一种制剂中聚乙烯吡咯烷酮含量的HPLC检测方法与流程

本发明属于分析化学领域，具体涉及一种利用hplc检测制剂中聚乙烯吡咯烷酮含量的方法。

背景技术：

1、聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone，pvp)，又称聚维酮，作为药用辅料具有粘合、增稠、助悬、助溶、分散、成膜等特性，广泛应用于吸入制剂、软膏剂、乳状注射剂、凝胶剂、栓剂等。pvp是一种水溶性高聚物，有多种规格，主要区别在于它们的分子量和粘度，以k值表示不同分子量的规格类型，比如pvp k25近似分子量为30000。

2、采用pvp作辅料的药物已有上百种。仿制药的开发及一致性评价以及生物等效性实验的豁免均要求与原研质量和疗效一致，为了达到与原研质量疗效一致，逆向工程技术应运而生。pvp作为药物制剂中常用的辅料，如何在制剂处方中快速检测出其含量对仿制药开发、一致性评价等显得尤为重要。

3、目前，对于pvp等大分子物质的液相检测方法，普遍采用渗透色谱或分子排阻色谱，如中国发明专利申请cn112684031a(公开日2021年4月20日)披露了一种利用分子排阻色谱来检测制剂(如琥珀酸亚铁片)中pvp k30的方法。但这些方法存在分离度差、峰形不佳、灵敏度低、响应值低等缺点。

4、中国发明专利申请cn106404952a(2016年8月31日)公开了一种以n-氧化石松碱m键合硅胶为固定相，检测溴芬酸钠滴眼液中pvp k30的测定方法。但是该方法必须采用特殊的固定相。中国发明专利申请cn107505424a(公开日2017年12月22日)披露了一种聚维酮碘口服液中pvp的检测方法，该方法采用的是乙腈-水等度洗脱的方式。但是发明人研究发现将该方法转移应用于pvp浓度较低的制剂(比如吸入制剂、特定注射剂、混悬液等)，尤其是浓度低至0.01％的pvp的检测时，pvp色谱峰处鼓包现象明显甚至检测不出pvp色谱峰，同时还易受样品中其它辅料峰的干扰。中国发明专利申请cn110887901a(公开日2020年年月17日)披露了一种基于高效液相法检测血液透析器中n-甲基吡咯烷酮、pvp k30残留的方法。该方法采用乙腈和缓冲液等度洗脱，其中所述缓冲液是磷酸二氢钾、磷酸氢二钾和磷酸的水溶液。同样的，将该方法转移应用于pvp浓度较低的制剂(比如吸入制剂、特定注射剂、混悬液等)，也存在样品中其它辅料峰干扰的问题。

5、因此，开发一种应用性强、适用性广、可行性高的制剂中微量药用辅料pvp液相检测方法是很迫切且很有必要的。

技术实现思路

1、为了克服现有技术的不足，本发明提供一种制剂中pvp含量的hplc检测方法。该方法特别适用于pvp含量在ppm级的制剂，如吸入制剂、注射剂等。

2、为了实现上述发明目的，本发明采用了如下技术方案：

3、一种制剂中pvp含量的检测方法，所述检测方法基于高效液相色谱法，包括色谱条件的建立：

4、色谱柱：填充耐高比例水相的c18键合硅胶的色谱柱；

5、流动相：由流动相a和流动相b组成，其中所述流动相a为nacl-磷酸-水的混合溶液，nacl的摩尔浓度为0.05～0.15m，磷酸的质量百分比浓度为0.05％～0.2％；所述流动相b为乙腈；0→35min，流动相a和流动相b按照如下程序进行梯度洗脱：

6、0→15min，流动相a的体积百分比为97％～99％，余量为流动相b，

7、15→25min，流动相a的体积百分比匀速地减少到5％～20％，余量为流动相b，

8、25→30min，流动相a和流动相b的体积百分比保持不变，

9、30→31min，流动相a的体积百分比迅速提升至97％～99％，余量为流动相b，

10、31→35min，流动相a和流动相b的体积百分比保持不变；

11、流动相流速：0.5～0.8ml/min；

12、柱温：20～30℃；

13、检测波长：200～210nm；

14、进样量：20～100μl。

15、优选地，所述色谱柱为waters atlantis t3系列色谱柱。

16、更优选地，所述色谱柱为waters atlantis t3色谱柱，规格为250mm×4.6mm，5μm。

17、优选地，所述流动相a中，nacl的摩尔浓度为0.05～0.1m。

18、更优选地，所述流动相a中，nacl的摩尔浓度为0.1m。

19、优选地，所述流动相a中，磷酸的质量百分比浓度为0.1％～0.2％。

20、更优选地，所述流动相a中，磷酸的质量百分比浓度为0.1％。

21、优选地，所述梯度洗脱程序中，15→25min时，流动相a的体积百分比匀速地减少到10％，余量为流动相b。

22、作为一个优选的实施方案，所述梯度洗脱程序为：

23、0→15min，流动相a的体积百分比为98.5％，余量为流动相b，

24、15→25min，流动相a的体积百分比由98.5％匀速地减少到10％，余量为流动相b，

25、25→30min，流动相a的体积百分比保持为10％，余量为流动相b，

26、30→31min，流动相a的体积百分比由10％迅速提升至98.5％，余量为流动相b，

27、31→35min，流动相a的体积百分比保持为98.5％，余量为流动相b。

28、优选地，所述流动相流速为0.8ml/min。

29、优选地，所述柱温为30℃。

30、优选地，所述检测波长为200nm。

31、优选地，所述进样量为100μl。

32、优选地，所述pvp选自pvp k25、pvp k30、pvp k17、pvp k12或pvp k90；更优选为pvp k25。

33、优选地，所述检测方法还包括对照品溶液的制备，具体操作为：

34、称取pvp对照品适量，置量瓶中，加纯化水溶解稀释成规定浓度的溶液。

35、作为一个优选的实施方案，本发明提供一种硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂中pvp k25含量的检测方法，包括：

