一种甲芪肝纤颗粒的检测方法与流程

本发明涉及中药的检测方法，尤其涉及一种甲芪肝纤颗粒的检测方法。

背景技术：

1、甲芪肝纤颗粒为九芝堂股份有限公司生产的独家中成药品种[标准号: ws3-737(z-203)-2006(z)-2007]，由黄芪、防己、茯苓、厚朴、延胡索、赤芍、牛膝、桃仁、莪术、鳖甲、土鳖虫等11味中药材组成，具有疏肝活血、健脾祛湿的功效。桃仁为本品处方中的臣药，苦杏仁苷为其主要有效成分，现代药理学研究表明其具有神经保护、抗纤维化、抗肿瘤等作用。但本品该现行质量标准中，未建立桃仁的相关质控项目，存在一定的临床用药安全隐患，不能满足现有中药制剂标准日益严格的需求。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种甲芪肝纤颗粒的检测方法，提高甲芪肝纤颗粒质量标准的可控性，进一步确保产品内在质量和疗效。本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

2、一种甲芪肝纤颗粒的检测方法，所述甲芪肝纤颗粒的制备原料包括黄芪、防己、茯苓、厚朴、延胡索、赤芍、牛膝、桃仁、莪术、鳖甲、土鳖虫，其特征在于，采用薄层色谱法鉴定桃仁的有效成分，采用高效液相色谱法检测苦杏仁苷含量。

3、其中，所述的薄层色谱层析法鉴别桃仁的有效成分时，鉴定包括以下步骤：

4、(1.1)制备供试品溶液

5、取甲芪肝纤颗粒，研细，加甲醇超声处理，滤过，滤液蒸干，残渣加温水使溶解，放冷，通过d101型大孔吸附树脂柱，加水洗脱，弃去水液，用氨试液洗脱，弃去氨液，再用水洗脱，弃去水液，继用乙醇洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇，使溶解，作为供试品溶液；

6、(1.2)制备对照药材溶液

7、称取桃仁对照药材加水煎煮，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，制成桃仁对照药材溶液；

8、(1.3)制备对照品溶液

9、取苦杏仁苷对照品适量，加甲醇制成苦杏仁苷对照品溶液；

10、(1.4)制备阴性对照溶液

11、取缺桃仁的阴性样品，同步骤(1.1)方法制成缺桃仁阴性对照溶液；

12、(1.5)薄层色谱鉴定

13、照薄层色谱法(中国药典2020年版四部通则0502)试验，吸取上述供试品溶液、桃仁对照药材溶液、苦杏仁苷对照品溶液、缺桃仁阴性对照溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶g 薄层板，以体积比为(14-16):(38-42):(28-32):(9-11)的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水在 5-10℃下放置10-14小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；

14、(1.6)结果分析：供试品色谱中，在与桃仁对照药材和苦杏仁苷对照品色谱相应位置上，判断是否显相同颜色的荧光斑点。

15、优选地，所述薄层色谱法鉴别桃仁的步骤如下：

16、(2.1)制备供试品溶液

17、称取甲芪肝纤颗粒4-8g，研细，加甲醇10-20ml，超声处理15-25分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加温水4-8ml使溶解，放冷﹐通过d101型大孔吸附树脂柱，加15-25ml水洗脱，弃去水液，用氨试液(4→100)25-50ml洗脱，弃去氨液，再用水8-15ml洗脱，弃去水液，继用体积分数为15％-25％的乙醇25-50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇l-2ml使溶解，作为供试品溶液；

18、(2.2)制备对照药材溶液

19、称取桃仁对照药材1-1.5g，加水40-75ml，煎煮25-40分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1-2ml使溶解，作为对照药材溶液；

20、(2.3)制备苦杏仁苷对照品溶液

21、取苦杏仁苷对照品适量，加甲醇制成每lml含2mg的对照品溶液；

22、(2.4)制备阴性对照溶液

23、取缺桃仁的阴性样品5g，同步骤(2.1)的方法制成缺桃仁阴性对照溶液；

24、(2.5)薄层色谱鉴定

25、照薄层色谱法(中国药典2020年版四部通则0502)试验，分别吸取所述的供试品溶液、桃仁对照药材溶液、苦杏仁苷对照品溶液、缺桃仁阴性对照溶液各5-10μl，分别点于同一硅胶g薄层板，以体积比为(14-16):(38-42):(28-32):(9-11)的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇 -水在5-10℃下放置10-14小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；

