一种刷格痛风膏的检测方法

本发明涉及民族药物及其质量检测领域。

背景技术：

羌医认为噜唔依基(痛风)病症范畴。母模得巫尼依基(风吹过都痛)所以称之为痛风，又名莫得巫迪叠·饶得禾迪·依基(火烧样石头堵塞样痛)属羌医“得迪(堵塞病)”范畴。近年来运用羌医药治疗痛风取得较好疗效，依据本病滋(水)、莫(火)、穆尔(雨水)吉纳咨斯(好吃好喝过盛)之病理，治以清火热除雨水，化厚味食解毒为主，其病位在四肢，特别脚拇趾掌关节好发，是脾胃和肝肾的赛米萨喜居器官功能失调密切相关。由白石滋部、黑石滋部、的功能混乱后产生的火毒石，火毒石不在体内正常运转排泄，而是在体内不断恶性循环，火毒石不断堆积在血管和内脏器官里，堵塞了正常运行的管道，从而使血液水等异常所致，其中异常黑石液水、火毒液晶、黑火毒液晶等异常毒液是主要致病毒体液。人的生命活动靠保质保量的各种营养物质，也就是由机体莫斯(气)、萨(血)滋(水)、吉纳(精微物质)、以及苏莫斯(本气)”来控制。人食用各种高脂肪、高蛋白等营养物质后，在正常情况下脾胃和肝肾肺通过机体莫斯(气)、萨(血)滋(水)、吉纳(精微物质)、以及苏莫斯(本气)”作用下，按照人体各部位和管道赛米的所需把营养物质输送到全身。脾胃和肝肾赛米萨喜居器官功能失调,火毒石不断堆积在血管和内脏器官里，堵塞了正常运行的管道，表情面红目赤、灰暗、痛苦面容，脚趾疼痛不堪，痛不欲生。因此，就诊患者先判别其辨算分型，分析其发病因素、白石滋部、黑石滋部分布、影响因素以及对不同辨算分型与之关联的证候症状，在此基础上采用饮食忌口、适度运动疗法、使用消火剂和祛毒剂以及药物、非药物等综合治疗。其治疗方法，首先让患者生活要有规律，不肥甘厚腻，适度运动，调节情绪，让患者禁忌食用极冰性、火性、不消化、刺激性强、生产气的食物，禁忌饮用阿司匹林类药品、禁用含草酸重的食物，禁止饮酒、禁止服用豆类食物，避免酗酒等。本病由白石滋部、黑石滋部、的功能混乱后产生的火毒石，火毒石不断堆积在血管和内脏器官里使血液水等异常所致；应采用消火、祛毒疗法及协调疗法。其中消火剂和祛毒剂，黑石液水、火毒液晶、黑火毒液晶等异常毒液，纠正不良的运行塞米管道，促进正常脾胃肝肾肺和机体莫斯(气)、萨(血)滋(水)吉纳(精微物质)、以及苏莫斯(本气)”的生成，恢复各脏腑器官的功能状态。根据不同辨算分析患者与之相关联系的证候症状消除及恢复情况，采用专用药物及非药物治疗。常用的药物有:外用噜唔依基膏、口服：噜唔依基散。主要起消肿止痛、软坚散结、化石通管、益肺健脾健肾、利水祛毒作用；滋巴赤贝疗法、涂雪猪油疗法、患处贴羌药膏疗法、羌药蒸疗法、羌药洗及羌药浴疗法、羌药茶饮品疗法、萨德洗疗法、针灸疗法、膳食调节疗法等9种。羌医辨算施治痛风，对于高尿酸血症期、急性期、间歇期、慢性期等不同发病期的痛风诊治具有丰富的临床经验，尤其对中重度、难治性痛风、不明原因发热以及痛风石的康复治疗颇有研究，有效康复众多反复治疗无效的痛风患者，这为本项目的完成奠定了基础。羌医治疗噜唔依基(痛风)(英文gout)(拉丁文tophus(复数为tophi))方案精准，疗效独特。羌医药从业者与学者共同撰写和编著了《羌医治疗噜唔依基(痛风)性关节炎诊疗常规》，制定不同时期痛风的临床诊断、综合治疗的研究和痛风分型和个体化诊疗技术。

刷格痛风膏为羌医药历经百余年的经验方，由生大黄、黄连、威灵仙、黄柏、贯众、白芷根6味药组成，北川羌族自治县中羌医医院临床应用超过5年，配合刷格痛风颗粒应用，总有效率高达98％，未发现明显显毒副作用。但是，该药物至今没有相关的质量研究方案，在其生产、销售和使用过程中，可能会对该产品的推广带来一定的影响。

