本发明涉及中药检测技术领域，尤其涉及一种珍珠灵芝片的质量标准检测方法。
背景技术：
珍珠灵芝片作为一种处方药，由灵芝浸膏、女贞子、郁金、香附、墨旱莲、陈皮、珍珠层粉制备而成，具有养心安神，滋补肝肾的功效，广泛应用于慢性肝炎、神经衰弱、头晕失眠、胃肠溃疡、慢性支气管炎、冠心病等症。
现有的珍珠灵芝片的质量标准，是通过性状、鉴别、检查项目对珍珠灵芝片进行质量控制，无君药灵芝浸膏的鉴别和含量测定。为更有效地控制产品质量，本实验建立了珍珠灵芝片中君药灵芝浸膏的薄层鉴别和灵芝酸a的高效液相色谱含量测定法，为珍珠灵芝片质量控制提供科学依据。
技术实现要素：
本发明目的就是为了解决质量标准对君药检测控制的不足和缺陷，提供一种珍珠灵芝片的质量标准检测方法。
本发明是通过以下技术方案实现的：
一种珍珠灵芝片的质量标准检测方法，包括以下步骤：
(1)珍珠灵芝片的鉴别；
(2)珍珠灵芝片的检查；
(3)珍珠灵芝片相关物质的含量测定。
所述鉴别方法包括以下步骤：
(1)取本品2片，除去糖衣，研细，加水10ml，煮沸，放冷，滤过，取滤渣置显微镜下观察，应可见众多不规则、长条状或圆形块片，半透明，具细密的微波状纹理，在盖玻片边缘滴加稀盐酸，应产生大量气泡；
(2)取本品10片，除去糖衣，研细，用乙醚提取二次，每次10ml，滤过，取残渣挥干乙醚，加水10ml浸渍数小时，滤过，取滤液点于色谱滤纸上，用展开剂展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在80℃烘10分钟，应显蓝紫色斑点；
(3)取鉴别2项下水提取后的残渣，加入0.5％盐酸乙醇溶液20ml，温浸30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加稀盐酸10ml使溶解，滤过，取滤液1ml，加碘化汞钾试液数滴，应生成淡黄色混浊；取滤液1ml，加碘化铋钾试液数滴，应生成黄色浑浊；取滤液1ml，加硅钨酸试液数滴，应生成灰黄色沉淀；
(4)取本品5片，研细，加乙酸乙酯15ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；取灵芝酸a对照品，加甲醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法，吸取上述2种溶液各10μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以展开剂展开，晾干，置紫外光灯254nm下检视，其中供试品色谱中，应与对照品色谱在相应位置上，显相同的暗斑；喷以0.5％香草醛硫酸溶液，在105℃连续加热10-15min至斑点清晰，再供试品色谱中，应与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
所述鉴别项2中的展开剂为正丁醇、醋酸、乙醇、水按体积比4：1：1：2混合而成。
所述鉴别项4中的展开剂为60-90℃的石油醚以及甲酸乙酯、甲酸、三氯甲烷按体积比4：5：1：1混合而成。
所述检查方法包括以下步骤：
(1)崩解时限：照崩解时限检查法检查，各片均应在60分钟内全部崩解；
(2)微生物限度：照非无菌产品微生物限度检查，需氧菌总数应小于1000cfu/g；霉菌和酵母菌数总数应小于50cfu/g；不得检出大肠埃希菌和沙门菌；耐胆盐革兰阴性菌应小于200cfu/g。
所述含量测定包括以下步骤：
(1)色谱条件与系统适用性测定：以diamonsilplus5umc18，250*4.6mm色谱柱，以乙腈为流动相a，以0.1％磷酸溶液为流动相b，进行梯度洗脱；检测波长为254nm，理论板数按灵芝酸a峰计算应不低于20000；
(2)对照品溶液的制备：精密称取灵芝酸a对照品，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；
(3)供试品溶液的制备：取本品20片，除去包衣，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理后取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得，本品每片含灵芝酸a不应少于0.16mg。
