复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分鉴定方法与流程

本发明涉及糖浆剂质量检测领域，特别涉及一种复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分鉴定方法。

背景技术：

复方三维右旋泛酸钙糖浆，又称为维他肥儿膏、维力膏，由维生素b1、维生素b2、维生素b6、烟酰胺、泛酸钙(也可称为维生素b5)这5种西药成分和另外10种中药(党参、白术、茯苓、薏苡仁、芡实、山药、山楂、焦麦芽、莲子、白扁豆)浸膏及饴糖等组成的，用于营养不良及维生素缺乏症，具有治疗儿童厌食症的作用。由于复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏的化学成分复杂，现有技术中未见对复方三维右旋泛酸钙糖浆的中药流浸膏的化学成分进行鉴定的报道，无法对其中药流浸膏进行有效的质量控制。

技术实现要素：

本发明所要解决的技术问题是：提供一种快速、准确的复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分鉴定方法。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：一种复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分鉴定方法，包括以下步骤：

s1：查阅党参、茯苓、莲子、薏苡仁、山楂、白扁豆、白术、麦芽、芡实和山药中已分离鉴定的化学成分，建立化学成分数据库，所述化学成分数据库包括化学名、分子式、分子量和化学结构信息；

s2：对复方右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏进行一级质谱，根据得到的质谱分子离子峰所得到的精确化合物分子质量信息计算出分子式；

s3：将计算出的分子式与化学成分数据库的化学名、分子式和分子量进行比对，初步判定该质谱分子离子峰的化学成分；

s4：将分离得到的该质谱分子离子峰进行碰撞诱导解离，通过二级质谱的裂解，得到化合物相应的碎片离子；

s5：将得到的碎片离子与化学成分数据库的化学结构信息进行比对，进一步确定该质谱分子离子峰的化学成分。

本发明的有益效果在于：本发明提供的复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏的化学成分鉴定方法中，通过建立中药流浸膏的原料进行检索，建立化学成分数据库，再通过一级质谱分离出离子峰，通过二级质谱得到离子碎片，通过离子峰和离子碎片信息的分析并与化学成分数据库比对，从而快速、准确地鉴定复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏中的各化学成分，目前，采用上述方法，已成功鉴定了179个化合物，通过上述方法可准确鉴定复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏的各化学成分，为复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏的药效、药理研究打下基础。

附图说明

图1为复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏样品uhplc-qexactive轨道肼高分辨质谱的正离子流图；

图2为复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏样品uhplc-qexactive轨道肼高分辨质谱的负离子流图。

具体实施方式

为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式并配合附图予以说明。

本发明最关键的构思在于：通过建立中药流浸膏的原料进行检索，建立化学成分数据库，再通过一级质谱分离出离子峰，通过二级质谱得到离子碎片，通过离子峰和离子碎片信息的分析并与化学成分数据库比对，从而快速、准确地鉴定复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏中的各化学成分。

本发明涉及一种复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分鉴定方法，包括以下步骤：

s1：查阅党参、茯苓、莲子、薏苡仁、山楂、白扁豆、白术、麦芽、芡实和山药中已分离鉴定的化学成分，建立化学成分数据库，所述化学成分数据库包括化学名、分子式、分子量和化学结构信息；

s2：对复方右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏进行一级质谱，根据得到的质谱分子离子峰所得到的精确化合物分子质量信息计算出分子式；

s3：将计算出的分子式与化学成分数据库的化学名、分子式和分子量进行比对，初步判定该质谱分子离子峰的化学成分；

s4：将分离得到的该质谱分子离子峰进行碰撞诱导解离，通过二级质谱的裂解，得到化合物相应的碎片离子；

s5：将得到的碎片离子与化学成分数据库的化学结构信息进行比对，进一步确定该质谱分子离子峰的化学成分。

上述复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏的化学成分鉴定方法中，通过建立中药流浸膏的原料进行检索，建立化学成分数据库，再通过一级质谱分离出离子峰，通过二级质谱得到离子碎片，通过离子峰和离子碎片信息的分析并与化学成分数据库比对，从而快速、准确地鉴定复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏中的各化学成分，目前，采用上述方法，已成功鉴定了179个化合物，通过上述方法可准确鉴定复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏的各化学成分，为复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏的药效、药理研究打下基础。

