1.本发明涉及食品检测，尤其是一种检测畜禽产品中卡拉洛尔药物的酶联试剂盒。
背景技术：
2.elisa(enzyme linked immunosorbent assay)是酶联免疫吸附检测的简称，是继免疫荧光和射免疫技术之后发展起来的一种酶免技术,被广泛应用在免疫学检验的各领域中，elisa检测试剂盒则常用于体外定性检测人血清或血浆中的抗人类戊型肝炎(hev)病毒igm抗体elisa检测。
3.卡拉洛尔英文名称carazolol，功用是阻断β1、β2受体，无内在拟交感活性，作用比普萘洛尔强，除对心脏的β受体(β1受体)有阻断作用外，对支气管及血管平滑肌的β受体(β2受体)亦有阻断作用，可引起支气管痉挛及鼻粘膜微细血管收缩，故忌用于哮喘及过敏性鼻炎病人，忌用于窦性心动过缓、重度房室传导阻滞、心源性休克、低血压症病人。副作用可见乏力、嗜睡、头晕、失眠、恶心、腹胀、皮疹、晕厥、低血压、心动过缓等。而在现有的畜禽养殖业中，有的会将卡拉洛尔注射进畜禽身上，以防止动物在运输过程中发生猝死，特别是对于生猪等动物长途运输，而人食用了注射有卡拉洛尔的食品后，残留在食品中的卡拉洛尔就会对人体产生危害，在现有的检测中基本是通过液相色谱-质谱/质谱法来检测的，检测步骤繁琐还需要专业的人员进行操作，需要萃取溶剂体积较大，操作极不方便，无法快速准确的进行检测。
技术实现要素：
4.针对现有的不足，本发明提供一种检测畜禽产品中卡拉洛尔药物的酶联试剂盒。
5.本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种检测畜禽产品中卡拉洛尔药物的酶联试剂盒，包括包被有卡拉洛尔偶联蛋白抗原的微孔反应板、多份浓度不同的卡拉洛尔标准品溶液、抗体工作液、酶标记物、显色剂、终止液、洗涤液、样本稀释液；所述卡拉洛尔标准品溶液包括七份，其浓度分别是0ng/ml、0.2ng/ml、0.6ng/ml、1.8ng/ml、5.4ng/ml、16.2ng/ml、1μg/ml；所述抗体工作液是添加有抗卡拉洛尔抗体的溶液，其在抗体工作液中的重量百分比是0.005-0.006％；所述酶标记物是添加有辣根过氧化酶标记的抗小鼠igg抗体的溶液，所述辣根过氧化酶标记的抗小鼠igg抗体在酶标记物中的重量百分比是0.009-0.011％；所述显色剂是含有浓度为0.045-0.055mg/ml tmb的溶液；所述卡拉洛尔偶联蛋白抗原利用卡拉洛尔-hs和bsa制得，所述抗卡拉洛尔抗体利用卡拉洛尔-hs和klh在兔源或鼠源上制得。
6.作为优选，所述卡拉洛尔偶联蛋白抗原通过如下步骤制得：
7.s1a，将卡拉洛尔在吡啶中溶解并加入琥珀酸酐搅拌形成反应液；
8.s1b，将反应液在冰蒸馏水和浓盐酸的混合溶液中静置；
9.s1c，将静置后的溶液过滤，并通过洗涤调节沉淀的ph值为5-5.8后干燥得粗产品；
10.s1d，将粗产品层析分离制得卡拉洛尔-hs纯品；
11.s1e，将卡拉洛尔-hs纯品和bsa分别溶于二氧六环中，并在卡拉洛尔-hs纯品溶液中依次加入三正丁胺、氯甲酸异丁酯，之后将卡拉洛尔-hs纯品溶液和bsa溶液混合；
12.s1f，将卡拉洛尔-hs纯品溶液和bsa溶液的混合溶液透析并浓缩干燥制得卡拉洛尔偶联蛋白抗原。
13.作为优选，所述抗卡拉洛尔抗体是兔源抗卡拉洛尔多克隆抗体或鼠源抗卡拉洛尔单克隆抗体，并通过如下步骤制得：
14.s2a，将卡拉洛尔在吡啶中溶解并加入琥珀酸酐搅拌形成反应液；
15.s2b，将反应液在冰蒸馏水和浓盐酸的混合溶液中静置；
16.s2c，将静置后的溶液过滤，并通过洗涤调节沉淀的ph值为5-5.8后干燥得粗产品；
17.s2d，将粗产品层析分离制得卡拉洛尔-hs纯品；
