一种硫酸特布他林注射液及有关物质的检测方法与流程

1.本发明涉及药品检测方法技术领域，具体涉及一种硫酸特布他林注射液及有关物质的检测方法。


背景技术：

2.硫酸特布他林，英文名为terbutaline sulfate，化学名称为(
±
)α-[(叔丁氨基)甲基]-3,5-二羟基苯甲醇硫酸盐(2:1)，结构式如下：
[0003][0004]
硫酸特布他林是一种肾上腺素能激动剂，可选择性激动β2受体，舒张支气管平滑肌、抑制内源性致痉挛物质的释放及内源性介质引起的水肿，提高支气管粘膜纤毛上皮廓清能力，也可舒张子宫平滑肌，主要用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎和其它伴有支气管痉挛的肺部疾病，也可用于预防早产和胎儿窒息，具有选择性高、副作用少等特点。
[0005]
在硫酸特布他林原料药的生产过程中，易引入起始物料杂质、工艺杂质、中间体杂质、降解杂质等，在中国药典(cp2020)、欧洲药典(ep10.1)、美国药典(usp43)等中分别记录了杂质检测方法(如表1所示)，并制定了对杂质a、b、c、d中的部分或全部杂质的限度标准，以进行质量控制。更进一步的，将硫酸特布他林制成注射液。发明人在实验研究中首次发现，在其制备过程及储存过程中，注射液不稳定，易氧化产生杂质f，影响注射液质量。杂质a、b、c、d、f结构如下：
[0006][0007]
目前，对于硫酸特布他林注射液剂型，由于杂质a、d为原料生产的工艺杂质，故只需监测在制剂制备和储存过程中降解杂质b、c、f含量的变化。各国药典中仅有美国药典(usp43)对其质量标准和检测方法进行了描述。质量标准包括鉴定、细胞内毒素检测、ph和
含量，含量检测方法如表1所示，但并未包括有关物质检测方法及其限度标准。
[0008]
表1硫酸特布他林含量/杂质检测方法
[0009][0010]
从表1可知，现有的cp、ep、usp方法中，并未提供一种可同时检测硫酸特布他林注射液及降解杂质b、c、f的检测方法，以便于更佳地质控硫酸特布他林注射液，这是本领域技术人员尚未解决的技术难题。
[0011]
因此，开发一种能解决上述技术问题的硫酸特布他林注射液及有关物质的检测方法是非常必要的。


技术实现要素：

[0012]
本发明的目的是克服现有技术的不足而提供一种硫酸特布他林注射液及有关物质的检测方法，能够同时检出降解杂质b、c、f，并制定有关物质限度标准，从而提高对于硫酸特布他林注射液质量的控制。
[0013]
本发明是通过以下技术方案予以实现的：
[0014]
一种硫酸特布他林注射液及有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法进行检测，检测条件包括：
[0015]
流动相：由流动相a和流动相b组成，其中流动相a为包含3.75～4.31g/l己烷磺酸钠与1.25～1.57g/l硫酸钠的甲酸铵-甲酸缓冲液，ph为3.0
±
0.1；流动相b为甲醇；流动相a与流动相b的混合体积比例为80：20；
[0016]
所述有关物质至少包括杂质c，所述杂质c的结构为：
[0017][0018]
所述硫酸特布他林注射液的制备工艺如下：在适量注射用水中加入处方量的硫酸
特布他林(0.05％，w/v)和氯化钠(0.89％，w/v)，加入盐酸调节ph至3.0～4.5，搅拌溶解完全后定容，再以0.45μm滤芯过滤，灌装，121℃灭菌，制得规格为0.5mg:1ml的硫酸特布他林注射液。
[0019]
优选地，所述有关物质还包括杂质b和杂质f中的至少一种，所述杂质b、f的结构为：
[0020][0021]
优选地，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱。
[0022]
优选地，所述流动相a中甲酸铵浓度为0.049～0.051mol/l。
[0023]
优选地，柱温为30～40℃。
[0024]
优选地，所述流动相的流速为0.8～1.2ml/min。
[0025]
优选地，进样体积为50μl。
[0026]
优选地，检测波长为276nm。
[0027]
本发明检测方法中，还包括其他常规步骤：供试品溶液、对照溶液、对照品溶液的配制，供试品的检测。
