非酒精性脂肪性肝炎的血液纤维化标志物的开发

1.本发明涉及肝脏疾病标志物。特别地，本发明涉及非酒精性脂肪性肝炎的血液纤维化标志物。


背景技术：

2.因为非酒精性脂肪性肝炎(nash)中肝纤维化的进展会导致肝硬化或肝癌的出现，因此纤维化的早期发现是非常重要的目标。虽然通过肝活检的组织学评估对于肝纤维化评估是最准确的，但组织学评价给患者带来了沉重的负担，且具有例如感染的风险。虽然已经将血液中的透明质酸(非专利文献1)、iv型胶原蛋白、m2bpgi等等用作肝纤维化的非侵入性评估(非专利文献2)，但在其他疾病的情况下它们会增加。因此，希望有对于疾病具有高特异性的诊断标志物。例如，已经发现了m2bpgi作为测量丙型肝炎患者肝纤维化的指标(非专利文献2)，而其对于nash中肝纤维化的测定未被优化。尽管过去发明人发现，血清中α1-抗胰蛋白酶上n连接型糖链(a3f)的表达在nash疾病中纤维化的进展中显著增加(专利文献1)，a3f表现出与肝组织中炎症的相关性，而不是与f因子(其为纤维化的指标)等等的相关性。
3.引文列表专利文献专利文献1：国际公开号wo 2017-126514非专利文献非专利文献1：suzuki a, angulo p, lymp j, li d, satomura s, lindor k. hyaluronic acid, an accurate serum marker for severe hepatic fibrosis in patients with non-alcoholic fatty liver disease. liver int 2005; 25:779-786.非专利文献2：tianhui l, xiaoming w, morten a, diana j.l, and federica g. molecular serum markers of liver fibrosis. biomark insights. 2012; 7: 105-117.非专利文献3：kuno a, ikehara y, tanaka y, et al. a serum "sweet-doughnut" protein facilitates fibrosis evaluation and therapy assessment in patients with viral hepatitis. sci rep. 2013; 3:1065。


技术实现要素：

4.本发明要解决的技术问题需要找到能够评估nash中肝纤维化的进展的疾病特异性非侵入性标志物。
5.问题的解决方案为实现上述目的，本发明人已认真反复研究，且发现随着nash中肝纤维化的进展，血液中糖链(a2f二等分，a2f bisect)和其生物合成前体糖链的表达增加。本发明人还发现，与iga2结合的a2f二等分糖链和与iga2结合的a2f二等分糖链的生物合成前体是优选的
标志物。基于此认识，本发明人已完成了本发明。
6.因此，本发明提供以下内容。
7.(1)一种用于评估nash中肝纤维化的进展的方法，所述方法包含测量样品中具有式(i)所示结构的糖链和/或具有式(i)所示结构的糖链的生物合成前体糖链的量，[化学式1]。
[0008]
(2)根据(1)所述的方法，所述方法包含测量具有式(i)所示结构的糖链的生物合成前体糖链的量的总和。
[0009]
(3)根据(1)或(2)所述的方法，其中具有式(i)所示结构的糖链的生物合成前体糖链具有选自糖链1、2a、2b、3a、3b、4、5a和5b的一种或更多种结构：[化学式2]
。
[0010]
(4)根据(1)-(3)中任一项所述的方法，其中具有式(i)所示结构的糖链和/或具有式(i)所示结构的糖链的生物合成前体糖链与iga2结合。
[0011]
(5)根据(1)-(4)中任一项所述的方法，其中所述样品为血液样品。
[0012]
(6)一种用于评估nash中肝纤维化的进展的标志物，所述标志物包含具有式(i)所示结构的糖链和/或具有式(i)所示结构的糖链的生物合成前体糖链，[化学式3]。
[0013]