技术实现要素：

为此，本发明的目的在于提供可以有效控制刷格痛风膏质量的检测方法。

具体的，本发明提供了一种刷格痛风膏的检测方法，所述痛风膏的原料药由黄柏5～20g、生大黄5～20g、贯众5～20g、白芷5～20g、威灵仙5～20g、黄连5～20g、冰片1～5g组成；它包括黄连的薄层检测内容：

(1)取膏体，甲醇或乙醇提取，得供试品溶液；

(2)取黄连作为对照药材，同(1)法提取，得黄连对照药材溶液；

(3)各溶液点硅胶g薄层板，以正丁醇-冰醋酸-水＝7:1:2作为展开剂，检测。

采用上述方法对膏体进行检测，可以对膏体中的成分有效展开，对于黄连的定性检测有积极的影响。

在预实验中，发明人还采用了中国药典中的展开剂：环己烷-乙酸乙酯-异丙醇-甲醇-水-三乙胺(3:3.5:1:1.5:0.5:1)，但展开后无明显斑点，发明人也曾在该药典展开剂的基础上进行了多种调整，但均不理想。发明人最终选用正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)作为展开剂，才能够有效检测到黄连的相应斑点，且斑点清晰可见，无拖尾，展开效果良好。

和扎哈(黄柏)清热。燥湿，泻火，解毒。治热痢，泄泻，消渴，黄疸，痿躄，梦遗，淋浊，痔疮，便血，亦白带下，骨蒸劳热，目赤肿痛，口舌生疮，疮疡肿毒。《用药心法》：治疮痛不可忍者。《日华子本草》：安心除劳，治骨蒸，洗肝，明目，多泪，口干，心热，杀疳虫，治蛔心痛，疥癣，蜜炙治鼻洪，肠风，泻血，后分急热肿痛。

刷格禾(生大黄)功效攻积滞；清湿热；泻火；凉血；祛瘀；解毒《本草新编》大黄性甚速，走而不守，善荡涤积滞，调中化食，通利水谷，推陈致新，导血，滚疾涎，破症结，散坚聚，止疼痛，败痈疽热毒，消肿胀，俱含如神。

木勒格巴植(贯众)功能与主治清热解毒，杀虫止血。用于瘟疫，斑疹，吐血，衄血，肠风便血，血痢，血崩，带下。【功能与主治】清热解毒，杀虫止血。用于瘟疫，斑疹，吐血，衄血，肠风便血，血痢，血崩，带下。

砒石喆博落(白芷根粉)功能主治:祛风湿，活血排脓，生肌止痛。用于头痛、牙痛、鼻渊、肠风痔漏、赤白带下、痈疽疮疡、皮肤瘙痒,

滋巴思(冰片)功能主治：通诸窍，散郁火，去翳明目，消肿止痛。治中风口噤，热病神昏，惊痫痰迷，气闭耳聋，喉痹，口疮，中耳炎，痈肿，痔疮，目亦翳膜，蛲虫病。.张景岳："味微甘大辛，敷用者其凉如冰，而气雄力锐。本非热，阳中有阴也。善散气，散血，散火，散滞，通窍，辟恶，逐心腹邪气。"(《本草正》)

格时牯思柏(灵仙)(拉丁文名clematischinensis)主治功能:祛风除湿，通络止痛，消痰水，散癖积。主治痛风顽痹、风湿痹痛，肢体麻木，腰膝冷痛，筋脉拘挛，屈伸不利，脚气，疟疾，症瘕积聚，破伤风，扁桃体炎，诸骨鲠咽。

喝啥思格补(黄连)清热燥湿，泻火解毒。用于湿热痞满，呕吐，泻痢，黄疸，高热神昏，心火亢盛，心烦不寐，血热吐衄，目赤吞酸，牙痛，消渴，痈肿疔疮；外治湿疹，湿疮，耳道流脓。酒黄连善清上焦火热。用于目赤，口疮

蜂蜡作为本发明膏剂中的辅料，既可以作为赋型剂，同时，还有一定的药效活性，部依纳哈(蜂蜡)功效主治：内服补虚弱、化浊脂、止消渴；外用解毒消肿，内服用于体虚早衰、高脂血症、消渴；外治用于皮肤皲裂、烧烫伤。

