1.一种基于ecl夹心免疫传感的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述抗原检测试剂盒包括以下组分:
(1)一抗修饰的电极;
(2)银纳米颗粒标记的二抗;
(3)过硫酸盐溶液。
2.根据权利要求1所述的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述抗原检测试剂盒还包括待测抗原的标准溶液。
3.根据权利要求1或2所述的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述一抗修饰的电极是通过下述方法制得的:先将金颗粒修饰在电极表面,然后再将一抗键合到所得电极表面,然后封闭非特异性位点。
4.根据权利要求3所述的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述将金颗粒修饰在电极表面的方法为:将电极浸泡在氯金酸溶液中进行电沉积;所述氯金酸溶液的浓度优选为0.5~2%,更优选为1%,所述电沉积的电压优选为-0.3~-0.1v,更优选为-0.2v,所述电沉积的时间优选为20~40s,更优选为30s;所述电极为玻碳电极,优选为抛光后的玻碳电极;
和/或,所述将一抗键合到所得电极表面的方法为:将所得电极浸泡于一抗溶液中,在4℃下过夜;所述一抗溶液的浓度优选为5mg·ml-1;
和/或,所述封闭非特异性位点的方法为:将所得电极在牛血清白蛋白中浸泡,所述牛血清白蛋白的浓度优选为1%,所述浸泡时间优选为25min。
5.根据权利要求1或2所述的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述银纳米颗粒标记的二抗是由以下方法制得的:将二抗与银纳米颗粒混合,在冰浴条件下搅拌,然后离心除去未结合的二抗,再用牛血清白蛋白封闭非特异性位点后,即得;所述搅拌的时间优选为1~3小时,更优选为2小时。
6.根据权利要求5所述的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述银纳米颗粒是通过下述方法制得的:在冰浴条件下,将agno3溶液逐滴加入到不断搅拌的nabh4溶液中,持续搅拌至体系颜色变为黄绿色,即得;所述agno3溶液优选为1mm,所述nabh4溶液优选为2mm,所述持续搅拌时间为15min以上。
7.根据权利要求1或2所述的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述过硫酸盐溶液为过硫酸钾溶液,所述过硫酸盐溶液的浓度优选为0.1m,ph优选为7.4。
8.根据权利要求2所述的抗原检测试剂盒,其特征在于:所述一抗为fpsa一抗,所述待测抗原为fpsa抗原,所述二抗为fpsa二抗。
9.一种定量检测抗原浓度的方法,其特征在于:所述方法是利用权利要求1~8任一项所述基于ecl夹心免疫传感的抗原检测试剂盒进行检测的,具体步骤包括:
(a)各浓度待测抗原的标准溶液下ecl强度的测定:
a1.将待测抗原的标准溶液配置成梯度浓度,然后将一抗修饰的电极在浓度为ci的待测抗原的标准溶液中孵育,得抗原修饰的电极;
a2.将所得抗原修饰的电极在银纳米颗粒标记的二抗中孵育,得到目标电极,利用电化学发光分析仪,在过硫酸盐溶液中,测得目标电极的ecl强度ii;
(b)将待测抗原的标准溶液配置成0ng·ml-1,按照步骤(a)的方法,得到0ng·ml-1浓度下的目标电极的ecl强度i0;
(c)绘制标准曲线:以ecl强度变化值δii为纵坐标,lgci为横坐标,绘制曲线,并进行线性回归,得到标准曲线;其中,δii=ii-i0;
(d)待测抗原浓度的测定:将一抗修饰的电极在待测抗原中孵育,得抗原修饰的电极;将所得抗原修饰的电极在银纳米颗粒标记的二抗中孵育,得到目标电极,利用电化学发光分析仪,在过硫酸盐溶液中,测得目标电极的ecl强度ix;
将δix带入步骤(c)所得标准曲线的纵坐标中,对应得到的横坐标,即为待测抗原浓度的lg值;其中,δix=ix-i0。
10.根据权利要求9所述的方法,其特征在于:步骤(a1)中,所述孵育温度为室温,孵育时间为5分钟以上,优选为35分钟以上,更优选为35~45分钟;
和/或,步骤(a2)中,所述孵育温度为室温,孵育时间为5分钟以上,优选为25分钟以上,更优选为25~35分钟。
11.根据权利要求9所述的方法,其特征在于:步骤(a)中,ci为0.002~10ng·ml-1;
步骤(a2)、(d)中,所述电化学发光分析仪的测试参数为:在0v~-1.8v的电位范围内进行循环伏安法扫描,扫描速度为0.1v/s,光电倍增管高压为600v。
12.根据权利要求9所述的方法,其特征在于:步骤(c)中,所述标准曲线为y=1640.27x+4883.96。
13.权利要求1~8任一项所述基于ecl夹心免疫传感的抗原检测试剂盒在定量检测抗原浓度中的用途。