(7)根据(6)所述的标志物，其中具有式(i)所示结构的糖链的生物合成前体糖链具有选自糖链1、2a、2b、3a、3b、4、5a和5b的一种或更多种结构：[化学式4]
。
[0014]
(8)根据(6)或(7)所述的标志物，其中具有式(i)所示结构的糖链和/或具有式(i)所示结构的糖链的生物合成前体糖链与iga2结合。
[0015]
(9)一种用于评估nash中肝纤维化的进展的试剂盒，所述试剂盒包含：用于测量具有式(i)所示结构的糖链和/或具有式(i)所示结构的糖链的生物合成前体糖链的量的工具；和/或具有式(i)所示结构的糖链和/或具有式(i)所示结构的糖链的生物合成前体糖链，[化学式5]。
[0016]
(10)根据(9)所述的试剂盒，其中具有式(i)所示结构的糖链的生物合成前体糖链具有选自糖链1、2a、2b、3a、3b、4、5a和5b的一种或更多种结构：[化学式6]
ꢀ
。
[0017]
(11)根据(9)或(10)所述的试剂盒，其中所述工具是：对蛋白质特异性的抗体或抗体片段，所述蛋白质与具有式(i)所示结构的糖链和/或具有式(i)所示结构的糖链的生物
合成前体糖链结合；或与所述蛋白质相互作用的蛋白质或肽。
[0018]
(12)根据(11)所述的试剂盒，其中所述抗体或抗体片段、或相互作用的蛋白质或肽对iga2是特异性的。
[0019]
发明效果根据本发明，提供了一种能够评估nash中肝纤维化的进展的疾病特异性非侵入性标志物。因此，使用本发明的标志物，可以准确测定nash中的肝纤维化，而且还可以减轻患者的负担。使用本发明的标志物可以准确调查nash的进展程度以及对nash的治疗效果。
附图说明
[0020]
[图1]图1是示出伴随纤维化的a2f二等分表达量的图。
[0021]
[图2]图2是示出伴随纤维化的a2f二等分的生物合成前体糖链的表达中的变化的图。图中的箭头示出a2f的生物合成路径。本文示出了糖链1、糖链2(2a、2b)、糖链3(3a、3b)、4和糖链5(5a、5b)的结构。
[0022]
[图3]图3是示出通过分析肝活检中病理学纤维化评估和血液中纤维化评估因子和a2f二等分的表达的相关性而得的结果的图。
[0023]
[图4]图4是比较nash纤维组和丙型肝炎(hcv)患者组的a2f二等分表达量的图。
[0024]
[图5]图5是示出通过使用纤维化阶段经确定(f3或更严重)的样品进行roc分析而得的结果的图。该图从左至右示出了iv型胶原蛋白7s、fib4、a2f二等分、和a2f二等分的生物合成前体糖链1、2a、2b、3a、3b、4、5a和5b的总和的roc曲线。
[0025]
[图6]图6示出了通过分析nash f3/4混合血清的流通级分和蛋白质g结合级分中的n连接型糖链而得的结果。左侧小图是通过使得血清和各级分经受sds-page(cbb染色)而得的结果。中间小图是通过maldi-tof ms的n连接型糖链的分析图表。右侧小图是m/z 3100附近(高亮区域)的放大图表。
[0026]
[图7]图7示出了通过sds-page分离nash f3/4混合血清的蛋白质g结合级分，使由cbb染色检测到的蛋白质带经受n连接型糖链分析和载体分析而得的结果。
[0027]
[图8]图8示出了通过使用iga2 elisa试剂盒调查伴随纤维化进展的血清iga2浓度而得的结果。
具体实施方式
[0028]
在第一方面中，本发明提供了一种用于评估nash中肝纤维化的进展的方法，所述方法包含测量样品中具有式(i)所示结构的糖链和/或具有式(i)所示结构的糖链的生物合成前体糖链的量，[化学式7]。
[0029]
具有式(i)所示结构的糖链称为a2f二等分(a2f bisect)。a2f二等分是n连接型糖链，且通过天冬酰胺残基与蛋白质结合。只要a2f二等分的生物合成前体糖链是位于a2f二等分的生物合成路径上游的糖链，则生物合成前体糖链可为任何糖链。a2f二等分的生物合成前体糖链的实例包括具有由糖链 1、2a、2b、3a、3b、4、5a和5b所示的结构的糖链：[化学式8](本文中为了方便，这些糖链可称为糖链1、2a、2b、3a、3b、4、5a和5b)。然而，生物合
