一种L-鼠李糖含量的测定方法与流程

一种l-鼠李糖含量的测定方法
技术领域
1.本发明属于物质含量检测测定领域，涉及一种l-鼠李糖含量的测定方法。


背景技术：

2.l-鼠李糖(l-rhamnose monohydrate)，c6h
12
o5·
h2o，又称6-脱氧-l-甘露糖，或甲基戊糖，作为一种微量糖，自然界里主要存在于植物多糖、糖苷、植物胶及细菌多糖中。l-鼠李糖的纯品为无色粉末，呈结晶状，其甜度是蔗糖的33％。l-鼠李糖可食用，可用作甜味剂，可用于生产香精香料；研究发现，l-鼠李糖可以作为药物的中间体、合成强心药物；可作为肠道渗透测试剂使用，并具有抗癌作用；还可用于农作物疾病的防治等。
3.l-鼠李糖可以在植物中提取，也可以用发酵法等途径进行工业生产。
4.目前国内对食品中l-鼠李糖含量的检测方法包括化学方法：如二硝基水杨法(dns法)，高效液相色谱法，薄层色谱法和毛细管气相色谱法等。以前两种方法较为常用，其中dns化学法操作繁琐、检测精度低、易受干扰；高效液相色谱法更受青睐。现有技术中有采用waters高效糖分析柱，利用梯度洗脱分离，建立了同时测定单糖，水溶性糖的新方法：高效液相色谱一蒸发光散射检测法(hplc-elsd)，该方法已被广泛应用于其他糖类的定性定量的检测。
5.对于企业生产的l-鼠李糖纯品含量的快速检测方法，目前国内公开发明的检测的方法比较单一，具体方法：以氢离子色谱柱为分离柱，体积分数0.2～0.8％的稀硫酸溶液作为流动相，示差检测器检测。本方法可操作性好，准确度高。但是该方法l-鼠李糖的出峰时间相对本发明的l-鼠李糖的出峰时间较晚，对于生产企业达到快速检测的时效不高。