18.s2e，将卡拉洛尔-hs纯品和klh分别溶于二氧六环中，并在卡拉洛尔-hs纯品溶液中依次加入三正丁胺、氯甲酸异丁酯，之后将卡拉洛尔-hs纯品溶液和klh溶液混合；
19.s2f，将卡拉洛尔-hs纯品溶液和klh溶液的混合溶液透析并浓缩制得卡拉洛尔-hs-klh；
20.s2g，将卡拉洛尔-hs-klh与免疫佐剂混合后皮下注射进兔子体内，通过兔子血液制得兔源抗卡拉洛尔多克隆抗体；或者将卡拉洛尔-hs-klh与免疫佐剂混合后皮下注射进小鼠体内，通过小鼠脾细胞培养形成细胞株，并将细胞株注射入小鼠腹腔，再通过对小鼠的腹水的纯化制得鼠源抗卡拉洛尔单克隆抗体。
21.作为优选，所述微孔反应板通过如下方法制得：将纯化过后的卡拉洛尔偶联蛋白抗原，用磷酸盐缓冲液稀成浓度为0.9-1.05μg/ml的抗原包被液，混匀后以100
±
2μl/孔的量加入到微孔板中，温度在4
±
0.5℃下放置14小时-16小时，之后甩掉孔内液体，以洗涤液洗涤，洗涤后甩干并以150
±
2μl/孔的量加入封闭液，在室温下放置至少4小时，之后甩干并进行干燥封装。
22.作为优选，所述封闭液包括如下重量百分比的组分：蔗糖2％-20％、牛血清白蛋白0.1％-2％、小牛血清0.05％-1％、酪蛋白0.5％-2％、聚乙烯吡咯烷酮0.1％-2％。
23.作为优选，所述抗体工作液是在ph值为7.0-8.0，浓度为0.02-0.2mol/l的磷酸盐缓冲液或tris-hcl缓冲液中添加如下重量百分比的组分制成：牛血清白蛋白0.05％-0.1％、防腐剂0.01％-0.1％、保护剂0.1％-0.5％、抗卡拉洛尔抗体0.005％。
24.作为优选，所述述酶标记物包括如下重量百分比的组分：蔗糖2％-20％、牛血清白蛋白0.1％-2％、小牛血清0.05％-1％、酪蛋白0.5％-2％、聚乙烯吡咯烷酮0.1％-2％、吐温-20 0.01％-0.5％、防腐剂0.01％-0.1％、酶保护剂0.1％-0.5％、0.009-0.011％辣根过氧化酶标记的抗小鼠igg抗体。
25.作为优选，所述显色剂包括溶液a和溶液b，所述溶液a中包括如下组分：每100ml溶液中含有柠檬酸950-1100mg、edta-n
a2 15-18mg、tmb 4.5-5.8mg、二甲基亚砜溶解液0.8ml；所述溶液b中包括如下组分：每100ml溶液中含有柠檬酸0.8-0.85g、乙酸钠1.0-1.2g、过氧化氢脲0.58-0.62g、吐温-20 0.15-0.25ml。
26.作为优选，所述终止液是1.8-2.2mol/l的硫酸溶液，所述洗涤液包括如下组分：每1000ml溶液中含有磷酸二氢钾3.7-4.5g、磷酸氢二钠55-68g、吐温-20 9.6-10.5ml、氯化钠140-170g、氯化钾3.8-4.3g。
27.作为优选，所述稀释液包括如下组分：每1000ml溶液中含有磷酸二氢钾2.6-3.0g、氯化钠110-125g、吐温-20 0.9-1.1ml、防腐剂0.48-0.51ml。
28.本发明的有益效果在于：该发明在微孔反应板上预包被偶联抗原，样本中的残留卡拉洛尔药物和微孔反应板上预包被的偶联抗原竞争抗卡拉洛尔药物抗体，加入酶标记物后，用显色剂显色，样本吸光值与其所含残留卡拉洛尔药物的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物卡拉洛尔药物的含量，具有灵敏度高、特异性强、简化了加样模式，减少加样误差，提高了检测结果的准确度，适用大量禽类样本同时检测，而且抗体和抗原的制备也简单，易于生产。
具体实施方式