进一步的，上述复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分鉴定方法中，所述一级质谱及二级质谱的质谱条件如下：

q-exactive四级杆-静电场轨道阱高分辨质谱采用电喷雾离子源正、负离子两种模式：正离子模式下的喷涂电压为3.8kv，负离子模式下的喷涂电压为3.1kv，毛细管温度为320℃，鞘气流速为45psi，辅助气体流量为15psi，质荷比窗口宽度设置为3，碰撞能梯度为nce模式：20，40，60ev，扫描速率为7hz；质谱测定数据采用全扫描模式采集，数据采集范围为m/z70～1000；

所述一级质谱的分辨率为70000；所述二级质谱的分辨率为17500。

进一步的，上述复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分鉴定方法中，所述s2具体为：

s2：对复方右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏进行一级质谱，根据得到的质谱分子离子峰所得到的精确化合物分子质量信息，通过xcalibur3.0软件在5ppm的质量偏差范围内计算出分子式。

进一步的，上述复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分鉴定方法中，所述s4具体为：

s4：将分离得到的该质谱分子离子峰进行碰撞诱导解离，通过二级质谱的裂解，得到化合物相应的碎片离子，采用msdataanlysis软件分析碎片离子的化学结构信息。

进一步的，上述复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分鉴定方法中，所述s5之后，还包括步骤：

s6：配制所鉴定化学成分的对照品溶液，同时配制复方三维右旋泛酸钙糖浆的供试品溶液，将对照品溶液与供试品溶液在相同的色谱条件和质谱条件下分析所鉴定化学成分在供试品和对照品中的保留时间、mrm色谱图是否一致。

由上述描述可知，通过s5所鉴定的的化合物，购买相应化合物的对照品，并配置对照品溶液，与供试品溶液在相同的色谱条件和质谱条件下，分析所鉴定化学成分在供试品和对照品中的保留时间、mrm色谱图是否一致，从而进一步准确地确定所鉴定的化学成分。

进一步的，上述复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分鉴定方法中，所述s6中的色谱条件如下：

采用waterscortecsuplcc18色谱柱；以乙腈溶液为流动相a，含0.1％甲酸水溶液为流动相b，梯度洗脱程序为0～0.5min，2％a；0.5～2.5min，2％a→7％a；2.5～4.5min，7％a→13％a；4.5～6.5min，13％a→20％a；6.5～9.5min，20％a→55％a；9.5～12.5min，55％a→90％a；12.5～13.5min，90％a；13.5～13.6min，90％a→2％a；13.6～15min，2％a，流速0.25ml/min，柱温为45℃，进样量2μl。

进一步的，上述复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分鉴定方法中，所述s6中的质谱条件如下：

采用电喷雾离子源正离子模式，多反应监测；毛细管电压为3.5kv；脱溶剂氮气流速为800l/h；脱溶剂温度为500℃；锥孔n2气流为50l/h；离子源温度为150℃；二级锥孔萃取电压为3.00v；停留时间为5ms；氩气作为碰撞气体；载气为氮气。

进一步的，上述复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分鉴定方法中，所述s6中的供试品溶液的制备方法具体为：

精密量取复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏1.0ml，移至5ml量瓶内，用50％甲醇水稀释至刻度，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，制得供试品溶液。

实施例1

一种复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分鉴定方法，包括以下步骤：

s1：查阅党参、茯苓、莲子、薏苡仁、山楂、白扁豆、白术、麦芽、芡实和山药中已分离鉴定的化学成分，建立化学成分数据库，所述化学成分数据库包括化学名、分子式、分子量和化学结构信息；

s2：对复方右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏进行一级质谱，根据得到的质谱分子离子峰所得到的精确化合物分子质量信息，通过xcalibur3.0软件在5ppm的质量偏差范围内计算出分子式；

s3：将计算出的分子式与化学成分数据库的化学名、分子式和分子量进行比对，初步判定该质谱分子离子峰的化学成分；

s4：将分离得到的该质谱分子离子峰进行碰撞诱导解离，通过二级质谱的裂解，得到化合物相应的碎片离子，采用msdataanlysis软件分析碎片离子的化学结构信息；

s5：将得到的碎片离子与化学成分数据库的化学结构信息进行比对，确定该质谱分子离子峰的化学成分；

s6：配制所鉴定化学成分的对照品溶液，同时配制复方三维右旋泛酸钙糖浆的供试品溶液，将对照品溶液与供试品溶液在相同的色谱条件和质谱条件下分析所鉴定化学成分在供试品和对照品中的保留时间、mrm色谱图是否一致；

