一种基于ECL夹心免疫传感的抗原检测试剂盒的制作方法

文档序号:20913412发布日期:2020-05-29 13:13阅读:来源:国知局

技术特征:

1.一种基于ecl夹心免疫传感的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述抗原检测试剂盒包括以下组分:

(1)一抗修饰的电极;

(2)银纳米颗粒标记的二抗;

(3)过硫酸盐溶液。

2.根据权利要求1所述的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述抗原检测试剂盒还包括待测抗原的标准溶液。

3.根据权利要求1或2所述的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述一抗修饰的电极是通过下述方法制得的:先将金颗粒修饰在电极表面,然后再将一抗键合到所得电极表面,然后封闭非特异性位点。

4.根据权利要求3所述的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述将金颗粒修饰在电极表面的方法为:将电极浸泡在氯金酸溶液中进行电沉积;所述氯金酸溶液的浓度优选为0.5~2%,更优选为1%,所述电沉积的电压优选为-0.3~-0.1v,更优选为-0.2v,所述电沉积的时间优选为20~40s,更优选为30s;所述电极为玻碳电极,优选为抛光后的玻碳电极;

和/或,所述将一抗键合到所得电极表面的方法为:将所得电极浸泡于一抗溶液中,在4℃下过夜;所述一抗溶液的浓度优选为5mg·ml-1

和/或,所述封闭非特异性位点的方法为:将所得电极在牛血清白蛋白中浸泡,所述牛血清白蛋白的浓度优选为1%,所述浸泡时间优选为25min。

5.根据权利要求1或2所述的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述银纳米颗粒标记的二抗是由以下方法制得的:将二抗与银纳米颗粒混合,在冰浴条件下搅拌,然后离心除去未结合的二抗,再用牛血清白蛋白封闭非特异性位点后,即得;所述搅拌的时间优选为1~3小时,更优选为2小时。

6.根据权利要求5所述的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述银纳米颗粒是通过下述方法制得的:在冰浴条件下,将agno3溶液逐滴加入到不断搅拌的nabh4溶液中,持续搅拌至体系颜色变为黄绿色,即得;所述agno3溶液优选为1mm,所述nabh4溶液优选为2mm,所述持续搅拌时间为15min以上。

7.根据权利要求1或2所述的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述过硫酸盐溶液为过硫酸钾溶液,所述过硫酸盐溶液的浓度优选为0.1m,ph优选为7.4。

8.根据权利要求2所述的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述一抗为fpsa一抗,所述待测抗原为fpsa抗原,所述二抗为fpsa二抗。

9.一种定量检测抗原浓度的方法,其特征在于:所述方法是利用权利要求1~8任一项所述基于ecl夹心免疫传感的抗原检测试剂盒进行检测的,具体步骤包括:

(a)各浓度待测抗原的标准溶液下ecl强度的测定:

a1.将待测抗原的标准溶液配置成梯度浓度,然后将一抗修饰的电极在浓度为ci的待测抗原的标准溶液中孵育,得抗原修饰的电极;

a2.将所得抗原修饰的电极在银纳米颗粒标记的二抗中孵育,得到目标电极,利用电化学发光分析仪,在过硫酸盐溶液中,测得目标电极的ecl强度ii;

(b)将待测抗原的标准溶液配置成0ng·ml-1,按照步骤(a)的方法,得到0ng·ml-1浓度下的目标电极的ecl强度i0;

(c)绘制标准曲线:以ecl强度变化值δii为纵坐标,lgci为横坐标,绘制曲线,并进行线性回归,得到标准曲线;其中,δii=ii-i0;

(d)待测抗原浓度的测定:将一抗修饰的电极在待测抗原中孵育,得抗原修饰的电极;将所得抗原修饰的电极在银纳米颗粒标记的二抗中孵育,得到目标电极,利用电化学发光分析仪,在过硫酸盐溶液中,测得目标电极的ecl强度ix;

将δix带入步骤(c)所得标准曲线的纵坐标中,对应得到的横坐标,即为待测抗原浓度的lg值;其中,δix=ix-i0。

10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于:步骤(a1)中,所述孵育温度为室温,孵育时间为5分钟以上,优选为35分钟以上,更优选为35~45分钟;

和/或,步骤(a2)中,所述孵育温度为室温,孵育时间为5分钟以上,优选为25分钟以上,更优选为25~35分钟。

11.根据权利要求9所述的方法,其特征在于:步骤(a)中,ci为0.002~10ng·ml-1

步骤(a2)、(d)中,所述电化学发光分析仪的测试参数为:在0v~-1.8v的电位范围内进行循环伏安法扫描,扫描速度为0.1v/s,光电倍增管高压为600v。

12.根据权利要求9所述的方法,其特征在于:步骤(c)中,所述标准曲线为y=1640.27x+4883.96。

13.权利要求1~8任一项所述基于ecl夹心免疫传感的抗原检测试剂盒在定量检测抗原浓度中的用途。


技术总结
本发明提供了一种基于电化学发光(ECL)夹心免疫传感的抗原检测试剂盒,所述抗原检测试剂盒包括以下组分:(1)一抗修饰的电极;(2)银纳米颗粒标记的二抗;(3)过硫酸盐溶液。利用本发明的抗原检测试剂盒,可以定量检测抗原浓度,实验证明,该试剂盒对fPSA抗原检测的线性范围为0.002~10ng·mL‑1,检出限为0.7pg·mL‑1。与现有技术中的其他的方法相比,本发明基于ECL夹心免疫传感的方法在检测抗原时具有更宽的线性范围和更低的检测限,在临床检测中具有很好的应用前景。

技术研发人员:毛俐;王彬;张飞
受保护的技术使用者:成都医学院
技术研发日:2020.01.13
技术公布日:2020.05.29
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