29.为了更清楚地说明本发明实施例的目的、技术方案和优点，下面将结合实施例对本发明作进一步说明，进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例是本发明的部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明的实施例，本领域普通技术人员在没有付出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明的保护范围。
30.本发明实施例，一种检测畜禽产品中卡拉洛尔药物的酶联试剂盒，包括包被有卡拉洛尔偶联蛋白抗原的微孔反应板、多份浓度不同的卡拉洛尔标准品溶液、抗体工作液、酶标记物、显色剂、终止液、洗涤液、样本稀释液，微孔反应板通过如下方法制得，将纯化过后的卡拉洛尔偶联蛋白的抗原，用磷酸盐缓冲液(浓度为0.1mol/l，ph8.0)将其稀释成浓度为1μg/ml的抗原包被液，混匀后加入到96孔微孔板中，加入量为100μl/孔，在4℃下放置15小时后甩掉微孔板上孔内液体，并以洗涤液洗涤至少1次，洗涤液包括如下组分：每1000ml溶液中含有磷酸二氢钾3.7-4.5g、磷酸氢二钠55-68g、吐温-20 9.6-10.5ml、氯化钠140-170g、氯化钾3.8-4.3g，配制时在1000ml纯化水中加入4g磷酸二氢钾、60g磷酸氢二钠、10ml吐温-20、160g氯化钠、4g氯化钾溶解后并定容至1000ml，形成20倍的浓缩洗涤液，之后按40ml/瓶的规格分装，在使用时将20倍的浓缩洗涤液以纯化水稀释为1倍洗涤液，稀释则按照如下方法，将15ml 20倍浓缩洗涤液用去离子水稀释至300ml即可，在将微孔板的孔内液体甩干后，往孔内加入封闭液，封闭液包括如下重量百分比的组分：蔗糖2％-20％、牛血清白蛋白0.1％-2％、小牛血清0.05％-1％、酪蛋白0.5％-2％、聚乙烯吡咯烷酮0.1％-2％，加入量为150μl/孔，之后在25℃下放置4小时，并再次甩干，甩干后干燥2小时，用铝箔袋真空热封即成成品的微孔反应板；所述卡拉洛尔标准品溶液包括七份，其浓度分别是0ng/ml、0.5ng/ml、1.5ng/ml、4.5ng/ml、13.5ng/ml、40.5ng/ml、1μg/ml，它们就用0.01mol/l磷酸盐缓冲液稀释卡拉洛尔标准品而制成，通过它们来制作标准曲线，然后通过检测样品与标准曲线的对比就得出样品中卡拉洛尔的量，以1ml/瓶的规格分装；所述卡拉洛尔标准品溶液包括七份，其浓度分别是0ng/ml、0.2ng/ml、0.6ng/ml、1.8ng/ml、5.4ng/ml、16.2ng/ml、1μg/ml，它们就用0.01mol/l磷酸盐缓冲液稀释卡拉洛尔标准品而制成，通过它们来制作标准曲线，然后通过检测样品与标准曲线的对比就得出样品中卡拉洛尔的量，以1ml/瓶的规格分装，这样浓度的标准品制得的标准曲线就能很好的体现出卡拉洛尔浓度与吸光值的关系，在满足相应的残余量检测要求的同时还使得检测出的样品中的卡拉洛尔的浓度具有更高的可信度；所述抗体工作液是添加有抗卡拉洛尔抗体的溶液，其在抗体工作液中的重量百分比是0.005-0.006％，抗体工作液是在ph值为7.4，浓度为0.02mol/l的磷酸盐缓冲液或
tris-hcl缓冲液中添加如下重量百分比的组分制成：牛血清白蛋白0.05％-0.1％、防腐剂0.01％-0.1％、保护剂0.1％-0.5％、抗卡拉洛尔抗体0.005％，防腐剂采用proclin300，按7ml/瓶的规格分装；所述酶标记物是添加有辣根过氧化酶标记的抗小鼠igg抗体的溶液，所述辣根过氧化酶标记的抗小鼠igg抗体在酶标记物中的重量百分比是0.009-0.011％，酶标记物则通过如下重量百分比的组分来制取，用含有2％-20％蔗糖，0.1％-2％牛血清白蛋白，0.05％-1％小牛血清，0.5％-2％酪蛋白，0.1％-2％聚乙烯吡咯烷酮,0.01％-0.5％吐温-20，0.01％-0.1％防腐剂proclin300，0.1％-0.5％酶保护剂，并加入0.01％辣根过氧化酶标记的抗小鼠igg抗体来制取，之后按7ml/瓶的规格分装；所述显色剂是含有浓度为0.045-0.055mg/ml tmb的溶液，显色剂包括溶液a和溶液b，所述溶液a中包括如下组分：每100ml溶液中含有柠檬酸950-1100mg、edta-n
