技术特征：
1.方法，其包括：用dna损伤剂处理白细胞；在经处理的细胞中测量至少一种dna双链断裂(dsb)修复途径基因的功能活性；将至少一种测量的功能活性与从用dna损伤剂处理并具有野生型dna双链断裂(dsb)修复途径的对照白细胞获得的至少一种对照值进行比较；以及基于比较步骤，将dsb修复途径基因分类为功能性、具有功能丧失或具有功能获得。2.权利要求1所述的方法，其中所述至少一种功能活性选自brca1核定位，brca2核定位，brca1与选自palb2、brca2和fancd2的配偶体的结合，以及p53的磷酸化。3.权利要求1所述的方法，其中所述至少一个对照值从正常白细胞或具有正常dnadsb修复途径的白细胞中测量。4.权利要求1所述的方法，其中所述至少一个对照值从具有缺陷dnadsb途径和癌症风险的白细胞中测量。5.权利要求1所述的方法，其中所述至少一个对照值在早先时间确定。6.权利要求1所述的方法，其中所述至少一个对照值与来自所述对象的白细胞中dsb修复途径的功能活性的测量平行确定。7.权利要求1所述的方法，其中所述白细胞选自b细胞、类淋巴母细胞和总白细胞。8.权利要求1所述的方法，其中所述白细胞在用dna损伤剂处理之前进行培养。9.权利要求1所述的方法，其中所述dna损伤剂选自辐射、化合物或其组合。10.权利要求9所述的方法，其中所述辐射是uv、x
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射线或γ
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射线。11.权利要求10所述的方法，其中所述化合物选自丝裂霉素c(mmc)、1,3
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丁二烯二环氧化物(deb)、博来霉素(bleo)或其组合。12.权利要求1所述的方法，其中所测量的dna双链断裂(dsb)修复途径基因的所述至少一种功能活性是brca1核定位或brca2核定位。13.权利要求12所述的方法，其中brca1核定位或brca2核定位在使用一种dna损伤剂的测定中测量。14.权利要求12所述的方法，其中brca1核定位或brca2核定位在多个测定中测量，每个测定使用不同的dna损伤剂。15.权利要求12所述的方法，其中brca1核定位或brca2核定位是使用dcw(数字细胞western)核定位测定形式测量的。16.权利要求15所述的方法，其中所述dcw核定位测定包括：固定所处理的细胞，使所处理的细胞经受导致预定百分比细胞裂解的细胞裂解条件，通过离心收集细胞核和未裂解的细胞，将所收集的细胞核和未裂解的细胞重悬于染色缓冲液中，所述缓冲液包含光活化剂缀合的抗brca1抗体或光活化剂缀合的抗brca2抗体以及对定位于细胞内且在细胞核外的蛋白质具有特异性的光活化剂缀合的抗体，测量定位于细胞核的brca1蛋白的量和细胞中brca1蛋白的总量，以及确定定位于细胞核的brca1蛋白或brca2蛋白的量相对于细胞中表达的brca1蛋白的总量的比值，作为确定brca1的所述功能活性或brca2的所述功能活性的基础。
17.权利要求1所述的方法，其中所述至少一种功能活性通过流式细胞仪测量。18.权利要求1所述的方法，其中所述白细胞是培养的细胞。
技术总结
本申请涉及用于评估癌症的种系风险的方法和组合物。DNA双链断裂(DSB)修复途径中BRCA1和BRCA2及其他基因的可遗传突变提高乳腺癌、卵巢癌及其他癌症的风险。响应于DNA断裂，由这些基因编码的蛋白质彼此结合并被转运到细胞核中以形成核灶区并启动同源重组。开发了基于流式细胞术的功能变体分析(FVA)以确定BRCA1或其他DSB修复基因的变体是否破坏响应于DNA损伤的BRCA1与其蛋白质配偶体结合、p53磷酸化或者BRCA1复合物向细胞核转运。这些测定中的每一种均区分高风险BRCA1突变与低风险BRCA1对照。在这些测定下，其他DSB修复途径基因中的突变产生分子拟表型。FVA测定可以代表测序的辅助手段用于对VUS进行分类，或者可以代表用于评估乳腺癌风险的单独测量。代表用于评估乳腺癌风险的单独测量。代表用于评估乳腺癌风险的单独测量。
技术研发人员：哈里
受保护的技术使用者：阿尔伯特爱因斯坦医学院股份有限公司
技术研发日：2015.08.19
技术公布日：2021/12/14