[0028]
除此之外，本发明检测方法中，还包括系统适用性溶液的配制，等。
[0029]
本发明还涉及一种同时检测三种化合物的方法，三种化合物的结构如下：
[0030][0031]
采用高效液相色谱进行检测，检测条件包括：
[0032]
流动相：由流动相a和流动相b组成，其中流动相a为包含3.75～4.31g/l己烷磺酸钠与1.25～1.57g/l硫酸钠的甲酸铵-甲酸缓冲液，ph为3.0
±
0.1；流动相b为甲醇；流动相a与流动相b的混合体积比例为80：20。
[0033]
优选地，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱。
[0034]
优选地，所述流动相a中甲酸铵浓度为0.049～0.051mol/l。
[0035]
优选地，柱温为30～40℃。
[0036]
优选地，所述流动相的流速为0.8～1.2ml/min。
[0037]
优选地，进样体积为50μl。
[0038]
优选地，检测波长为276nm。
[0039]
更优选地，所述方法中，色谱柱采用十八烷基硅烷键合硅胶柱，所述流动相a中甲酸铵浓度为0.049～0.051mol/l，柱温为30～40℃，所述流动相的流速为0.8～1.2ml/min，进样体积为50μl，检测波长为276nm。
[0040]
相比于现有技术，本发明提供的硫酸特布他林注射液及有关物质的检测方法，有益效果在于：
[0041]
①
本发明的硫酸特布他林注射液及有关物质的检测方法，采用己烷磺酸钠与硫酸钠的甲酸铵-甲酸缓缓冲液为流动相a，甲醇为流动相b，并将流动相a、流动相b以体积比80:20混合形成流动相，可同时检测制剂降解杂质b、c、f，各杂质分离度高，且该检测方法耐用性良好。
[0042]
②
本发明通过优化现有技术中的流动相，实现对于原料药和制剂降解杂质的同时检测，并制定注射液有关物质限度标准：有关物质、主峰之间分离度＞2，杂质b、c、f≤0.5％，其他单杂≤0.5％，总杂质≤2.0％，从而提高对于硫酸特布他林注射液质量的控制。
附图说明
[0043]
图1为实施例1系统适用性溶液的液相色谱图。
[0044]
图2-1为实施例2自制硫酸特布他林注射液有关物质检测结果。
[0045]
图2-2为图2-1的局部放大图。
[0046]
图3-1为对比例1系统适用性溶液的液相色谱图。
[0047]
图3-2为图3-1的局部放大图。
[0048]
图4为对比例2系统适用性溶液的液相色谱图。
[0049]
图5为对比例3系统适用性溶液的液相色谱图。
具体实施方式
[0050]
下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
[0051]
本发明实施例及对比例所用的仪器、试剂、对照品的型号、厂家信息如下：
[0052]
1、仪器：
[0053]
安捷伦1260高效液相色谱仪
[0054]
2、试剂：
[0055]
己烷磺酸钠(离子对试剂，色谱纯，国药集团)
[0056]
硫酸钠(分析纯，国药集团)
[0057]
甲酸铵(分析纯，上海凌峰化学试剂有限公司)
[0058]
甲酸(分析纯，国药集团)
[0059]
甲醇(色谱纯，tedia)
[0060]
3、对照品：
[0061]
标准品：硫酸特布他林(纯度99.8％，中国食品药品检定研究院)
[0062]
杂质b(纯度98.1％，trc)
[0063]
杂质c(纯度100.0％，ep)
[0064]
杂质f(纯度98.7％，tlc)
[0065]
实施例1
[0066]
高效液相色谱法检测硫酸特布他林注射液及有关物质检测的系统适用性试验，试验条件为：
[0067]
色谱柱：agilent zorbax eclipse plμs-c18(250
×
4.6mm，5μm)；
[0068]
流动相：取己烷磺酸钠4.08g、硫酸钠1.41g及甲酸铵3.15g，置1000ml量瓶中，加水约960ml，加甲酸(约8ml)调节ph值至3.0，用水稀释至刻度，摇晃至完全溶解，即为流动相a。取800ml流动相a与200ml甲醇(流动相b)，混匀；
[0069]
检测波长：276nm；
[0070]
柱温：30℃；
