一种无聚合物药物涂层洗脱支架体外释放度的测定方法与流程

本发明涉及一种测定方法，尤其涉及一种无聚合物药物涂层洗脱支架体外释放度的测定方法。
背景技术：
：biolimusa9(ba9)药物涂层洗脱支架系统为自主研发的先进医疗辅助器械，由钴铬支架组成，在没有聚合物载体的情况下涂上活性药物成分biolimusa9，祥见发明专利申请号cn201810683595.3及cn201811397255.0。支架平台所涂的药物活性成分biolimusa9是一种半合成的西罗莫司衍生物，具有抗增殖与西罗莫司相似的药代动力学作用。临床应用光学相干断层显像技术评估biolimusa9支架缓释和快速释放模式对内膜增生的影响，发现缓释区内膜增生厚度更薄，更有利于减少再狭窄发生。随着药物控释系统(dds)技术的迅速发展，释放度的概念随之提出。释放度是指口服药物从缓释制剂、控释制剂、迟释制剂及透皮释药系统等在规定的溶剂中释放的速度和程度。理想的药物体外、体内释放性能应符合临床要求不受或少受生理与实物因素的影响。所以应有一个能反映体内基本情况的、合理的ba9洗脱支架体外释放度的试验方法，以监测药品的生产过程，并对药品进行质量控制，保证制剂的安全性和有效性。技术实现要素：为了解决上述技术所存在的不足之处，本发明提供了一种无聚合物药物涂层洗脱支架体外释放度的测定方法。为了解决以上技术问题，本发明采用的技术方案是：一种无聚合物药物涂层洗脱支架体外释放度的测定方法，包括如下步骤：步骤一、制备ba9标准曲线：a、配制洗脱液：配置吐温20含量为0.4％的pbs缓冲液作为洗脱液；b、配制ba9标准贮备液：精密称取ba9对照品并溶于少量乙腈中，然后采用洗脱液配制浓度为25μg/ml的ba9标准贮备液，-20℃下储存；乙腈的添加量少于5％的体积分数；c、配制ba9标准稀释液：间隔选取0～25μg/ml内的7个浓度，并通过ba9标准贮备液以及洗脱液对应配置该浓度下的ba9标准稀释液，分别放入至7个试剂瓶内；轻轻颠倒混匀，放置使多余气泡跑出；-20℃下储存；d、制备ba9标准曲线：使用紫外分光光度计于278nm波长下按照浓度由低至高的顺序测定上述各标准稀释液的吸光度，并回归出浓度-吸光度的标准曲线方程；步骤二、体外释放度测定：a、样品准备：用压力充盈装置将待测支架产品在标称压力下撑开后，转移至棕色试剂瓶中；向待测支架产品中缓慢加入适量洗脱液，并置于37℃的水浴中；此时记为0点；b、样品测定：量取2ml释放液作为供试液，使用紫外分光光度计于278nm波长下按照测试点1hr、2hr、6hr、24hr依次测定待测支架产品各点的释放液吸光度；c、计算释放量及释放度：将上述吸光度分别代入至浓度-吸光度标准曲线方程中，计算得到待测支架产品在各点处的药物释放浓度；再分别根据公式一、公式二、公式三、公式四计算待测支架产品在1hr、2hr、6hr、24hr的药物涂层累积释放量：c1h×v公式一c2h×(v-2)+2c1h公式二c6h×(v-4)+2c2h+2c1h公式三c24h×(v-6)+2c6h+2c2h+2c1h公式四对应的药物涂层累积释放度的计算公式，分别如公式五、公式六、公式七、公式八所示：其中，c1h、c2h、c6h、c24h分别为1hr、2hr、6hr、24hr时间点的药物释放浓度，v为洗脱液体积，m为支架标称载药量。进一步地，洗脱液的具体配置过程为：称取4g吐温20至1000ml试剂瓶中，然后加入ph＝7.4的pbs缓冲液996g，磁力搅拌至吐温20和pbs缓冲液混合均匀。进一步地，pbs缓冲液的配置方法为：取磷酸二氢钾6.8g，加0.1mol/l氢氧化钠溶液395ml，用水稀释至1000ml，ph＝7.4。进一步地，洗脱液储存在0～10℃环境中，保质期7天；洗脱液使用之前先放置于室温，之后放于37℃水浴中预热半小时。进一步地，ba9标准曲线的具体制备过程为：选取ba9标准稀释液的浓度分别为：0.3788μg/ml、0.7576μg/ml、1.5153μg/ml、3.0305μg/ml、6.0610μg/ml、12.1220μg/ml、24.2440μg/ml；首先在石英比色皿中加入0.3788μg/ml的标准稀释液，于278nm下测定吸光度；按照浓度从低到高的顺序，再依次测定0.7576μg/ml、1.5153μg/ml、3.0305μg/ml、6.0610μg/ml、12.1220μg/ml、24.2440μg/ml于278nm下的标准稀释液吸光度；每组测定均重复三次，求均值；每组测定在倒入待测液之前均使用待测液润洗比色皿两次；根据测定值绘制标准曲线，要求相关系数r2≥0.999。进一步地，步骤二中样品测定时，加入洗脱液的体积根据待测支架产品的长度进行选择；当支架长度≤16mm，加入25ml洗脱液；当支架长度＞16mm，加入50ml洗脱液。进一步地，步骤二中体外释放度测定时，准备三组样品求均值，以提高释放液吸光度测定的准确性。本发明可有效测定ba9药物涂层洗脱支架体外释放度，并且测量方法简单、高效，可为临床应用提供支持，具有重要的实用性。附图说明图1为实施例一中绘制的标准曲线示意图。