清液与沉淀物，最大程度减少了离心机的使用量。离心机是本工艺中最昂贵的仪器设备，因此采用本工艺可节约成本。
具体实施例方式通过以下实施例进一步举例描述本发明，并不以任何方式限制本发明，在不背离本发明的技术解决方案的前提下，对本发明所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改动或改变都将落入本发明的权利要求范围之内。
实施例1051010批提取过程和结果取孕马血清10000ml加蒸馏水10000ml边搅拌边添加固体硫酸铵(分析纯)600克，用浓氨水调PH至6.0后，滤布过滤，滤液中加入新鲜配制的1N偏磷酸，调PH至4.2；滤布过滤，收集滤液，中空纤维超滤器(截留分子量20KU)超滤浓缩至体积5000ml，加入预冷酒精至终浓度40％，浓氨水调PH至6.2，虹吸法吸出上清，加入预冷酒精至终浓度80％，冰醋酸调PH至4.0，虹吸法吸弃上清，将沉淀用生理盐水溶起，透析，加入预冷酒精至终浓度80％，静止分层后，虹吸法吸弃上清，将沉淀转移到玻璃平皿中，置于玻璃真空干燥器中，低温室中抽真空干燥，称重，取10mg测生物学活性(大鼠卵巢增重3+3+3法)。
结果本批活性收率为71.6％，纯度为268IU/mg。
实施例2051208批提取过程和结果取孕马血清20000ml加蒸馏水20000ml，边搅拌边添加固体硫酸铵(分析纯)1200克，添加时注意将大的颗粒碾碎，用小汤匙逐匙缓慢添加，用浓氨水调PH至7.0，滤布过滤，加入1N偏磷酸，用酸度计监测PH至4.6，滤布过滤，中空纤维超滤器(截留分子量20KU)超滤浓缩至体积13000ml，加入预冷酒精至终浓度40％，浓氨水调PH至6.8，虹吸法吸出上清，加入预冷酒精至终浓度80％，冰醋酸调PH至4.4，虹吸法吸弃上清(作为废酒精回收)，沉淀用生理盐水溶起，透析，加入预冷酒精至终浓度80％，虹吸法吸弃上清(作为废酒精回收)，将沉淀转移到玻璃平皿中，置于玻璃真空干燥器中，低温室中抽真空干燥，称重，取10mg测生物学活性(大鼠卵巢增重3+3+3法)。
结果本批活性收率为69.4％，纯度为215IU/mg。
实施例3051220批提取过程和结果取孕马血清20000ml加蒸馏水20000ml，边搅拌边添加固体硫酸铵(分析纯)1200克，用浓氨水调PH至6.4，滤布过滤，加入1N偏磷酸(分析纯)，用酸度计监测PH至4.0，滤布过滤，收集滤液，中空纤维超滤器(截留分子量20KU)超滤浓缩至体积13000ml，加入预冷酒精至终浓度40％，浓氨水调PH至6.2，虹吸法吸出上清，加入预冷酒精，冰醋酸调PH至3.6，虹吸法吸弃上清(作为废酒精回收)，沉淀用生理盐水溶起，透析，边加入预冷酒精至终浓度80％，虹吸法吸弃上清(作为废酒精回收)，沉淀转移到玻璃平皿中，置于玻璃真空干燥器中，低温室中抽真空干燥，称重，取10mg测生物学活性(大鼠卵巢增重3+3+3法)。
结果本批活性收率为69.8％，纯度为220IU/mg。
权利要求
1.一种兽用血促性素生产工艺，包括以下步骤取孕马血清用等量蒸馏水稀释，边搅拌边加固体硫酸铵至终浓度32～36％，用浓氨水调PH至6.0～7.0，充分搅拌后，滤布过滤，清液边搅拌边缓慢滴加0.5～1N偏磷酸调PH至3.8～4.6，充分搅拌后，滤布过滤；清液经中空纤维超滤器浓缩，截留分子量为20KU，使体积浓缩至原体积的40～50％左右，此浓缩液称量体积后，缓慢加入预冷酒精，使40％乙醇沉淀，用浓氨水调PH至6.2～6.8，静止分层后，虹吸上清，称量体积；加预冷医用酒精至终浓度80％，用冰醋酸调PH至3.6～4.4，静止分层后，虹吸法吸弃上清，剩余的部分混浊液离心取沉淀；将此沉淀用适量生理盐水溶起，装入透析袋中透析24小时，80％酒精沉淀，沉淀物置干燥器中负压抽气至干燥的本发明产品。
全文摘要
本发明公开一种兽用血促性素生产工艺，取孕马血清用等量蒸馏水稀释，边搅拌边加固体硫酸铵，用浓氨水调pH，充分搅拌后，滤布过滤，清液滴加偏磷酸调pH，滤布过滤。清液经中空纤维超滤器浓缩，使体积浓缩至原体积的40～50％左右，缓慢加入预冷酒精，使40％乙醇沉淀，用浓氨水调pH，静止分层后，虹吸上清，加预冷医用酒精，用冰醋酸调pH，静止分层后，虹吸法吸弃上清，剩余的部分混浊液离心取沉淀。将此沉淀用生理盐水溶起，透析，酒精沉淀，沉淀物置干燥器中负压抽气至干燥。本发明解决了现有兽用血促性素生产工艺存在的缺点，提高了兽用血促性素收率，保持纯度在兽药标准之上，并大幅降低了兽用血促性素生产成本。
文档编号A61P15/00GK1872088SQ20061001678
公开日2006年12月6日 申请日期2006年4月21日 优先权日2006年4月21日
发明者谭建华, 万忠海, 崔青山 申请人:中国人民解放军军事医学科学院军事兽医研究所