成前体糖链不限于这些。
[0030]
在式(i)和糖链1、2a、2b、3a、3b、4、5a和5b中，glcnac表示n-乙酰氨基葡萄糖，man表示甘露糖，fuc表示岩藻糖，gal表示半乳糖，以及 neu5ac表示n-乙酰神经氨酸。在式(i)和糖链1、2a、2b、3a、3b、4、5a和5b中，a1-3、a1-6和a2-6分别表示α1-3糖苷键、α1-6糖苷键和α2-6糖苷键，而b1-2和b1-4分别表示β1-2糖苷键和β1-4糖苷键。在式(i)和糖链1、2a、2b、3a、3b、4、5a和5b中，作为还原性端基的glcnacb1-表示与蛋白质中天冬酰胺的键。
[0031]
在上述本发明提到的方法中，a2f二等分和/或a2f二等分的生物合成前体糖链用作nash中肝纤维化的标志物。可以仅将a2f二等分用作标志物，或者可以将a2f二等分的一种或更多种生物合成前体糖链用作标志物。或者，可以将a2f二等分和a2f二等分的一种或更多种生物合成前体糖链用作标志物。通过测定用作标志物的两种或更多种糖链的量的总和，可以提升肝纤维化进展评估的准确度。例如，通过测定用作标志物的a2f二等分的两种或更多种生物合成前体糖链的总和，可以评估肝纤维化的进展。在本发明方法的第一实施方式中，通过测定仅a2f二等分的量来评估肝纤维化的进展。在本发明方法的另一实施方式中，通过测定8种糖链(其为糖链1、2a、2b、3a、3b、4、5a和5b)的量的总和来评估肝纤维化的进展。
[0032]
本发明人已经发现，伴随肝纤维化的进展，会促进iga2中a2f二等分糖链修饰，然而血清中的iga2不会同时显著增加。因此，本发明中用于nash中肝纤维化的优选标志物为与iga2(免疫球蛋白 iga2蛋白质)结合的a2f二等分和与iga2结合的a2f二等分的生物合成前体糖链。过去不知道a2f二等分和其生物合成前体糖链可以用作nash中肝纤维化的进展的标志物，以及与iga2结合的a2f二等分和与iga2结合的a2f二等分的生物合成前体糖链可以用作nash中肝纤维化的进展的优选标志物。
[0033]
iga2蛋白质可为野生型或突变体。iga2突变体可以是例如由体内突变和多态性产生的突变体。iga2突变体可具有使野生型iga2的氨基酸序列中一个至若干个氨基酸经受删除、置换、加成或插入而得到的氨基酸序列。在此，“若干”指2、3、4、5、6、7、8或9。在突变体iga2蛋白中，优选保存可与糖链结合的天冬酰胺残基。
[0034]
用于本发明方法的样品可从任何受试者获得。所述样品优选是从感染nash的受试者或优选怀疑感染nash的受试者获得的样品。不需要通过侵入性方法比如肝活检获得的样品。样品的实例包括血液、尿液、脑脊髓液、淋巴液、唾液和汗液。优选血液样品，更优选血清。
[0035]
用于测量样品中a2f二等分和/或其生物合成前体糖链的表达量(偶尔仅称为量)的工具和方法是本领域技术人员所熟知的。例如，如实施例1中所描述，血清中的蛋白质级分通过例如乙醇沉淀的技术沉淀，且纯化，通过糖印迹和唾液酸键特异性酰胺标记(salsa)以制备标记的糖链。糖链的量可通过用maldi-tof质谱分析所得的标记的糖链来测量。使用通过在测试时加入已知浓度的内标糖链检测的每种糖链的绝对定量值、或由血清中n连接型糖链的总量计算出的相对定量值进行分析。例如，使用对与a2f二等分和/或其生物合成前体糖链结合的蛋白质特异性的抗体或抗体片段、或者和与a2f二等分和/或其生物合成前体糖链结合的蛋白质相互作用蛋白质或肽(比如肽m)，来分离与a2f二等分和/或其生物合成前体糖链结合的蛋白质。例如，可以使用熟知的色谱法、质谱法等等测量与蛋白质结合的a2f二等分和/或其生物合成前体糖链的量。抗体可为单克隆抗体和多克隆抗体中的任一。
优选单克隆抗体。在色谱法中，可使用会与a2f二等分和/或其生物合成前体糖链结合的凝集素。
[0036]
用于测量样品中与iga2结合的a2f二等分和与iga2结合的a2f二等分的生物合成前体糖链的量的工具和方法也是众所周知的。首先，分离样品中的iga2。例如，可使用抗iga2抗体、该抗体的片段或与iga2相互作用的另外的蛋白质或肽分离iga2。可使用免疫沉淀法或亲和色谱法分离iga2。之后，测量与分离的iga2结合的a2f二等分和/或其生物合成前体的量。用于测量这些糖链的量的方法如以上所解释。
