一种检测病原微生物的方法与流程

本发明属于生物检测技术领域，具体涉及一种检测病原微生物的方法。

背景技术：

病原微生物是指可以侵犯人体，引起感染甚至传染病的微生物，或称病原体。病原体中，以细菌和病毒的危害性最大。病原微生物指朊毒体、寄生虫（原虫、蠕虫、医学昆虫）、真菌、细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体、病毒。病原体侵入人体后，人体就是病原体生存的场所，医学上称为病原体的宿主。病原体在宿主中进行生长繁殖、释放毒性物质等引起机体不同程度的病理变化，这一过程称为感染。不过人体或动物不像人工培养细菌的培养基，可以让病菌不受限制地肆意生长繁殖，轻易地导致机体死亡。病原体入侵人体后，在发生感染的同时，能激发人体免疫系统产生一系列免疫应答与之对抗，这称之为免疫。感染和免疫是一对矛盾，其结局如何，根据病原体和宿主两方面力量强弱而定。如果宿主足够强壮，可以根本不形成感染；即使形成了感染，病原体也多半会逐渐消亡，于是患者康复；如果宿主很虚弱而病原体很凶猛，则感染扩散，病人将会死亡。

病原微生物种类繁多，变异迅速，快速鉴定病原微生物的检验技术也在不断发展前进着。传统的对病原微生物的检测方法包括；直接涂片镜检、分离培养、生化反应、血清学反应、核酸分子杂交、基因芯片、多聚酶链反应等，上述检测方法操作繁琐，检测周期长，而且成本较高。

技术实现要素：

本发明提供一种检测病原微生物的方法。

其技术方案为：

一种检测病原微生物的方法，包括以下步骤：

步骤1、建立已知菌株质谱蛋白质指纹图谱数据库，作为质谱指纹图谱比对的基础；

步骤2、待检测标本采样，样品的保存和处理；

步骤3、检测未知微生物或生物大分子的特征性生物标志物，并将含有标志物分子量信息的质谱图与已知质谱图数据库中的特征性质谱图比对；

步骤4、结合基因水平分型扩大对亚种水平的型能力。

进一步，步骤1中具体为：选用培养基进行病原微生物培养、样品处理、maldi-tof-ms数据采集、maldi-tof-ms数据库建立、maldi-tof-ms数据库验证。

进一步，步骤2中，待检测标本为体液标本，包括血清、尿液、脑脊液、胸腹水、唾液、泪液、关节液以及羊水等。

进一步，步骤2中，所述样品处理包括蛋白质的分离纯化。

再进一步，在对蛋白质分离纯化前，需要对蛋白质进行预处理，去掉结缔组织和脂肪组织。

再进一步，采用酶复合物进行预处理，调整ph值，设定一定的温度进行处理。

本发明的有益效果：

本发明的检测病原微生物的方法，具有高通量、快速、易于标准化、费用低廉等特点，适合推广应用。

附图说明

图1是检测病原微生物的方法流程图。

具体实施方式

下面结合附图与具体实施方式对本发明作进一步详细地说明。

参照图1，一种检测病原微生物的方法，包括以下步骤：

步骤1、建立已知菌株质谱蛋白质指纹图谱数据库，作为质谱指纹图谱比对的基础；

步骤2、待检测标本采样，样品的保存和处理；

步骤3、检测未知微生物或生物大分子的特征性生物标志物，并将含有标志物分子量信息的质谱图与已知质谱图数据库中的特征性质谱图比对；

步骤4、结合基因水平分型扩大对亚种水平的型能力。

步骤1中具体为：选用培养基进行病原微生物培养、样品处理、maldi-tof-ms数据采集、maldi-tof-ms数据库建立、maldi-tof-ms数据库验证。

步骤2中，待检测标本为体液标本，包括血清、尿液、脑脊液、胸腹水、唾液、泪液、关节液以及羊水等。

步骤2中，所述样品处理包括蛋白质的分离纯化。

在对蛋白质分离纯化前，需要对蛋白质进行预处理，去掉结缔组织和脂肪组织。

采用酶复合物进行预处理，调整ph值，设定一定的温度进行处理。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。

技术特征：

技术总结
本发明公开了一种检测病原微生物的方法，包括以下步骤：步骤1、建立已知菌株质谱蛋白质指纹图谱数据库，作为质谱指纹图谱比对的基础；步骤2、待检测标本采样，样品的保存和处理；步骤3、检测未知微生物或生物大分子的特征性生物标志物，并将含有标志物分子量信息的质谱图与已知质谱图数据库中的特征性质谱图比对；步骤4、结合基因水平分型扩大对亚种水平的型能力。本发明的检测病原微生物的方法，具有高通量、快速、易于标准化、费用低廉等特点，适合推广应用。

技术研发人员：肖非;胡智;谭潇
受保护的技术使用者：邵阳学院
技术研发日：2019.07.08
技术公布日：2019.10.22