用于定量检测人血液中GDF15含量的试纸条及其制备方法、检测卡及试剂盒与流程

本申请涉及生物医药，尤其涉及一种用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条及其制备方法、检测卡及试剂盒。

背景技术：

1、生长分化因子15(gdf-15)，又称为tgf-pl、mic-1、pdf、plab和ptgfb，是转化生长因子β超家族中的一员，在调节损伤组织和疾病过程中的炎症和凋亡途径中起作用。在生理状态下唯一能大量表达gdf15的正常组织是胎盘。gdf15很容易在血液中检测到，其浓度随年龄而改变。事实上，血液中gdf15浓度在很多病理条件下都会增加，例如肿瘤、炎症、急慢性疾病等。

2、gdf15可用于肝癌的早期诊断，以及心脑血管疾病的诊断，此外，当身体经历急性或长期的应激时会激发gdf15的活性，影响人体代谢，造成过度肥胖或体重不足，检测gdf15可有助干机体代谢监测、治疗及相关药物开发。目前，国内gdf15的检测主要采用进口试剂和免疫组化试剂，国内开发的试剂盒多采用化学发光方法和酶联免疫法，这些方法检测步骤多，检测时间长，同时，引进的影响因素较多，检测结果易造成偏差，检测精度不高。

技术实现思路

1、本申请实施例所要解决的技术问题是相关技术中，gdf15检测时间长以及检测精度低的技术问题。

2、为了解决上述技术问题，本申请实施例提供一种用于定量检测定量检测人血液中gdf15含量gdf15含量的试纸条的制备方法，采用了如下所述的技术方案：

3、配制荧光微球标记抗体溶液，将所述荧光微球标记抗体溶液喷涂于结合垫上，其中，所述荧光微粒标记抗体溶液包括gdf15标记抗体和羊抗兔igg标记抗体；

4、制备gdf15包被抗体溶液和兔igg包被抗体溶液；

5、在硝酸纤维素膜上设置间隔平行的第一划膜线和第二划膜线，将所述gdf15包被抗体溶液喷涂至硝酸纤维素膜上的第一划膜线，形成检测线，将所述兔igg包被抗体溶液喷涂至硝酸纤维素膜上的第二划膜线，形成质控线，其中，所述检测线包被gdf15抗体，所述质控线包被兔igg抗体；

6、将预处理的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次接触式平铺在一底板上，制得检测试纸；

7、将检测试纸按照预设大小进行切割，得到试纸条。

8、进一步的，所述配制荧光微球标记抗体溶液的步骤包括：

9、取荧光微球加入装有2-吗啉乙磺酸缓冲溶液的离心管中，超声至混合均匀，得到荧光微球混合液；

10、量取活化液，加入荧光微球混合液中，超声至分散均匀，得到活化混合液；

11、对活化混合液进行离心，并去上清，留取沉淀；

12、往沉淀中加入2-吗啉乙磺酸缓冲溶液，依次进行旋涡超声后，加入gdf15标记抗体进行旋转反应，静止后，加入羊抗兔igg标记抗体，得到标记抗体反应物；

13、向标记抗体反应物加入牛血清蛋白溶液进行封闭，并进行离心；

14、去上清后加入三羟甲基氨基甲烷缓冲液，并进行超声和离心，并重复此步骤一次；

15、去上清后加入微球复溶液，依次进行超声和离心，去沉淀得到荧光微粒标记抗体溶液。

16、进一步的，所述制备gdf15包被抗体溶液和兔igg包被抗体溶液的步骤包括：

17、配制包被液；

18、使用包被液稀释gdf15包被抗体，得到gdf15包被抗体溶液；

19、使用包被液稀释兔igg包被抗体，得到兔igg包被抗体溶液。

20、进一步的，所述gdf15标记抗体和所述羊抗兔igg标记抗体在所述结合垫上的终浓度均为0.3mg/ml。

21、进一步的，所述gdf15包被抗体在所述硝酸纤维素膜上的终浓度为1mg/ml，所述兔igg包被体在所述硝酸纤维素膜上的终浓度均为0.5mg/ml。

22、为了解决上述技术问题，本申请实施例还提供一种用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条，该试纸条采用如上所述的试纸条制备方法制备。