36、i.色谱条件的建立：

37、色谱柱：waters atlantis t3，250mm×4.6mm,5μm；

38、流动相：流动相a为0.1m nacl-0.1％磷酸-水，流动相b为乙腈；0→35min，流动相a和流动相b按照如下程序进行梯度洗脱：

39、0→15min，流动相a的体积百分比为97％～99％，余量为流动相b，

40、15→25min，流动相a的体积百分比匀速地减少到5％～20％，余量为流动相b，

41、25→30min，流动相a和流动相b的体积百分比保持不变，

42、30→31min，流动相a的体积百分比迅速提升至97％～99％，余量为流动相b，

43、31→35min，流动相a和流动相b的体积百分比保持不变；

44、流动相流速：0.8ml/min；

45、柱温：30℃；

46、检测波长：200nm；

47、进样量：100μl；

48、ii.供试品溶液的制备

49、取布硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂1罐，将样品罐倒置，采用尖头锥在罐底部扎一小孔，迅速正置在装有30ml纯化水作为接收液的烧杯中，液面保证罐底浸入25mm以上，待逸出的药液充分吸收后，将样品罐缓慢提出液面，在烧杯壁上稍靠2秒，使样品罐上残留的液体流回烧杯，将样品罐割罐后用接收液清洗罐内壁，清洗液转移至50ml量瓶中，用少量纯化水清洗样品罐内壁以及与接收液接触的罐外壁、烧杯数遍，清洗液均收集至量瓶中，加入0.1m的naoh溶液2ml，用水稀释定容至刻度，超声1～3min，用0.45μm滤膜过液，取续滤液，即得供试品溶液；

50、iii.对照品溶液的制备：

51、称取pvp k25对照品适量，置量瓶中，加纯化水溶解稀释制成每1ml含pvp k25为3.6±1μg的溶液；

52、iv.测定

53、精密吸取对照品溶液和供试品溶液各100μl,分别注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，以外标法计算供试品溶液中pvp k25的含量。

54、作为另一个优选的实施方案，本发明提供一种丙泊酚乳状注射液中pvp k12含量的检测方法，包括：

55、i.色谱条件的建立：

56、色谱柱：waters atlantis t3，250mm×4.6mm,5μm；

57、流动相：流动相a为0.1m nacl-0.1％磷酸-水，流动相b为乙腈；0→35min，流动相a和流动相b按照如下程序进行梯度洗脱：

58、0→15min，流动相a的体积百分比为97％～99％，余量为流动相b，

59、15→25min，流动相a的体积百分比匀速地减少到5％～20％，余量为流动相b，

60、25→30min，流动相a和流动相b的体积百分比保持不变，

61、30→31min，流动相a的体积百分比迅速提升至97％～99％，余量为流动相b，

62、31→35min，流动相a和流动相b的体积百分比保持不变；

63、流动相流速：0.8ml/min；

64、柱温：30℃；

65、检测波长：200nm；

66、进样量：100μl；

67、ii.供试品溶液的制备：

68、取本品适量，精密称定，置量瓶中，加纯化水稀释至刻度，缓慢振摇2分钟，制成每1ml含pvp k12为9.0±3.0μg的溶液，0.45μm过滤，取续滤液，即得；

69、iii.对照品溶液的制备：

70、精密称取pvp k12对照品适量，置量瓶中，加纯化水溶解稀释制成每1ml含pvp k12为9.0±3.0μg的溶液；

71、iv.测定

72、精密吸取对照品溶液和供试品溶液各100μl，分别注入高效液相色谱仪中，记录色谱图，以外标法计算供试品溶液中pvpk12的含量。

73、优选地，上述硫酸沙丁胺醇吸入气雾剂中pvp k25含量的检测方法或丙泊酚乳状注射液中pvp k12含量的检测方法中，梯度洗脱程序为：

74、0→15min，流动相a的体积百分比为98.5％，余量为流动相b，

75、15→25min，流动相a的体积百分比由98.5％匀速地减少到10％，余量为流动相b，

76、25→30min，流动相a的体积百分比保持为10％，余量为流动相b，

77、30→31min，流动相a的体积百分比由10％迅速提升至98.5％，余量为流动相b，

78、31→35min，流动相a的体积百分比保持为98.5％，余量为流动相b。

79、本发明提供的基于hplc法测定制剂中pvp含量的方法，通过选用耐高比例水相的c18色谱柱及梯度洗脱条件，可以快速、准确测定出制剂中浓度低至0.01％的pvp的含量，具有操作简单、出峰时间快、准确度高，且pvp色谱峰与其他杂质峰的分离度良好，能大大节约人工、时间和溶剂等成本，从而可以快速高效地完成pvp在药物制剂中的质量控制工作。