技术实现要素：

6.为解决生产企业快速检测l-鼠李糖含量的问题，本发明提供了一种l-鼠李糖含量的测定方法，为生产企业节约时间成本，包括以下步骤：
7.s10，将l-鼠李糖经水溶解；
8.s20，采用高效液相色谱分离和检测器检测，外标法定量；
9.s30，根据朗伯—比尔定律，在一定浓度范围内，样品中被测组分的含量与响应值的峰面积或峰高成正比，在预设色谱条件下，分别测定标准品和样品的峰面积，计算得到样品中l-鼠李糖的含量。
10.优选地，所述s20中的检测器检测采用蒸发光散射检测器。
11.优选地，所述s20中包括：
12.对于标准品溶液：称取50mg的l-鼠李糖的标准品，加入纯化水溶解，用纯化水定容至50ml，摇匀后水相微孔滤膜过滤，待高效液相色谱测定；
13.对于样品溶液：称取两份50mg的l-鼠李糖的样品，加入纯化水溶解，用纯化水定容至50ml，摇匀后水相微孔滤膜过滤，待高效液相色谱测定。
14.优选地，所述蒸发光散射检测器的仪器条件：
15.色谱柱：c18柱，250mm*4.6mm，5μm，或等效色谱柱；
16.流动相：乙腈：纯化水＝20:80(v:v)；
17.流速：1ml/min；
18.漂移管温度：90℃；
19.柱温：35℃；
20.载气：氮气，载气流量：2.0l/min；
21.撞击器：关；
22.进样量：10ul。
23.优选地，所述s10包括进样，具体为标准品溶液连续进6针，空白溶液进2针，样品溶液进2针平行样，蒸发光散射检测器检测时空白溶液为纯化水。
24.优选地，所述s20中的检测器检测采用示差检测器。
25.优选地，所述s20中包括：
26.对于标准品溶液：称取100mg的l-鼠李糖的标准品，加入3ml纯化水溶解，用乙腈定容至10ml，摇匀后有机相微孔滤膜过滤，待高效液相色谱测定；
27.对于样品溶液：称取两份100mg的l-鼠李糖的样品，加入3ml纯化水溶解，用乙腈定容至10ml，摇匀后有机相微孔滤膜过滤，待高效液相色谱测定。
28.优选地，所述示差检测器的仪器条件：
29.色谱柱：氨基柱，250mm*4.6mm，5μm，或等效色谱柱；
30.流动相：乙腈：纯化水＝70:30(v:v)；
31.流速：1ml/min；
32.示差检测器流通池温度：33℃～37℃；
33.柱温：35℃；
34.进样量：10ul。
35.优选地，所述s10包括进样，具体为标准品溶液连续进6针，空白溶液进2针，样品溶液进2针平行样，示差检测器检测时空白溶液为乙腈：纯化水＝70:30(v:v)。
36.优选地，所述s30中计算得到样品中l-鼠李糖的含量的公式包括：
[0037][0038]
式中：
[0039]
x1——样品中l-鼠李糖的含量，％；
[0040]
x2——样品中l-鼠李糖的含量，以干燥品计，％；
[0041]ms
——l-鼠李糖标准品的质量，单位为mg；
[0042]cs
——l-鼠李糖标准品中标示的l-鼠李糖的含量，％；
[0043]mu
——l-鼠李糖试样的质量，单位为mg；
[0044]au
——样品溶液色谱分析得到的主峰面积；
[0045]as
——对照品溶液色谱分析得到的主峰面积；
[0046]
9.88——l-鼠李糖的结晶水的含量，％。
[0047]
本发明的有益效果如下：
[0048]
l-鼠李糖是一种单糖，其纯品为无色粉末，呈结晶状，自然界里主要存在于植物多
糖、糖苷、植物胶及细菌多糖中，大多为l型。是一种食品用甜味剂，被广大生产企业所应用。l-鼠李糖纯品中可能含有水分和其他未知杂质，所以本发明方法主要是通过高效液相色谱法检测l-鼠李糖纯品的含量。
[0049]
本发明方法l-鼠李糖是一种水溶性的单糖，经水溶解，过滤，可以快速的进高效液相色谱系统检测，色谱前处理方法简便，快速，易操作。
[0050]
本发明方法中l-鼠李糖经水溶解，稳定性较好。检测步骤严格按照中国药典高效液相色谱检测，其重复性好，系统适应性符合标准要求。
[0051]
本发明方法中用到的流动相均含有有机溶剂，更好的保护色谱柱，延长色谱柱的使用寿命。
[0052]
本发明方法提供了两种检测方法，分别是示差检测器检测和蒸发光检测器检测，两种方法灵敏度高，重复性好，准确度高，且两种检测方法检测时间相对于其他检测方法相对较短，样品进样检测时间均在10min以内，为企业生产的l-鼠李糖的含量检测提供了一种准确、灵敏、快捷的分析检测方法，节省时间成本，非常适用于企业在生产过程中对l-鼠李糖的实时监控，同时也适用于出厂检验。
附图说明
[0053]
图1为本发明方法实施例的l-鼠李糖含量的测定方法的步骤流程图；
[0054]
图2为本发明方法实施例的l-鼠李糖含量的测定方法中示差检测器检测的l-鼠李糖的标准品溶液图谱；
[0055]
图3为本发明方法实施例的l-鼠李糖含量的测定方法中蒸发光散射检测器检测的l-鼠李糖的标准品溶液图谱；
[0056]
图4为本发明方法实施例的l-鼠李糖含量的测定方法中示差检测器检测的l-鼠李糖的样品溶液图谱；
[0057]
图5为本发明方法实施例的l-鼠李糖含量的测定方法中蒸发光散射检测器检测的l-鼠李糖的样品溶液图谱。
