一种基于间接法检测IgM抗体的层析试纸条的制作方法

一种基于间接法检测igm抗体的层析试纸条
技术领域
1.本发明涉及免疫学检测装置技术领域，特别涉及一种基于间接法检测igm抗体的层析试纸条。


背景技术：

2.免疫学检测一般包括间接法、捕获法、夹心法等，间接法即检测线t上包被的为病原体抗原，有色颗粒标记的为鼠抗人igm抗体。采用间接法检测igm抗体时，往往会由于样本中含有的高效价的病原体特异性igg抗体，使得样本中的igg抗体与igm抗体在检测线t处竞争抗原结合位点而导致检测结果出现假阴性。


技术实现要素：

3.为解决上述问题，本发明提供了一种基于间接法检测igm抗体的层析试纸条。
4.本发明采用以下技术方案：
5.一种基于间接法检测igm抗体的层析试纸条，包括底衬、位于所述底衬上方的从前往后顺次搭接的样品垫、标记物垫、包被膜和吸水纸，所述标记物垫上涂覆有有色颗粒标记的鼠抗人igm抗体，所述包被膜上从前往后依次设有拦截线i、检测线t和质控线c，所述拦截线i包被有高浓度抗人igg，所述检测线t上包被有病原体抗原，所述质控线c上包被有抗鼠igg。
6.进一步地，所述标记物垫的前端搭接在所述样品垫的后端下方，所述标记物垫的后端搭接在所述包被膜的前端上方，所述吸水纸的前端搭接在所述包被膜的后端上方。
7.进一步地，所述包被膜为硝酸纤维素膜。
8.进一步地，所述高浓度抗人igg的浓度为1.0-4.0mg/ml。
9.进一步地，所述高浓度抗人igg为鼠抗人igg、兔抗人igg、羊抗人igg、牛抗人igg或驴抗人igg中的至少一种。
10.进一步地，所述拦截线i的宽度为0.5-2.0mm，其与检测线t的之间的间距为0.2-0.6cm。
11.进一步地，所述有色颗粒包括胶体金颗粒、胶体硒颗粒、荧光颗粒或乳胶颗粒中的任意一种。
12.进一步地，所述标记物垫由玻璃纤维膜制成。
13.进一步地，所述样品垫由玻璃纤维膜或滤血膜制成；所述吸水纸由滤纸制成；所述底衬由pvc板或不吸水的硬质材料制成。
14.采用上述技术方案后，本发明与背景技术相比，具有如下优点：
15.本发明的层析试纸条在包被膜上设置了包被有高浓度抗人igg的拦截线i，用于结合样本中的igg抗体，防止与特异的igm抗体在检测线t处发生抗原竞争，消除igg干扰造成的假阴性问题，提高了igm抗体检测的准确性，且具有结构简单、高效方便的优点。
附图说明
16.图1为本发明层析试纸条的结构示意图；
17.图2为本发明包被膜的结构示意图。
18.附图标记说明：
19.100、底衬；200、样品垫；300、标记物垫；400、包被膜；410、拦截线i；420、检测线t；430、质控线c；500、吸水纸。
具体实施方式
20.为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
21.实施例一
22.如图1-2所示，一种基于间接法检测igm抗体的层析试纸条，包括底衬100、位于所述底衬100上方的从前往后顺次搭接的样品垫200、标记物垫300、包被膜400和吸水纸500，所述标记物垫300上涂覆有胶体金颗粒标记的鼠抗人igm抗体，所述包被膜400上从前往后依次设有拦截线i410、检测线t420和质控线c430，所述拦截线i410包被有高浓度抗人igg，所述检测线t420上包被有病原体抗原，所述质控线c430上包被有羊抗鼠igg。
23.所述标记物垫300的前端搭接在所述样品垫200的后端下方，所述标记物垫300的后端搭接在所述包被膜400的前端上方，所述吸水纸500的前端搭接在所述包被膜400的后端上方。
24.所述包被膜400为硝酸纤维素膜。所述高浓度抗人igg为羊抗人igg，其浓度为3.0mg/ml。所述拦截线i410的宽度为1.8mm，其与检测线t420的之间的间距为0.4cm。
25.所述标记物垫300由玻璃纤维膜制成。所述样品垫200由玻璃纤维膜制成；所述吸水纸500由滤纸制成。所述底衬100由pvc板制成。