图2为实施例一的测定结果曲线示意图。具体实施方式下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。一种无聚合物药物涂层洗脱支架体外释放度的测定方法，包括如下步骤：步骤一、制备ba9标准曲线：a、配制洗脱液：配置吐温20含量为0.4％的pbs缓冲液作为洗脱液，具体过程为：称取4g吐温20至1000ml试剂瓶中，然后加入ph＝7.4的pbs缓冲液996g，磁力搅拌至吐温20和pbs缓冲液混合均匀。其中，pbs缓冲液的配置方法为：取磷酸二氢钾6.8g，加0.1mol/l氢氧化钠溶液395ml，用水稀释至1000ml，ph＝7.4。配置好的洗脱液储存在0～10℃环境中，保质期7天；洗脱液使用之前先放置于室温，之后放于37℃水浴中预热半小时。b、配制ba9标准贮备液：精密称取ba9对照品并溶于少量乙腈中，然后采用洗脱液配制浓度为25μg/ml的ba9标准贮备液，-20℃下储存，保质期一个月；乙腈的添加量少于5％的体积分数；c、配制ba9标准稀释液：间隔选取0～25μg/ml内的7个浓度，并通过ba9标准贮备液以及洗脱液对应配置该浓度下的ba9标准稀释液，分别放入至7个试剂瓶内；轻轻颠倒混匀，放置使多余气泡跑出；-20℃下储存，保质期一个月；d、制备ba9标准曲线：使用紫外分光光度计于278nm波长下按照浓度由低至高的顺序测定上述各标准稀释液的吸光度，并回归出浓度-吸光度的标准曲线方程；ba9标准曲线的具体制备过程为：选取ba9标准稀释液的浓度分别为：0.3788μg/ml、0.7576μg/ml、1.5153μg/ml、3.0305μg/ml、6.0610μg/ml、12.1220μg/ml、24.2440μg/ml；首先在石英比色皿中加入0.3788μg/ml的标准稀释液，于278nm下测定吸光度；按照浓度从低到高的顺序，再依次测定0.7576μg/ml、1.5153μg/ml、3.0305μg/ml、6.0610μg/ml、12.1220μg/ml、24.2440μg/ml于278nm下的标准稀释液吸光度；每组测定均重复三次，求均值；每组测定在倒入待测液之前均使用待测液润洗比色皿两次；根据测定值绘制标准曲线，要求相关系数r2≥0.999。步骤二、体外释放度测定：a、样品准备：用压力充盈装置将待测支架产品在标称压力下撑开后，转移至棕色试剂瓶中；向待测支架产品中缓慢加入适量洗脱液，并置于37℃的水浴中；此时记为0点；加入洗脱液的体积根据待测支架产品的长度进行选择；当支架长度≤16mm，加入25ml洗脱液；当支架长度＞16mm，加入50ml洗脱液。b、样品测定：量取2ml释放液作为供试液，使用紫外分光光度计于278nm波长下按照测试点1hr、2hr、6hr、24hr依次测定待测支架产品各点的释放液吸光度；每次测定均准备三组样品求均值，以提高释放液吸光度测定的准确性。c、计算释放量及释放度：将上述吸光度分别代入至浓度-吸光度标准曲线方程中，计算得到待测支架产品在各点处的药物释放浓度；再分别根据公式一、公式二、公式三、公式四计算待测支架产品在1hr、2hr、6hr、24hr的药物涂层累积释放量：c1h×v公式一c2h×(v-2)+2c1h公式二c6h×(v-4)+2c2h+2c1h公式三c24h×(v-6)+2c6h+2c2h+2c1h公式四对应的药物涂层累积释放度的计算公式，分别如公式五、公式六、公式七、公式八所示：其中，c1h、c2h、c6h、c24h分别为1hr、2hr、6hr、24hr时间点的药物释放浓度，v为洗脱液体积，m为支架标称载药量。支架标称载药量m的取值根据不同支架进行设置，可参考表1：表1下面通过具体实施例对本发明的技术效果做详细说明：实施例一、(1)分别设置浓度为0.3788μg/ml、0.7576μg/ml、1.5153μg/ml、3.0305μg/ml、6.0610μg/ml、12.1220μg/ml、24.2440μg/ml的ba9标准稀释液，并测得各稀释液对应的吸光度值如表2所示：表2浓度μg/ml吸光度10.37880.00920.75760.03131.51530.06343.03050.13356.06100.271612.12200.563724.24401.149根据表2中数据绘制标准曲线，得标准曲线方程y＝0.0477x-0.0107，r2＝0.9999，表明此标准曲线线性良好，满足测定要求。标准曲线如图1所示。(2)选取表1中bfc-3019型号产品，m值为304μg，v＝50ml，对其体外释放量及释放度进行测定及计算，计算结果如表3所示：表3将上述结果绘制呈曲线，如图2所示。结果表明ba9样品的释放度在1小时、2小时、6小时、24小时的累积释放量分别为标示量的15％-18％、28&-31％、51％-58％、80％以上，均符合药典规定；并且3组平行产品的测定结果比较稳定，相对标准偏差不大，释放趋势一致。上述实施方式并非是对本发明的限制，本发明也并不仅限于上述举例，本
技术领域：
的技术人员在本发明的技术方案范围内所做出的变化、改型、添加或替换，也均属于本发明的保护范围。当前第1页12