另外，它还包括贯众的薄层检测内容：

(1)取膏体，甲醇或乙醇提取，得供试品溶液；

(2)取贯众作为对照药材，同(1)法提取，得贯众对照药材溶液；

(3)各溶液点硅胶g薄层板，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸＝12∶2∶0.2作为展开剂，检测。

在预实验中，发明人还采用了文献中关于贯众的展开剂：三氯甲烷-乙酸乙酯-浓氨试液(10∶1∶0.1)，但展开后有严重的拖尾现象，斑点无法清晰可辩(赵丽丽,等.贯众药材的快速多信息薄层鉴别方法研究.中国兽药杂志,2020,54(04):52-55.)。经过多次尝试，发明人最终选用环己烷-乙酸乙酯-甲酸(12∶2∶0.2)作为展开剂，才能够使得贯众的相应斑点清晰可见，无拖尾，展开效果良好。

另外，它还包括采用hplc对盐酸小檗碱的含量测定：

(1)取膏体，在酸存在下，以乙醇或酸化甲醇提取，制得供试品溶液；

(2)取盐酸小檗碱，制备对照品溶液；

(3)hplc检测条件：

色谱柱：以十八烷基键和硅胶为固定相；

流动相：乙腈：磷酸水溶液＝28:72。

在对盐酸小檗碱的hplc含量检测中，最初使用了药典方法中记载的乙腈：磷酸＝32:68进行检测，但盐酸小檗碱的色谱峰与前峰没分开，含量测定结果有误差。经过筛选，后选用了乙腈：磷酸水溶液＝28:72作为流动相，目标峰分离效果良好，可用于对该产品中盐酸小檗碱的含量测定。

其中，(1)项中所述酸为盐酸。

其中，所述盐酸与醇的用量比为0.5～2:100。

其中，(2)项中所述磷酸水溶液的浓度为0.01～2％。

其中，检测柱温选自20-30℃；检测波长选自265±5nm。

其中，所述刷格痛风膏的制备方法包括：

(1)取除冰片外的各原料，粉碎，得到药粉；

(2)蜂蜡熔化于热油中，加入药粉搅拌；降温至30℃以下，加入冰片，冷却，即得。

其中，所述油选自植物油。

采用本发明方法，可以刷格痛风膏中多种药材和主要成分进行检测，从而为刷格痛风膏的质量标准控制提供基础，对于刷格痛风膏的推广带来了积极意义。

附图说明

图1黄连薄层色谱图，从左至有分别为供试品、阴性对照、对照药材

图2贯众薄层色谱图,1供试品2阴性对照3对照药材

图3药典方法hplc色谱图

图4本发明hplc色谱图

具体实施方式

实施例所用原料如下：

黄柏：本品为芸香科植物黄皮树pheliodendronchinenseschncid的干燥树皮。习称“川黄柏”。剥取树皮后，除去粗皮，晒干。标准收载于《中国药典》2020年版一部第318页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

生大黄：本品为蓼科植物掌叶大黄rheumpalmatuml.、唐古特大黄rheumtanguticummaxim.exbalf.或药用大黄rheumoffcinalebaill.的干燥根和根茎。秋末茎叶枯萎或次春发芽前采挖，除去细根，刮去外皮，切瓣或段，绳穿成串干燥或直接干燥。标准收载于《中国药典》2020版一部第24页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

威灵仙：本品为毛茛科植物威灵仙clematischinensisosbeck、棉团铁线莲clematishexapetalapall.或东北铁线莲clematismanshuricarupr.的干燥根和根茎。秋季采挖，除去泥沙，晒干。标准收载于《中国药典》2020年版一部第262页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

黄连：本品为毛茛科植物黄连coptischinensisfranch.、三角叶黄连coptisdeltoideac.y.chengethsiao或云连coptisteetawall.的干燥根茎。以上三种分别习称“味连”、“雅连”、“云连”。秋季采挖，除去须根和泥沙，干燥，撞去干燥须根。标准收载于《中国药典》2020年版一部第316页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

白芷：本品为伞形科植物白芷angelicadahurica(fisch.exhoffm.)benth.ethook,f.或杭白芷angelicadahurica(fisch.exhoffm.)benth.ethook.f.var.formosana(boiss.)shanetyuan的干燥根。标准收载于《中国药典》2020年版一部第109页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

贯众：本品为鳞毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨dryopteriscrassirhizomanakai的干燥根茎和叶柄残基。秋季采挖，削去叶柄,须根,除去泥沙,晒干。标准收载于《中国药典》2020年版一部第344页。经检验，符合研究用药的原料(药材)的质量标准的有关规定。