a2 15-18mg、tmb 4.5-5.8mg、二甲基亚砜溶解液0.8ml；所述溶液b中包括如下组分：每100ml溶液中含有柠檬酸0.8-0.85g、乙酸钠1.0-1.2g、过氧化氢脲0.58-0.62g、吐温-20 0.15-0.25ml，如溶液a：量取5250mg柠檬酸、83mgedta-na2、25mgtmb和4ml二甲基亚砜溶解混合并用蒸馏水定容至500ml，之后按7ml/瓶的规格分装；溶液b：量取4.1g柠檬酸、5.5g乙酸钠、0.3g过氧化氢脲、1ml吐温-20溶解混合并用蒸馏水定容至500ml，之后按7ml/瓶规格分装；终止液是1.8-2.2mol/l的硫酸溶液，如将500ml 98％浓硫酸加入4.5l纯化水中，制成2mol/l的硫酸终止液，按7ml/瓶规格分装；样本稀释液包括如下组分：每1000ml溶液中含有磷酸二氢钾2.6-3.0g、氯化钠110-125g、吐温-20 0.9-1.1ml、防腐剂0.48-0.51ml，如将1000ml纯化水中加入2.8g磷酸二氢钾、118g氯化钠、1ml吐温-20、0.5ml proclin300，定容至1000ml，按50ml/瓶的规格分装即可；所述卡拉洛尔偶联蛋白抗原利用卡拉洛尔-hs和bsa制得，所述抗卡拉洛尔抗体利用卡拉洛尔-hs和klh在兔源或鼠源上制得。这样形成的试剂盒就在微孔反应板上预包被偶联抗原，样本中的残留卡拉洛尔药物和微孔反应板上预包被的偶联抗原竞争抗卡拉洛尔药物抗体，加入酶标记物后，用显色剂显色，样本吸光值与其所含残留卡拉洛尔药物的含量成负相关，与标准曲线比较即可得出相应残留物卡拉洛尔药物的含量，具有灵敏度高、特异性强、简化了加样模式，减少加样误差，提高了检测结果的准确度，适用大量禽类样本同时检测，检测更便捷，而且抗体和抗原的制备也简单，易于生产。
31.进一步的改进，卡拉洛尔偶联蛋白抗原通过如下步骤制得：
32.s1a，将卡拉洛尔在吡啶中溶解并加入琥珀酸酐搅拌形成反应液，如称取将78mg卡拉洛尔溶于5ml吡啶中,搅拌至完全溶解后，加入琥珀酸酐25mg,置于通风橱中,在室温下搅拌48h；
33.s1b，将反应液在冰蒸馏水和浓盐酸的混合溶液中静置，将前一步骤生成的反应液移入30ml冰蒸馏水与5ml浓盐酸组成的混合液中静置过夜；
34.s1c，将静置后的溶液过滤，并通过洗涤调节沉淀的ph值为5-5.8后干燥得粗产品，过滤采用抽滤的方式，通过抽滤析出的沉淀,以蒸馏水洗至ph 5.5左右,之后真空干燥得到粗产品；
35.s1d，将粗产品层析分离制得卡拉洛尔-hs纯品，即将所得粗产品加入丙酮溶解,之后拌入等量的硅胶,室温下晾干,用200～300目硅胶柱层析分离,用tlc(薄层色谱)监测,收集rf＝0.09(展开剂,石油醚∶丙酮＝3∶1)的点合并,在常温下干燥即得卡拉洛尔-hs纯品；
36.s1e，将卡拉洛尔-hs纯品和bsa分别溶于二氧六环中，并在卡拉洛尔-hs纯品溶液