所述s6中的供试品溶液的制备方法具体为：

精密量取复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏1.0ml，移至5ml量瓶内，用50％甲醇水稀释至刻度，摇匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，制得供试品溶液。

所述s6中的色谱条件如下：

采用waterscortecsuplcc18色谱柱；以乙腈溶液为流动相a，含0.1％甲酸水溶液为流动相b，梯度洗脱程序为0～0.5min，2％a；0.5～2.5min，2％a→7％a；2.5～4.5min，7％a→13％a；4.5～6.5min，13％a→20％a；6.5～9.5min，20％a→55％a；9.5～12.5min，55％a→90％a；12.5～13.5min，90％a；13.5～13.6min，90％a→2％a；13.6～15min，2％a，流速0.25ml/min，柱温为45℃，进样量2μl；

所述s6中的质谱条件如下：

采用电喷雾离子源正离子模式，多反应监测；毛细管电压为3.5kv；脱溶剂氮气流速为800l/h；脱溶剂温度为500℃；锥孔n2气流为50l/h；离子源温度为150℃；二级锥孔萃取电压为3.00v；停留时间为5ms；氩气作为碰撞气体；载气为氮气；

实施例2

以绿原酸鉴定为例：首先根据一级质谱给出的分子离子峰353.0877，质谱软件计算出精确分子式为c16h18o9，然后与复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分数据库比对，绿原酸及其异构体分子质量与之一致，故初步推测其为绿原酸或其异构体。再根据tof-ms二级碎片离子有m/z191、179、173、161、135，与文献报道绿原酸二级质谱离子相一致，并且经裂解推测二级质谱图上m/z191峰为[m-h-caffeoyl]-，m/z179峰为[caffeicacid-h]-，m/z173峰为[m-h-caffeoyl-h2o]-，m/z161峰为[caffeicacid-h2o-h]-，m/z135峰为[m-h-caffeoyl-co2]-，并且其色谱保留时间、分子离子峰和二级质谱碎片与对照品完全一致，故鉴定该化合物为绿原酸。其他化合物采用类似鉴定方法，最终鉴定化合物179个，其中34个化合物经与对照品比对确定。

请参照图1以及图2，图1为复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏样品uhplc-qexactive轨道肼高分辨质谱的正离子流图；图2为复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏样品uhplc-qexactive轨道肼高分辨质谱的负离子流图。

请参照表1，表1为复方三维泛酸钙糖浆中药流浸膏鉴定的部分化学成分(共179个化合物，这里不一一列举)；

表1复方三维泛酸钙糖浆中药流浸膏鉴定化学成分

采用msdataanlysis分析二级质谱裂解碎片，通过高分辨率数据推测其化学成分的裂解特性，总结各类鉴定化合物的化学裂解规律，质谱裂解过程如下(以莲心碱为例)：

实施例3

一种实施例1的复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏化学成分鉴定方法中，所述对照品包括：阿魏酸、紫铆素、儿茶素、鞣花酸、牡荆素、荭草苷、牡荆素鼠李糖苷、原儿茶醛、没食子酸、咖啡酸、没食子酸乙酯、芹菜素、千层纸素、山奈酚、木犀草素、槲皮素、苔黑酚葡萄糖苷、1-咖啡酰奎宁酸、新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、蔓荆子黄素、根皮苷、木犀草苷、槲皮苷、异槲皮苷、异绿原酸b、异绿原酸a、异绿原酸c、夏佛塔苷、异夏佛塔苷、山奈酚-3-o-芸香糖苷、芦丁和水仙苷，分别加甲醇配制成10μg/ml的对照品溶液。

所述s6中所鉴定化学成分在供试品和对照品中的保留时间、mrm色谱图比对结果如下(共34个化合物，以下公开部分化合的比对结果)：

表2部分化合物的供试品和对照品的比对结果

综上所述，本发明提供的复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏的化学成分鉴定方法中，通过建立中药流浸膏的原料进行检索，建立化学成分数据库，再通过一级质谱分离出离子峰，通过二级质谱得到离子碎片，通过离子峰和离子碎片信息的分析并与化学成分数据库比对，从而快速、准确地鉴定复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏中的各化学成分，目前，采用上述方法，已成功鉴定了179个化合物，通过上述方法可准确鉴定复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏的各化学成分，为复方三维右旋泛酸钙糖浆中药流浸膏的药效、药理研究打下基础。

以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及附图内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。