26.检测时，将待测样本滴加到样品垫200上，如果待测样本中含有特异的病原体igm抗体，当待测样本移动到标记物垫300时，待测样本中的igm抗体会与有色颗粒标记的鼠抗人igm抗体结合，形成免疫复合物，接着待测样本与免疫复合物在层析作用下继续向包被膜400方向移动，当经过拦截线i410时，其中的igg抗体被吸附拦截，而免疫复合物则继续移动与检测线t420上包被的病原体抗原发生特异性结合，在检测线t420处形成一条肉眼可见的红色条带；相反，若待测样本中不含特异的病原体igm抗体，则检测线t420处无红色条带出现。
27.实施例二
28.本发明的层析试纸条在肺炎衣原体igm抗体检测项目上的应用。
29.1、层析试纸条的制备：
30.包被膜采用硝酸纤维素膜，其上的检测线t包被肺炎衣原体抗原，质控线c包被羊抗鼠igg；拦截线i包被浓度为3.0mg/ml羊抗人igg，拦截线的宽度为1.8mm，与检测线t之间的距离为0.4cm。有色颗粒为胶体金，标记鼠抗人igm抗体。检测结果中“l0”表示阴性反应；“l1-l10”表示显色强度(由弱到强)。
31.2、样本的制备：
32.(1)肺炎衣原体igg阳性样本的效价检测
33.用其他厂家的试剂对5份肺炎衣原体igg抗体强阳性且igm抗体阴性的血清样本进行确认，并编号g1～g5，再将该5份样本分别用正常人阴性血清按1：40、1：80、1：160、1：320、1：640、1：1280、1：2560、1：5120、1：10240、1：20480进行稀释，稀释后用酶免试剂进行效价检测。
34.表1样本稀释后的效价检测结果
[0035][0036]
如表1所示，结果显示肺炎衣原体igg抗体阳性效价为1：320的样本有1份、效价为1：640的样本有2份、效价为1：1280的样本有1份、效价为1：2560的样本有1份。
[0037]
(2)肺炎衣原体igm阳性样本的稀释比例
[0038]
用其他厂家试剂对8份肺炎衣原体igm抗体强阳性且igg抗体阴性血清样本进行确认，并编号m1～m8。再将该8份样本分别用正常人阴性血清按一定比例稀释至弱阳(若igg有干扰，其对弱阳血清影响较大，可导致假阴性)，稀释后样本编号为m1#～m8#，并用酶免试剂和本实施例二中制成的层析试纸条进行检测，检测结果如表2所示。
[0039]
表2样本稀释比例的确定及效价检测结果
[0040][0041]
(3)含有高浓度肺炎衣原体igg抗体的肺炎衣原体igm抗体弱阳性样本的制备
[0042]
上述肺炎衣原体igm抗体强阳性且igg抗体阴性的8份血清样本(编号m1～m8)，每份分别用肺炎衣原体igg抗体强阳性且igm抗体阴性的5份血清样本(编号g1～g5)按照样本制备(2)中的稀释比例进行稀释，稀释成40份样本，稀释后样本编号为mg1～mg40(说明：因肺炎衣原体igm抗体强阳性血清稀释比例较大，稀释后样本中所含的肺炎衣原体igg抗体效价与稀释前的效价相当)。
[0043]
3、样本检测
[0044]
用包被有抗人igg的试纸条(即实施例1中制备的试纸条)和未包被有抗人igg的试纸条分别检测不含肺炎衣原体igg抗体的肺炎衣原体igm抗体弱阳性样本(编号m1#～m8#)和含高浓度肺炎衣原体igg抗体的肺炎衣原体igm抗体弱阳性样本(编号mg1～mg40)，对比结果，验证本发明的igg去除效果。
[0045]
表3不含肺炎衣原体igg抗体的肺炎衣原体igm抗体弱阳性样本检测结果
[0046][0047]
表4含高浓度肺炎衣原体igg抗体的肺炎衣原体igm抗体弱阳性样本检测结果
[0048][0049][0050]
表3和表4的结果显示，未包被有抗人igg的试纸条，高浓度的肺炎衣原体igg抗体会对肺炎衣原体igm抗体弱阳性样本的检测结果产生干扰，使检测结果出现假阴性。而实施
例二中制备的试纸条即包被有抗人igg的试纸条，其对肺炎衣原体igm抗体弱阳性样本检测结果未产生影响，且可有效去除样本中含效价≤2560的肺炎衣原体igg抗体，从而降低样本中肺炎衣原体igg抗体对肺炎衣原体igm抗体检测的干扰，提高了igm检测的准确率。
[0051]
实施例三
[0052]