[0071]
流速：1.0ml/min；
[0072]
进样体积：50μl；
[0073]
系统适用性溶液：取硫酸特布他林标准品及杂质b、c、f对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含硫酸特布他林0.5mg与杂质b、c、f各为2.5μg的溶液。
[0074]
检测结果如图1和表2所示，杂质c与主峰的分离度为2.38，符合分离度＞2的要求，且杂质b、c、f均在20min内有效分离，制定杂质b、c、f≤0.5％，其他单杂≤0.5％，总杂质≤2.0％，可用于硫酸特布他林注射液质量控制。
[0075]
表2实施例1检测方法系统适用性结果
[0076]
归属rt(min)分离度杂质f6.07/杂质b10.7612.76杂质c13.505.69特布他林15.192.38
[0077]
根据耐用性试验确定流动相a中的己烷磺酸钠浓度为3.75～4.31g/l，硫酸钠浓度为1.25～1.57g/l；流动相a中的甲酸铵浓度可以为0.049～0.051mol/l；流动相a中的缓冲液ph可以为3.0
±
0.1；柱温30～40℃；流速为0.8～1.2ml/min。
[0078]
实施例2
[0079]
硫酸特布他林注射液及有关物质的检测，检测条件为：
[0080]
色谱柱：agilent zorbax eclipse plμs-c18(250
×
4.6mm，5μm)；
[0081]
流动相：取己烷磺酸钠4.08g、硫酸钠1.41g及甲酸铵3.15g，置1000ml量瓶中，加水约960ml，加甲酸(约8ml)调节ph值至3.0，用水稀释至刻度，摇晃至完全溶解，即为流动相a。取800ml流动相a与200ml甲醇(流动相b)，混匀；
[0082]
检测波长：276nm；
[0083]
柱温：30℃；
[0084]
流速：1.0ml/min；
[0085]
进样体积：50μl；
[0086]
供试品溶液：取自制硫酸特布他林注射液5支，混合均匀，取适量，作为供试品溶液(0.5mg/ml)；
[0087]
其中，自制硫酸特布他林注射液的制备方法：在适量注射用水中加入处方量的硫酸特布他林(0.05％，w/v)和氯化钠(0.89％，w/v)，加入盐酸调节ph至3.0～4.5，搅拌溶解完全后定容至400l，再以0.45μm滤芯过滤，灌装，121℃灭菌，制得规格为0.5mg:1ml的硫酸
特布他林注射液。
[0088]
对照溶液：精密量取标准品适量，加流动相定量稀释制成每1ml中约含硫酸特布他林0.5μg的溶液；
[0089]
精密量取供试品溶液与对照溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的3倍。
[0090]
经方法学验证得到杂质b、c、f校正因子如下：杂质b校正因子0.79，杂质c校正因子0.23，杂质d校正因子0.15。
[0091]
检测结果如图2-1、图2-2和表3所示，供试品溶液色谱图中有杂质峰，杂质c峰面积乘以校正因子0.23均不大于对照溶液主峰面积的5倍(0.5％)，杂质b峰面积乘以校正因子0.79后不大于对照溶液主峰面积的5倍(0.5％)，杂质f峰面积乘以校正因子0.15后不大于对照溶液主峰面积的5倍(0.5％)，其他单个杂质均不大于对照溶液主峰面积的5倍(0.5％)，各杂质峰面积之和不大于对照溶液主成分峰面积的20倍(2.0％)，因此符合杂质限度标准，为合格的硫酸特布他林注射液产品。
[0092]
表3实施例2检测方法系统适用性结果
[0093]
归属rt(min)分离度峰面积(％)杂质f6.13/0.57 7.846.510.01杂质b10.748.790.19杂质c13.466.240.01特布他林15.092.4299.20 27.0312.920.02
[0094]
对比例1
[0095]
美国药典(usp43)中硫酸特布他林注射液含量检测方法用于检测有关物质的系统适用性试验，试验条件为：
[0096]
色谱柱：agilent zorbax eclipse plμs-c18(250
×
4.6mm，5μm)；
[0097]