26、(2.6)结果分析：供试品色谱中，在与桃仁对照药材和苦杏仁苷对照品色谱相应位置上，判断是否显相同颜色的荧光斑点。

27、进一步优选的，所述薄层色谱法鉴别桃仁的步骤如下：

28、(3.1)制备供试品溶液

29、称取甲芪肝纤颗粒5g，研细，加甲醇15ml，超声处理20分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加温水5ml使溶解，放冷﹐通过d101型大孔吸附树脂柱(内径1.5cm，长8cm)，加20ml 水洗脱，弃去水液，用氨试液(4→100)30ml洗脱,弃去氨液，再用水10ml洗脱，弃去水液，继用体积分数为20％乙醇30ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇lml使溶解，作为供试品溶液；

30、(3.2)制备对照药材溶液

31、称取桃仁对照药材1g，加水50ml，煎煮30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml 使溶解，作为对照药材溶液；

32、(3.3)制备苦杏仁苷对照品溶液

33、取苦杏仁苷对照品适量，加甲醇制成每lml含2mg的对照品溶液；

34、(3.4)制备阴性对照溶液

35、取缺桃仁的阴性样品5g，同步骤(3.1)的方法制成缺桃仁阴性对照溶液；

36、(3.5)薄层色谱鉴定

37、照薄层色谱法(中国药典2020年版四部通则0502)试验，分别吸取所述的供试品溶液和缺桃仁阴性对照溶液各5μl，桃仁对照药材溶液和苦杏仁苷对照品溶液各10μl，分别点于同一硅胶g薄层板，以体积比为15:40:30:10的三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水在10℃下放置12小时的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃加热至斑点显色清晰；

38、(3.6)结果分析：供试品色谱中，在与桃仁对照药材和苦杏仁苷对照品色谱相应位置上，判断是否显相同颜色的荧光斑点。

39、所述高效液相色谱法测定苦杏仁苷含量的步骤如下：

40、(4.1)对照品溶液的制备：

41、精密称定苦杏仁苷对照品适量，加甲醇制成对照品溶液；

42、(4.2)供试品溶液的制备：

43、取甲芪肝纤颗粒，研细，精密称定，置容量瓶或锥形瓶中，加入稀乙醇，密塞，称定质量，超声处理，放冷，再称定重量，用相应溶剂补足损失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液；

44、(4.3)阴性对照溶液的制备：

45、取缺桃仁的阴性对照样品,同步骤(4.2)制备方法制得阴性对照溶液。

46、(4.4)hplc检测：

47、分别吸取步骤(4.1)、(4.2)和(4.3)所得的对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，分别注入高效液相色谱仪中进行测定；其中，色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(体积比为18-22:82-78)为流动相；等度洗脱，检测波长为200～220nm；流速： 0.8-1.2ml/min，进样量5-15μl，柱温：30-35℃。

48、优选的，所述步骤(4.1)对照品溶液的制备按照下述方法进行：

49、精密称取苦杏仁苷对照品适量，置于棕色量瓶中，加甲醇溶解，制成质量浓度为0.50mg/ml-0.60mg/ml的对照品储备液；精密量取上述对照品储备液10m，置于50ml棕色量瓶中，加甲醇稀释定容并摇匀，制成质量浓度为0.10mg/ml-0.12mg/ml的对照品溶液。

50、优选的，所述步骤(4.2)供试品溶液的制备按照下述方法进行：

51、取甲芪肝纤颗粒1g，研细，精密称定，置锥形瓶中，精密加入体积分数为45％-55％的甲醇25ml，密塞，称定质量，超声处理(功率700w，频率40khz)40-50分钟，放冷至室温，再称定重量，用相应溶剂补足损失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

52、优选的，所述步骤(4.4)中色谱条件中，以甲醇-水(体积比为20:80)为流动相；等度洗脱，检测波长为210nm；流速：1.0ml/min，进样量10μl，柱温：35℃。

53、本发明有益效果：本发明技术方案进一步完善了对甲芪肝纤颗粒的检测，所采用的薄层鉴别斑点清晰，分离度较好，阴性无干扰；含量测定方法精密度、稳定性、重复性良好，提高了甲芪肝纤颗粒质量标准的可控性，进一步确保产品内在质量和疗效。

54、以下将结合实施例，对本发明进行较为详细的说明。