[0037]
在本发明的方法中，可以估计，随着样品中a2f二等分或其生物合成前体糖链的量越大，则患者的肝纤维化进展越多。相反可以确定，随着样品中a2f二等分和/或其生物合成前体糖链的量越小，则患者的肝纤维化进展较少。例如，可以通过比较来源于不具有肝纤维化的受试者的样品中a2f二等分和/或其生物合成前体糖链的量与nash患者样品中以上提到的糖链的量，来评估肝纤维化的进展。例如，如实施例4中所描述，通过使用roc曲线确定截止值，可以评估肝纤维化的进展。
[0038]
肝纤维化的进展评估包括确定肝纤维化在哪个阶段。肝纤维化阶段的分类的实例包括以下的新犬山分类：f0：未纤维化，f1：门静脉区域中的纤维性扩大，f2：纤维性交联形成，f3：伴随叶结构变形的纤维性交联形成，以及f4：肝硬化。
[0039]
另一个方面，本发明提供了一种用于评估nash中肝纤维化进展的标志物，所述标志物包含a2f二等分和/或a2f二等分的生物合成前体糖链。a2f二等分和其生物合成前体糖链为如以上所解释。
[0040]
本发明的标志物可仅包含a2f二等分，可包含a2f二等分的一种或更多种生物合成前体糖链，或可包含a2f二等分和a2f二等分的一种或更多种生物合成前体糖链。本发明的标志物的第一实例为仅包含a2f二等分的标志物。本发明的标志物的另一个具体实例为包含七种糖链的标志物，所述七种糖链为糖链1、2a、2b、3a、3b、4、5a和5b。
[0041]
本发明优选的标志物为与iga2结合的a2f二等分和与iga2结合的a2f二等分的生物合成前体糖链。
[0042]
通过测量样品中本发明的标志物的量可以评估患者中肝纤维化的进展。虽然在以上解释了肝纤维化的评估，但在下文将更具体地描述该评估。本发明的用于评估nash中肝纤维化的进展的方法包括将包含在血液中的糖蛋白上的a2f二等分和其生物合成前体糖链、与iga2结合的a2f二等分和与iga2结合的a2f二等分的生物合成前体糖链的量与标准值比较。例如，当受试者中a2f二等分和其生物合成前体糖链、以及与iga2结合的a2f二等分和与iga2结合的a2f二等分的生物合成前体糖链中任意的量是用健康人群组的确定用阈值(标准值)或更大时，可以确定nash中的肝纤维化。
[0043]
如以上所提及，可以根据分类法：f0：未纤维化，f1：门静脉区域中的纤维性扩大，f2：纤维性交联形成，f3：伴随叶结构变形的纤维性交联形成，以及f4：肝硬化，将肝纤维化的进展分类。本发明的用于评估受试者中的nash中肝纤维化的进展的方法使得能够确定受试者的肝在以上提及的f0到f4中的哪个阶段。在这种情况下，提前测量在各个阶段的受试者的标准值的范围。当受试者中a2f二等分和其生物合成前体糖链、以及与iga2结合的a2f二等分和与iga2结合的a2f二等分的生物合成前体糖链中任一者的量在特定的范围内，则
受试者很可能在相应的阶段。分类法不限于以上提及的f0到f4的分类法，而可以使用不同的分类法。
[0044]
将本发明的标志物与其他肝纤维化标志物组合使用，可以提升nash中肝纤维化的进展评估的准确度。其他肝纤维化标志物的实例包括但不限于iv型胶原蛋白7s、透明质酸和m2bpgi。
[0045]
另一个方面，本发明提供了一种用于评估nash中肝纤维化的进展的试剂盒。本发明的试剂盒用于实施上述用于评估nash中肝纤维化的进展的方法。本发明的试剂盒包括用于测量a2f二等分和/或a2f二等分的生物合成前体糖链的量、和/或a2f二等分和/或a2f二等分的生物合成前体糖链的工具。a2f二等分和其生物合成前体糖链为如以上所解释。
[0046]