实施例1本发明膏剂的制备

将配方中的药品：黄柏5～15g、生大黄5～15g、贯众5～15g、白芷5～15g、威灵仙5～15g、黄连5～15g，按量称取。共研为细粉过120目筛后备用。注：冰片1～5g另单独粉，存放。

将香油加热i00℃时放入蜂蜡熔化后，把放入容器内稍凉后，加入准备好的药粉搅拌均匀，降温至30℃时再放入冰片混匀，包装。

实施例2黄连的薄层鉴别

除去背衬层和覆盖物，称取膏体0.25g,加甲醇25ml,超声处理30分钟滤过,取滤液作为供试品溶液。另取黄连对照药材0.25g,同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品,加甲醇制成每1ml含的溶液,作为对照品溶液。照2020版中国药典薄层色谱法(通则0502)试验,吸取上述三种溶液各1ul,分别点于同一高效硅胶g薄层板上,以正丁醇-冰醋酸-水(7:1:2)为展开剂,置用浓氨试液预饱和20分钟的展开缸内,展开,取出,晾干,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照药材色谱相应的位置上,显3个颜色的荧光斑点。色谱图参见图1。

实施例3贯众的薄层鉴别

除去背衬层和覆盖物，称取膏体3g，加15ml甲醇超声30min，滤液蒸干，加2ml甲醇溶解即得。称取不含贯众的膏体3g，同法制成阴性对照溶液。称取贯众对照药材0.5g，同法制成对照药材溶液。取供试品溶液、阴性对照溶液和对照药材溶液各6微升，分别点于同一硅胶g薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-甲酸(12：2：0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯254nm下检视；供试品色谱中，在与对照药材相应的位置上，显相同颜色的主斑点。色谱图参见图2。

实施例4含盐酸小檗碱量测定(hplc)

照高效液相色谱法《中国药典》2020版四部高效液相色谱法测定，按外标法法计算盐酸小檗碱含量。

色谱条件

inertsilods-3色谱柱(4.6×250mmcolumn，5μm)；以乙腈-0.1％磷酸水溶液(28：72)为流动相进行等度洗脱，柱温25℃，流速1ml/min，进样量2μl，检测波长265nm，理论塔板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。

供试品溶液的制备

精密称取膏体2.5g,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇-盐酸(100:1)的混合溶液25ml,密塞,称定重量,超声处理(功率250w,频率40khz)30分钟,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量，摇匀,滤过,即得。

对照品溶液的制备

精密称取盐酸小檗碱标准品10mg，置于100ml容量瓶中，加甲醇至刻度,制成浓度为0.1mg/ml的盐酸小檗碱标准溶液，备用。

方法学考察

线性关系考察

精密吸取盐酸小檗碱对照品，用甲醇依次稀释成0.05mg/ml、0.02mg/ml、0.01mg/ml、0.008mg/ml、0.005mg/ml、0.002mg/ml的对照品溶液，作为不同浓度的对照品溶液。分别精密吸取各对照品溶液2μl进行测定，以进样质量浓度为横坐标(x)，相应的峰面积为纵坐标(y)，绘制标准曲线。得到盐酸小檗碱的回归方程y＝55900278.40x-27861.07,r2＝0.9996，呈良好线性关系。

精密度试验：精密吸取供试品溶液重复进样6次，每次进样2μl，盐酸小檗碱峰面积的rsd为0.30％，表明仪器精密度良好。

重复性试验：按供试品溶液制备方法制备6份，按上述色谱条件进样，结果盐酸小檗碱质量分数的rsd为1.87％，表明方法重复性良好。

稳定性试验：取供试品溶液分别于制备后0、2、4、8、16、24h进样测定，结果盐酸小檗碱峰面积的rsd为1.74％，表明刷格痛风颗粒供试品溶液在24h内稳定。

加样回收率试验：精密称取已知含量的供试品6份，每份约1.25g，精密称定，加2ml0.1mg/ml的盐酸小檗碱对照品溶液，按供试品制备方法制备供试液，进行测定。结果6份刷格痛风膏中盐酸小檗碱回收率分别为85.55％,86.58％,83.17％,83.26％,83.72％,85.55％，rsd为1.70％。

含量测定

刷格痛风膏中盐酸小檗碱含量测定结果见表1。

表1刷格痛风颗粒中盐酸小檗碱含量测定结果表(n＝6)