中依次加入三正丁胺、氯甲酸异丁酯，之后将卡拉洛尔-hs纯品溶液和bsa溶液混合，首先将卡拉洛尔-hs 25mg溶于10ml二氧六环中，置4℃下10min，然后加入20μl三正丁胺,混匀，再加入15μl氯甲酸异丁酯，4℃条件下搅拌30min，形成甲液亦即卡拉洛尔-hs纯品溶液，另取150mg bsa溶于20ml的70％二氧六环水溶液中，此为乙液亦即bsa溶液，最后将甲液与乙液合并，4℃下搅拌过夜；
37.s1f，将卡拉洛尔-hs纯品溶液和bsa溶液的混合溶液透析并浓缩干燥制得卡拉洛尔偶联蛋白抗原，将混合后的反应液流水透析2h，然后换成平衡盐溶液继续透析48h，浓缩透析液，冷冻干燥即得卡拉洛尔-hs-bsa亦即卡拉洛尔偶联蛋白抗原，而卡拉洛尔-hs-bsa的分子量则用5％的积层胶和10％的分离胶对卡拉洛尔-hs-bsa进行sds-pa ge鉴定，通过紫外凝胶成像系统分析软件分析得出，以此为依据就可推算单个bsa上结合卡拉洛尔-hs的数目。
38.进一步的改进，所述抗卡拉洛尔抗体是兔源抗卡拉洛尔多克隆抗体或鼠源抗卡拉洛尔单克隆抗体，并通过如下步骤制得：
39.s2a，将卡拉洛尔在吡啶中溶解并加入琥珀酸酐搅拌形成反应液；
40.s2b，将反应液在冰蒸馏水和浓盐酸的混合溶液中静置；
41.s2c，将静置后的溶液过滤，并通过洗涤调节沉淀的ph值为5-5.8后干燥得粗产品；
42.s2d，将粗产品层析分离制得卡拉洛尔-hs纯品；此过程中s2a到s2d就同制备卡拉洛尔偶联蛋白抗原s1a到s1d相同，制备出的卡拉洛尔-hs能够通用，就方便对抗原和抗体的制备，简化流程，更便于生产；
43.s2e，将卡拉洛尔-hs纯品和klh分别溶于二氧六环中，并在卡拉洛尔-hs纯品溶液中依次加入三正丁胺、氯甲酸异丁酯，之后将卡拉洛尔-hs纯品溶液和klh溶液混合，klh即钥孔血蓝蛋白，首先将卡拉洛尔-hs 25mg溶于10ml二氧六环中，置4℃下10min，然后加入20μl三正丁胺,混匀，再加入15μl氯甲酸异丁酯，4℃条件下搅拌30min，形成甲液亦即卡拉洛尔-hs纯品溶液，另取100mg klh溶于20ml的70％二氧六环水溶液中，此为乙液亦即klh溶液，最后将甲液与乙液合并，4℃下搅拌过夜，该过程也同制备抗原的过程有相同的步骤，也就可以将卡拉洛尔-hs纯品溶液做到通用，方便生产；
44.s2f，将卡拉洛尔-hs纯品溶液和klh溶液的混合溶液透析并浓缩制得卡拉洛尔-hs-klh，将混合后的反应液流水透析2h，然后换成平衡盐溶液继续透析48h，浓缩透析液，冷冻干燥即得卡拉洛尔-hs-klh；
45.s2g，将卡拉洛尔-hs-klh与免疫佐剂混合后皮下注射进兔子体内，通过兔子血液制得兔源抗卡拉洛尔多克隆抗体，首先将卡拉洛尔-hs-klh与免疫佐剂混合后，皮下注射进兔子体内，在7-15天采集血液并检测抗卡拉洛尔抗体效价，之后10-15天进行一次加强免疫，共免疫3-7次，最后采集全部的兔子血液，离心分离出血清，用亲和层析纯化血清，得到抗卡拉洛尔抗体(兔源抗卡拉洛尔多克隆抗体)；或者将卡拉洛尔-hs-klh与免疫佐剂混合后皮下注射进小鼠体内，通过小鼠脾细胞培养形成细胞株，并将细胞株注射入小鼠腹腔，再通过对小鼠的腹水的纯化制得鼠源抗卡拉洛尔单克隆抗体，即将卡拉洛尔-hs-klh与免疫佐剂混合后，皮下注射进小鼠体内，在7-15天采集血液检测抗卡拉洛尔抗体效价，之后10-15天进行一次加强免疫，共免疫3-7次，接着采集小鼠脾细胞，将采集的脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合，并将融合后的细胞分离成不同的小份，分别进行扩大培养，检测培养液上层的
效价，筛选出合适的细胞株，将筛选出的细胞株注射入小鼠腹腔，7-15天后取出腹水，用亲和层析或辛酸-硫酸铵法纯化腹水，得到抗卡拉洛尔抗体(鼠源抗卡拉洛尔单克隆抗体)。
46.在实际检测中，对试剂盒的具体使用则如下步骤：