具体实施方式
[0058]
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0059]
相反，本发明涵盖任何由权利要求定义的在本发明的精髓和范围上做的替代、修改、等效方法以及方案。进一步，为了使公众对本发明有更好的了解，在下文对本发明的细节描述中，详尽描述了一些特定的细节部分。对本领域技术人员来说没有这些细节部分的描述也可以完全理解本发明。
[0060]
参见图1，为本发明实施例的l-鼠李糖含量的测定方法的步骤流程图，包括以下步骤：
[0061]
s10，将l-鼠李糖经水溶解；
[0062]
s20，采用高效液相色谱分离和检测器检测，外标法定量；
[0063]
s30，根据朗伯—比尔定律，在一定浓度范围内，样品中被测组分的含量与响应值
的峰面积或峰高成正比，在预设色谱条件下，分别测定标准品和样品的峰面积，计算得到样品中l-鼠李糖的含量。
[0064]
本方法所用试剂均为分析纯，纯化水为gb/t 6682规定的一级水，乙腈：色谱纯，l-鼠李糖的标准品，纯度≥95％。
[0065]
仪器与材料包括：有机相微孔滤膜：0.45μm；水机相微孔滤膜：0.45μm；容量瓶：10ml，50ml；高效液相色谱仪：配蒸发光散射检测器或示差检测器；分析天平：感量为0.001g和0.00001g。
[0066]
在s20中的检测器检测采用蒸发光散射检测器，则s20中包括：
[0067]
对于标准品溶液：称取50mg的l-鼠李糖的标准品，加入纯化水溶解，用纯化水定容至50ml，摇匀后水相微孔滤膜过滤，待高效液相色谱测定；
[0068]
对于样品溶液：称取两份50mg的l-鼠李糖的样品，加入纯化水溶解，用纯化水定容至50ml，摇匀后水相微孔滤膜过滤，待高效液相色谱测定。
[0069]
蒸发光散射检测器的仪器条件：
[0070]
色谱柱：c18柱，250mm*4.6mm，5μm，或等效色谱柱；
[0071]
流动相：乙腈：纯化水＝20:80(v:v)；
[0072]
流速：1ml/min；
[0073]
漂移管温度：90℃；
[0074]
柱温：35℃；
[0075]
载气：氮气，载气流量：2.0l/min；
[0076]
撞击器：关；
[0077]
进样量：10ul。
[0078]
s10包括进样，具体为标准品溶液连续进6针，空白溶液进2针，样品溶液进2针平行样，蒸发光散射检测器检测时空白溶液为纯化水。
[0079]
s20中的检测器检测采用示差检测器时，s20中包括：
[0080]
对于标准品溶液：称取100mg的l-鼠李糖的标准品，加入3ml纯化水溶解，用乙腈定容至10ml，摇匀后有机相微孔滤膜过滤，待高效液相色谱测定；
[0081]
对于样品溶液：称取两份100mg的l-鼠李糖的样品，加入3ml纯化水溶解，用乙腈定容至10ml，摇匀后有机相微孔滤膜过滤，待高效液相色谱测定。
[0082]
示差检测器的仪器条件：
[0083]
色谱柱：氨基柱，250mm*4.6mm，5μm，或等效色谱柱；
[0084]
流动相：乙腈：纯化水＝70:30(v:v)；
[0085]
流速：1ml/min；
[0086]
示差检测器流通池温度：33℃～37℃；
[0087]
柱温：35℃；
[0088]
进样量：10ul。
[0089]
s10包括进样，具体为标准品溶液连续进6针，空白溶液进2针，样品溶液进2针平行样，示差检测器检测时空白溶液为乙腈：纯化水＝70:30(v:v)。
[0090]
s30中计算得到样品中l-鼠李糖的含量的公式包括：
[0091][0092]
式中：
[0093]
x1——样品中l-鼠李糖的含量，％；
[0094]
x2——样品中l-鼠李糖的含量，以干燥品计，％；
[0095]ms
——l-鼠李糖标准品的质量，单位为mg；
[0096]cs
——l-鼠李糖标准品中标示的l-鼠李糖的含量，％；
[0097]mu
——l-鼠李糖试样的质量，单位为mg；
[0098]au
——样品溶液色谱分析得到的主峰面积；
[0099]as
——对照品溶液色谱分析得到的主峰面积；
[0100]
9.88——l-鼠李糖的结晶水的含量，％。
[0101]
适应性的要求：
[0102]
含量项下的标准品溶液图谱与样品溶液图谱比较，样品溶液的主峰保留时间与标准品溶液的主峰保留时间应一致。
[0103]
连续6针标准品溶液的定量重复性：蒸发光散射检测器≤4.0％；示差检测器≤3.0％。
[0104]
定性重复性：蒸发光散射检测器≤1.5％；示差检测器≤1.0％。
[0105]
空白溶液应无干扰。
[0106]
在重复条件下获得的2针独立测定结果的绝对差值不得超过算数平均值的2.0％。
[0107]
参见图2-图5，为本发明通过示差检测器和蒸发光散射检测器分别对标准品和样品检测的图谱，可见两种检测方法均可准确测得l-鼠李糖的图谱。
[0108]
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。