流动相：取己烷磺酸钠5.49g及甲酸铵3.15g，置1000ml量瓶中，加水约960ml，加甲酸(约8ml)调节ph值至3.0，用水稀释至刻度，摇晃至完全溶解，即为流动相。取770ml流动相a与230ml甲醇(流动相b)，混匀；
[0098]
检测波长：276nm；
[0099]
柱温：30℃；
[0100]
流速：1.0ml/min；
[0101]
进样体积：50μl；
[0102]
系统适用性溶液：取硫酸特布他林标准品及杂质b、c、f对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含硫酸特布他林0.5mg与杂质b、c、f各为2.5μg的溶液。
[0103]
检测结果如图3-1、图3-2和表4所示，杂质c与主峰分离度为1.33，不符合分离度》2的要求。因此，需要优化高效色谱法试验条件以解决杂质c与主峰分离度的问题，达到同时对注射液中杂质b、c、f进行检测的目的。
[0104]
表4对比例1检测方法系统适用性结果
[0105]
归属rt(min)分离度
杂质f5.01/杂质b7.347.19杂质c8.884.00特布他林9.511.33
[0106]
对比例2
[0107]
高效液相色谱法检测硫酸特布他林注射液及有关物质检测的系统适用性试验，试验条件为：
[0108]
色谱柱：agilent zorbax eclipse plμs-c18(250
×
4.6mm，5μm)；
[0109]
流动相：取己烷磺酸钠5.49g及甲酸铵3.15g，置1000ml量瓶中，加水约960ml，加甲酸(约8ml)调节ph值至3.0，用水稀释至刻度，摇晃至完全溶解，即为流动相。取800ml流动相a与200ml甲醇(流动相b)，混匀；
[0110]
检测波长：276nm；
[0111]
柱温：30℃；
[0112]
流速：1.0ml/min；
[0113]
进样体积：50μl；
[0114]
系统适用性溶液：取硫酸特布他林标准品及杂质b、c、f对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含硫酸特布他林0.5mg与杂质b、c、f各为2.5μg的溶液。
[0115]
检测结果如图4和表5所示，杂质c与主峰分离度为1.77，不符合分离度》2的要求。因此，需进一步优化高效色谱法试验条件以解决杂质c与主峰分离度的问题，以达到对注射液中杂质b、c、f进行同时检测。
[0116]
表5对比例2检测方法系统适用性结果
[0117]
归属rt(min)分离度杂质f5.02/杂质b7.377.71杂质c8.934.21特布他林9.681.77
[0118]
对比例3
[0119]
高效液相色谱法检测硫酸特布他林注射液及有关物质检测的系统适用性试验，试验条件为：
[0120]
色谱柱：agilent zorbax eclipse plμs-c18(250
×
4.6mm，5μm)；
[0121]
流动相：取己烷磺酸钠4.08g、硫酸钠1.41g及甲酸铵3.15g，置1000ml量瓶中，加水约960ml，加甲酸(约8ml)调节ph值至3.0，用水稀释至刻度，摇晃至完全溶解，即为流动相。取770ml流动相a与230ml甲醇(流动相b)，混匀；
[0122]
检测波长：276nm；
[0123]
柱温：30℃；
[0124]
流速：1.0ml/min；
[0125]
进样体积：50μl；
[0126]
系统适用性溶液：取硫酸特布他林标准品及杂质b、c、f对照品适量，加流动相溶解并定量稀释制成每1ml中约含硫酸特布他林0.5mg与杂质b、c、f各为2.5μg的溶液。
[0127]
检测结果如图5和表6所示，只检测出杂质b、杂质f及特布他林，未检出杂质c，不符合达到对注射液中杂质b、c、f进行同时检测的目的。
[0128]
表6对比例2检测方法系统适用性结果
[0129]
归属rt(min)分离度杂质f6.06/杂质b11.0713.48杂质c未检出/特布他林15.616.51
[0130]
上述详细说明是针对本发明其中之一可行实施例的具体说明，该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明所为的等效实施或变更，均应包含于本发明技术方案的范围内。