本发明的层析试纸条在弓形虫igm抗体检测项目上的应用。
[0053]
1、试纸条的制备：
[0054]
包被膜采用硝酸纤维素膜，其上的检测线t包被弓形虫抗原，质控线c包被羊抗鼠igg；拦截线i包被浓度为3.0mg/ml兔抗人igg，拦截线的宽度为1.5mm，与检测线t之间的距离为0.5cm。有色颗粒为胶体金，标记鼠抗人igm抗体。检测结果中“l0”表示阴性反应；“l1-l10”表示显色强度(由弱到强)。
[0055]
2、样本的制备：
[0056]
(1)弓形虫igg抗体阳性样本的效价检测
[0057]
用其他厂家试剂对3份弓形虫igg抗体强阳性且igm抗体阴性的血清样本进行确认，并编号g1～g3。再将该3份样本分别用正常人阴性血清按1：20、1：40、1：80、1：160、1：320、1：640、1：1280、1：2560、1：5120、1：10240进行稀释，稀释后用酶免试剂进行效价检测。
[0058]
表5样本稀释后的效价检测结果
[0059][0060]
表5的结果显示，弓形虫igg抗体阳性效价为1：160的样本有1份、效价为1：320的样本有1份、效价为1：1280的样本有1份。
[0061]
(2)弓形虫igm抗体阳性样本的稀释比例
[0062]
用外厂家试剂对6份弓形虫igm抗体强阳性且igg抗体阴性的血清样本进行确认，并编号m1～m6。再将该6份样本分别用正常人阴性血清按一定比例稀释至弱阳(若igg有干扰，其对弱阳血清影响较大，可导致假阴性)，稀释后样本编号为m1#～m6#，并用酶免试剂和本实施例中制成的试纸条进行检测。
[0063]
表6样本稀释比例的确定及效价检测结果
[0064][0065]
上表6的结果显示，弓形虫igm抗体强阳性样本m1～m6分别按1：200、1：256、1：160、1：128、1：200、1：80稀释为m1#～m6#弓形虫igm抗体弱阳性样本。
[0066]
(3)含有高浓度弓形虫igg抗体的弓形虫igm抗体弱阳性样本的制备
[0067]
上述弓形虫igm抗体强阳性且igg抗体阴性的6份血清样本(编号m1～m6)，每份分别用弓形虫igg抗体强阳性且igm抗体阴性的3份血清样本(编号g1～g3)按照样本制备(2)中确定的稀释比例进行稀释，稀释成18份样本，稀释后样本编号为mg1～mg18(说明：因弓形虫igm抗体强阳性血清稀释比例较大，稀释后样本中所含的弓形虫igg抗体效价与稀释前的效价相当)。
[0068]
3、样本检测
[0069]
用包被有抗人igg的试纸条(即实施例2中制备的试纸条)和未包被有抗人igg的试纸条分别检测不含弓形虫igg抗体的弓形虫igm抗体弱阳性样本(编号m1#～m6#)和含高浓度弓形虫igg抗体的弓形虫igm抗体弱阳性样本(编号mg1～mg18)，对比结果，验证本发明的igg去除效果。
[0070]
表7不含弓形虫igg抗体的弓形虫igm抗体弱阳性样本检测结果
[0071][0072][0073]
表8含高浓度弓形虫igg抗体的弓形虫igm抗体弱阳性样本检测结果
[0074][0075]
如表7和表8所示的结果显示，未包被有抗人igg的试纸条，高浓度的弓形虫igg抗体会对弓形虫igm抗体弱阳性样本的检测结果产生干扰，使检测结果出现假阴性。而实施例三中制备的试纸条即包被有抗人igg的试纸条，其对弓形虫igm抗体弱阳性样本检测结果未产生影响，且可有效去除样本中含效价≤1280的弓形虫igg抗体，从而降低样本中弓形虫igg抗体对弓形虫igm抗体检测的干扰，提高了igm检测的准确率。
[0076]
以上实施例二和实施例三的结果显示，对于含有特异igg抗体干扰的样本，本发明的试纸条可以有效降低igg的干扰作用，让假阴性的检测结果恢复正常值，同时对于无igg干扰的样本，并没有影响其目标抗体igm的正常检测结果。
[0077]
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，
任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求的保护范围为准。