23、为了解决上述技术问题，本申请实施例还提供一种用于定量检测人血液中gdf15含量的检测卡，采用了如下所述的技术方案：

24、该检测卡包括试纸壳和采用如上所述的试纸条制备方法制得的试纸条，所述试纸条安装于所述试纸壳内。

25、为了解决上述技术问题，本申请实施例还提供一种用于定量检测人血液中gdf15含量的试剂盒，采用了如下所述的技术方案：

26、包括样品稀释液、gdf15检测芯片以及采用如上所述的检测卡，其中：

27、所述样品稀释液用于稀释待测样本；

28、所述检测卡用于检测待测样本中的gdf15含量；

29、所述gdf15检测芯片用于存储试剂标准曲线信息，以读取待测样本的检测结果。

30、进一步的，所述待测样本的类型包括全血样本、血浆样本以及血清样本。

31、进一步的，所述全血样本的采集方法如下：

32、采用含有肝素锂、edta-k2或柠檬酸钠抗凝剂的抗凝管采集受检者静脉血，并将采集到的静脉血摇匀后得到；

33、所述血浆样本的采集方法如下：

34、采用含有肝素锂、edta-k2或柠檬酸钠抗凝剂的抗凝管采集受检者静脉血，并分离得到血浆；

35、所述血清样本的采集方法如下：

36、采用血清管或含有促凝剂的快速血清管采集受检者静脉血，并分离得到血清。

37、与现有技术相比，本申请实施例主要有以下有益效果：

38、本申请提供的试纸条，基于荧光定量免疫层析技术，通过待测样本依次与结合垫上的荧光微粒标记抗体溶液中的gdf15标记抗体和羊抗兔igg标记抗体，以及硝酸纤维素膜上检测线的gdf15包被抗体和质控线的兔igg抗体反应，形成“抗体-抗原-荧光抗体”复合物，可以gdf15检测的检测速度，缩短检测时间，同时提高检测灵敏度、增强特异性，进一步提高检测的精度，此外，操作简便、成本低，应用前景广。

技术特征：

1.一种用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：

2.根据权利要求1所述的用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条的制备方法，其特征在于，所述配制荧光微球标记抗体溶液的步骤包括：

3.根据权利要求1所述的用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条的制备方法，其特征在于，所述制备gdf15包被抗体溶液和兔igg包被抗体溶液的步骤包括：

4.根据权利要求1所述的用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条的制备方法，其特征在于，所述gdf15标记抗体和所述羊抗兔igg标记抗体在所述结合垫上的终浓度均为0.3mg/ml。

5.根据权利要求3所述的用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条的制备方法，其特征在于，所述gdf15包被抗体在所述硝酸纤维素膜上的终浓度为1mg/ml，所述兔igg包被体在所述硝酸纤维素膜上的终浓度均为0.5mg/ml。

6.一种用于定量检测人血液中gdf15含量的试纸条，其特征在于，采用如权利要求1至5中任一项所述的试纸条制备方法制备。

7.一种用于定量检测人血液中gdf15含量的检测卡，其特征在于，包括试纸壳和如权利要求6中所述的试纸条，所述试纸条安装于所述试纸壳内。

8.一种用于定量检测人血液中gdf15含量的试剂盒，其特征在于，包括样品稀释液、gdf15检测芯片以及采用如权利要求7所述的检测卡，其中：

9.根据权利要求8所述的用于定量检测人血液中gdf15含量的试剂盒，其特征在于，所述待测样本的类型包括全血样本、血浆样本以及血清样本。

10.根据权利要求9所述的用于定量检测人血液中gdf15含量的试剂盒，其特征在于，所述全血样本的采集方法如下：

技术总结
本申请实施例属于生物医药技术领域，涉及一种用于定量检测人血液中GDF15含量的试纸条及其制备方法、检测卡及试剂盒，包括配制荧光微球标记抗体溶液，将荧光微球标记抗体溶液喷涂于结合垫上，其中，荧光微粒标记抗体溶液包括GDF15标记抗体和羊抗兔IgG标记抗体；制备GDF15包被抗体溶液和兔IgG包被抗体溶液，将GDF15包被抗体溶液喷涂至硝酸纤维素膜上的第一划膜线，形成检测线，将兔IgG包被抗体溶液喷涂至硝酸纤维素膜上的第二划膜线，形成质控线；将预处理的样品垫、结合垫、硝酸纤维素膜以及吸水垫依次接触式平铺在一底板上，制得检测试纸；将检测试纸按照预设大小进行切割，得到试纸条。本申请可以缩短检测时间，提高检测的精度。

技术研发人员：齐文闯,蒋析文,刘双,潘秀华,徐鸿,李俊玉
受保护的技术使用者：广州达安基因股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15