在本发明的试剂盒中用于测量a2f二等分和/或a2f二等分的生物合成前体糖链的量的工具不特别受限。所述工具可以是用于分离样品中与a2f二等分和/或a2f二等分的生物合成前体糖链结合的蛋白质的工具。这类工具的实例包括对与a2f二等分和/或a2f二等分的生物合成前体糖链结合的血液分泌蛋白特异性的抗体或抗体片段，以及与该血液分泌蛋白相互作用的蛋白质或肽，如肽m。与a2f二等分和/或a2f二等分的生物合成前体糖链结合的血液分泌蛋白的特殊实例包括iga2。抗体可为单克隆抗体和多克隆抗体中的任一种。优选单克隆抗体。用于测量a2f二等分和/或a2f二等分的生物合成前体糖链的量的工具的更多实例包括：凝集素，其与a2f二等分和/或a2f二等分的生物合成前体糖链结合；和包含这样的凝集素的色谱法用载体。以上提及的工具的更多实例包括用于糖印迹法和唾液酸键特异性酰胺标记(salsa方法)的试剂。
[0047]
之后，将描述用于测量标记物的方法。血液中标记物的量可通过ms测量。例如，通过pngase f消化从血清中分离n连接型糖链，且通过糖印迹和唾液酸键特异性酰胺标记(salsa)制备标记的糖链。由此，标记的糖链可由maldi-tof ms分析。可以在甚至没有ms的情况下，例如，通过在血浆中切出糖链组分并使特异性识别a2f二等分和其生物合成前体糖链的凝集素(e4-pha)作用于此，将标记的糖链定量。优选使用用同位素元素、荧光试剂等等标记的凝集素。
[0048]
作为本发明的标志物，可以使用与特定蛋白质或特定肽结合的a2f二等分和其生物合成前体糖链。在这种情况下，通过使用和该与糖链结合的蛋白质或肽选择性结合的抗体分离此级分，以及使此级分与特异性识别存在于该蛋白质上的a2f二等分和其生物合成前体糖链的凝集素发生作用，来进行定量。优选使用用同位素元素、荧光试剂等等标记的凝集素作为凝集素。优选使用iga2或igm作为与糖链结合的蛋白质。
[0049]
即使上述级分未被分离，也可以使用识别与特定蛋白质或特定肽结合的a2f二等分和其生物合成前体糖链的凝集素或抗体。
[0050]
另一个方面，本发明提供了一种用于评估nash中肝纤维化的进展的方法，所述方法包含以下步骤：(a)分离样品中的iga2或igm，然后(b)测量与iga2或igm结合的a2f二等分和/或a2f二等分的生物合成前体糖链的量。
[0051]
用于分离样品中包含的 iga2或igm的工具的实例包括但不特别限于抗iga2抗体或抗igm抗体、所述抗体的片段和与iga2或igm相互作用的蛋白质或肽。可以适当地选择和
使用这些工具。本发明人已经发现最初用于分离igg的蛋白质g，可适宜用于此目的的分离。
[0052]
本发明的方法、标志物和试剂盒对于nash是特异性的，且使得能够评估nash中肝纤维化的进展。使用本发明的方法、标志物和试剂盒，也可以非侵入地进行评估。
[0053]
可使用本发明的方法、标志物和试剂盒评估nash的治疗效果。可使用本发明的方法、标志物和试剂盒评估nash的预后。可使用本发明的方法、标志物和试剂盒评估nash的治疗药物的功效。这些评估也可以非侵入地进行。
[0054]
尽管下文将通过展示实施例更详细和具体地描述本发明，但实施例不限制本发明的范围。
[0055]
本技术要求提交于2019年7月12日的日本专利申请2019-129798的优先权，且日本专利申请2019-129798的全部内容通过引用并入本技术。
[0056]
实施例1为了验证a2f二等分和/或a2f二等分的生物合成前体糖链的有用性，使用在nash f0、f1或f2(f1/f2)和f3或f4(f3/f4)(分别为20个样品、22个样品和28个样品)的血清全面分析n连接型糖链。通过用乙醇沉淀血清来制备血清蛋白级分，且通过糖印迹和唾液酸键特异性酰胺标记(salsa)制备标记的糖链。用maldi-tof ms分析标记的糖链。
[0057]
图1示出了由maldi-tof ms分析a2f二等分而得的结果。确认了伴随纤维化的进展，a2f二等分的表达量增加。在位于a2f二等分的生物合成路径的上游的糖链中，也以相似的方式确认了伴随纤维化的表达增加(图2)。图2中，糖链1至糖链5为以上描述的糖链1、糖链2(2a和2b)，糖链3(3a和3b)、4和糖链5(5a和5b)。从这些结果，不仅在a2f二等分中、也在其生物合成前体中确认了伴随肝纤维化的表达增加。
[0058]