47.1、禽肉组织样本处理过程：
48.1)称2.0
±
0.05g均质后的组织样本于50ml离心管中；加入乙腈8ml，充分上下混合2min，4000r/min以上15℃离心10min；
49.2)取下层有机相2ml至干燥容器中(清亮无杂质)，50-60℃氮气吹干；
50.3)用1ml样本稀释液(与蒸馏水的体积比1:1稀释后使用)溶解干燥的残留物，加入正己烷1ml，混合30s，4000r/min以上15℃离心5min；去除上层正己烷；
51.4)取下层50μl液体用于分析，此时样本稀释倍数：1倍。
52.2、试剂盒操作步骤：
53.1)从4℃冷藏环境中取出所需试剂，室温(20-25℃)平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀；
54.2)取出框架及需要数量的微孔，将不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃；
55.3)配液：将40ml浓缩洗涤液(20倍浓缩)用去离子水按照1：19稀释(1份浓缩洗涤液+19份去离子水)，或按所需用量配制洗涤液；
56.4)编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置；
57.5)加标准品/样本50μl/孔，然后加入酶标记物50μl/孔，最后再抗体工作液50μl/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板，25℃环境反应30min；
58.6)将孔内液体甩干，用已稀释的洗涤液250μl/孔洗板4-5次，每次间隔15-30秒，用吸水纸拍干(拍干后未清除的气泡可用干净的枪头刺破)；
59.7)显色：加入溶液a 50μl/孔，再加入溶液b 50μl/孔，轻轻振荡混匀，25℃环境中避光显色15min；
60.8)测定：加入终止液50μl/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处(用双波长450/630nm检测，5min内读完数据)，测定每孔od值。
61.3、结果判定：
62.首先可以进行粗略判定：即用样本的平均吸光度值与标准值比较即可得出其浓度范围(ng/ml)。假设样本1的吸光度值为0.3，样本2的吸光度值为1.0，标准液吸光度值分别是：0ppb为1.653；0.2ppb为1.385；0.6ppb为1.056；1.8ppb为0.826；5.4ppb为0.453；16.2ppb为0.255。则样本1的浓度范围是5.4ppb～16.2ppb；样本2的浓度范围是0.6ppb～1.8ppb，乘以其对应的稀释倍数即为样本中卡拉洛尔实际浓度；
63.其次就是定量分析：
64.1)百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的吸光度值的平均值(双孔)除以第一个标准(0标准)的吸光度值，再乘以100％即百分吸光度值(％)＝(b/b0)
×
100％；
65.b—标准溶液或样本溶液的平均吸光度值
66.b0—0ng/ml标准溶液的平均吸光度值
67.2)标准曲线的绘制与计算
68.以标准品百分吸光率为纵坐标，以卡拉洛尔标准品浓度(ng/ml)的半对数为横坐标，绘制标准曲线图，将样本的百分吸光率代入标准曲线中，从标准曲线上读出样本所对应的浓度，乘以其对应的稀释倍数即为样本中卡拉洛尔药物实际浓度。
69.应当理解的是，对本领域普通技术人员来说，可根据上述说明加以改进或变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围。