所述的检测方法步骤1中梯度洗脱按以下进行：
所述的检测方法步骤3中超声处理的功率为300w，频率为40khz，时间为30分钟。
本发明的优点是：
本发明的质量标准检测方法中，增加了君药灵芝浸膏的鉴别和含量测定，为更有效地控制产品质量，本实验建立了珍珠灵芝片中君药灵芝浸膏的薄层鉴别和灵芝酸a的高效液相色谱含量测定法，为珍珠灵芝片质量控制提供科学依据。
具体实施方式
以下结合具体的实例对本发明的技术方案做进一步说明：
一种珍珠灵芝片的质量标准检测方法，包括以下步骤：
(1)珍珠灵芝片的鉴别；
(2)珍珠灵芝片的检查；
(3)珍珠灵芝片相关物质的含量测定。
检测所用珍珠灵芝片处方，其组成原料为：灵芝浸膏50g，女贞子50g，郁金100g，香附100g，墨旱莲50g，陈皮100g，珍珠层粉25g。
所述鉴别方法包括以下步骤：
(1)取本品2片，除去糖衣，研细，加水10ml，煮沸，放冷，滤过，取滤渣置显微镜下观察，应可见众多不规则、长条状或圆形块片，半透明，具细密的微波状纹理，在盖玻片边缘滴加稀盐酸，产生大量气泡；
(2)取本品10片，除去糖衣，研细，用乙醚提取二次，每次10ml，滤过，取残渣挥干乙醚，加水10ml浸渍数小时，滤过，取滤液点于色谱滤纸上，用展开剂展开，取出，晾干，喷以茚三酮试液，在80℃烘10分钟，显蓝紫色斑点；
(3)取鉴别2项下水提取后的残渣，加入0.5％盐酸乙醇溶液20ml，温浸30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加稀盐酸10ml使溶解，滤过，取滤液1ml，加碘化汞钾试液数滴，生成淡黄色混浊；取滤液1ml，加碘化铋钾试液数滴，生成黄色浑浊；取滤液1ml，加硅钨酸试液数滴，生成灰黄色沉淀；
(4)取本品5片，研细，加乙酸乙酯15ml，超声处理30min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇0.5ml使溶解，作为供试品溶液；取灵芝酸a对照品，加甲醇制成1ml含1mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法，吸取上述2种溶液各10μl，分别点于同一硅胶gf254薄层板上，以展开剂展开，晾干，置紫外光灯254nm下检视，其中供试品色谱中，与对照品色谱在相应位置上，显相同的暗斑；喷以0.5％香草醛硫酸溶液，在105℃连续加热10-15min至斑点清晰，再供试品色谱中，与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
其中鉴别项2中的展开剂为正丁醇、醋酸、乙醇、水按体积比4：1：1：2混合而成。
其中鉴别项4中的展开剂为60-90℃的石油醚以及甲酸乙酯、甲酸、三氯甲烷按体积比4：5：1：1混合而成。
所述检查方法包括以下步骤：
(1)崩解时限：照崩解时限检查法检查，各片均在60分钟内全部崩解；
(2)微生物限度：照非无菌产品微生物限度检查，需氧菌总数小于1000cfu/g；霉菌和酵母菌数总数小于50cfu/g；未检出大肠埃希菌和沙门菌；耐胆盐革兰阴性菌小于200cfu/g。
所述含量测定包括以下步骤：
(1)色谱条件与系统适用性测定：以diamonsilplus5umc18，250*4.6mm色谱柱，以乙腈为流动相a，以0.1％磷酸溶液为流动相b，按下表进行梯度洗脱；检测波长为254nm，理论板数按灵芝酸a峰计算不低于20000；
(2)对照品溶液的制备：精密称取灵芝酸a对照品，加甲醇制成每1ml含10μg的溶液，即得；
(3)供试品溶液的制备：取本品20片，除去包衣，研细，取0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，以功率为300w、频率为40khz、时间为30分钟进行超声处理后取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(4)测定法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20μl，注入液相色谱仪，测定，即得，本品每片含灵芝酸a不少于0.16mg。