实施例2之后，分析了a2f二等分的表达量和肝活检中病理学纤维化评估和血液中纤维化评估因子之间的相关性(图3)。结果，虽然a2f二等分的表达量展现了与f因子和fib4指数(它们是纤维化的指标)的高相关性，但a2f二等分的表达量未展现与crp的相关性(crp用于评估炎症)，且与脂肪肝因子(脂肪变性)展现负相关性。从以上结果确认了a2f二等分表达的变化展现了与nash中纤维化因子的高相关性。
[0059]
实施例3为了检查a2f二等分糖链的疾病特异性，通过相似的技术测量丙型肝炎患者血清(hcv：25个样品)中的a2f二等分糖链，且将丙型肝炎组中的表达量与nash纤维组(f0、f1/f2和f3/f4)中的表达量比较(图4)。虽然丙型肝炎患者包括肝纤维已进展的情况，但在丙型肝炎患者中，不像nash f3/4组，a2f二等分糖链的表达量没有展现出高数值。在nash中，随着纤维化进展，表达量增加，f3/4组中a2f二等分糖链的表达是丙型肝炎患者中表达量的两倍或更多。因此，提示a2f二等分糖链是能评估nash疾病中肝纤维化进展的疾病特异性标志物。
[0060]
实施例4为了评估a2f二等分糖链的纤维化识别灵敏度，使用由肝活检和病理学诊断确定了纤维化阶段的样品(f0(20个样品)、f1/2(22个样品)和f3/4(28个样品))进行roc分析。图5示出了结果。相比于a2f二等分糖链单独的表达量，使用图2中示出的前体糖链(糖链1、糖链2(2a和2b)、糖链3(3a和3b)、4和糖链5(5 a和5b))的表达量的总和(总数2)的auc评分增
加。显示该总和的auc评分与iv型胶原蛋白7s(图5中用4-7s描述)或fib-4的auc评分相似。观察到前体糖链总和和iv型胶原蛋白7s之间曲线形状的不同。展示出与前体糖链总和单独和iv型胶原蛋白单独相比，将前体糖链总和和iv型胶原蛋白7s组合的分析结果(auc评分)显著地高。在iv型胶原蛋白7s的roc曲线中，严重纤维化诊断的截止值为6 ng/ml，且超过这个值的假阳性样品为42个样品中的5个样品(f1/2：5个样品)。然而，使用a2f二等分和生物合成前体糖链1、2a、2b、3a、3b和4的总值的截止值(139.7 pmol/2.5 μl 血清)，通过iv型胶原蛋白7s的假阳性样品可以减少至40%(42个样品中的3个样品)。
[0061]
实施例5进行以下实验来识别与a2f二等分糖链结合的蛋白质。
[0062]
用蛋白质g将nash f3/4混合血清分级成流通级分和的蛋白质g结合级分(洗脱级分)。各级分由sds-page确认。通过糖印迹分析流通级分和洗脱级分的n连接型糖链。图6示出了结果。显示出，因nash的纤维化而观察到表达增加的a2f二等分糖链大量包含在洗脱级分中。
[0063]
通过sds-page分离nash f3/4混合血清中利用蛋白质g的洗脱级分，且使通过考马斯亮蓝(cbb)染色检测出的蛋白质带经受n连接型糖链分析。图7示出了结果。在带8、9和13中检测到a2f二等分糖链。当用内标糖链将a2f二等分糖链定量时，a2f二等分糖链以最大量75%包含在带9中。通过肽质量指纹法(pmf)识别带中包含的蛋白质，且显示带8中包含补体c3和igm，带9中包含iga。
[0064]
使用蛋白质g由标准血清制备的洗脱级分用胰蛋白酶消化。通过lc-ms全面分析与a2f二等分糖链结合的肽，且识别iga子类中的igm和iga2。
[0065]
为了评估纤维化进展中血清iga2的浓度，使用iga2 elisa(酶联免疫吸附测定)试剂盒测量f0、f1/2和f3/4(分别为20个样品、32个样品和35个样品)中血清iga2的浓度。图8示出了结果。虽然伴随纤维化的进展，看见血清iga2的浓度增加，但没有看见伴随纤维化的进展，iga2蛋白质表达的显著增加。因此，示出了随着纤维化的进展，促进了iga2中的a2f二等分糖链修饰。
[0066]
以上结果示出了与iga2结合的a2f二等分糖链是用于nash中肝纤维化的有效生物标志物。
[0067]
工业适用性本发明可用于肝脏疾病的诊断等等。本发明尤其可用于评估nash中肝纤维化的进展。因此，本发明可用于肝脏疾病用诊断药物的领域，肝脏疾病的研究领域等等。