技术特征：
1.一种采用液相色谱串联质谱对血液中环孢素a浓度的检测方法，其特征在于， 包括如下步骤：获取含环孢素a的待检测血液样本；分别对液相色谱和质谱进行液相色谱串联质谱参数的设置及优化；将待测血液样本溶液进样至液相色谱仪串联质谱仪中，随流动相流动并进行检测分析，获得待测血液样本中的环孢素a浓度曲线；采用标准曲线法，根据待测血液样本中的环孢素a峰面积/内标峰面积比值，计算出血液中环孢素a浓度。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述待检测血液样本由以下步骤制得：将装有全血样本的采集管上下颠倒，量取血液，并制作空白全血；取同浓度的环孢素a标准品储备液和环孢素a质控品储备液分别加入所述空白全血中，混匀，制备得到环孢素a标准品和质控品工作液；量取所述环孢素a标准品和质控品工作液加入离心管底部，再往离心管中加入超纯水，经涡旋、超声后，加入环孢素a_d12内标工作液，再次涡旋、离心处理后取上清液并加入萃取剂，继续涡旋、离心处理，再取上层液体，使用氮气吹干后，加入复溶液，继续涡旋、冷冻离心处理后，将上清液移转至进样瓶中，获得待检血液样本。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述环孢素a标准品和质控品工作液制备步骤中还包括如下步骤：将环孢素a与甲醇混匀，配置成两份同浓度的储备液，一份作为环孢素a标准品储备液，一份作为环孢素a质控品储备液；分别量取所述环孢素a标准品储备液、环孢素a质控品储备液与空白全血混匀，制得所述环孢素a标准品和质控品工作液。4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述环孢素a标准品和质控品工作液制备步骤中，所述环孢素a标准品储备液、所述环孢素a质控品储备液的体积数分别与所述空白全血的体积数之比为1:19。5.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述环孢素a_d12内标工作液采用如下步骤制得：移取环孢素a_d12内标准品，加入甲醇，混匀，配制成环孢素a_d12内标准品储备液；移取所述环孢素a_d12内标准品储备液，加入甲醇沉淀剂ⅱ及0.1m浓度的硫酸锌混合溶液沉淀剂ⅰ，混匀，配制成所述环孢素a_d12内标工作液，备用。6.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述环孢素a_d12内标工作液涡旋、离心处理过程中，加入的萃取剂为正己烷与乙酸乙酯1:1的混合溶液。7.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱串联质谱参数设置和优化步骤中，质谱条件为：正离子模式工作，cad为2-5，cur为15-25，gs1为40-55，gs2为40-55，is为4000-6000，tem为300-500
°
c；及液相色谱条件为：色谱柱：phenomenex kinetex
®
xb-c18柱，5μm，150mm * 4.6 mm，柱温：60
°
c。8.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述液相色谱串联质谱检测分析步骤中，在液相色谱仪中进行流动的流动相采用如下步骤制得：
配制流动相a：2 mm乙酸铵水溶液含0.1%甲酸；配制流动相b：2 mm乙酸铵的甲醇溶液中含0.1%甲酸；将所述流动相a和流动相b混合，制得流动相。9.根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，移取体积比3:7的所述流动相a和流动相b，混匀，获得所述复溶液，置于常温保存15天备用。10.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，采用标准曲线法时，还需要制作环孢素a的标准曲线，其步骤如下：将环孢素a加入甲醇中，配制7个不同浓度：25ng/ml，50 ng/ml，100ng/ml，250ng/ml，500ng/ml，1000ng/ml，2000ng/ml的标准曲线，制备三份；随后分三个批次进样到液相色谱-质谱中，绘制出环孢素a的标准曲线。
技术总结
本发明公开了一种采用液相色谱串联质谱对血液中环孢素A浓度的检测方法，包括步骤：获取含环孢素A的待检测血液样本；分别对液相色谱和质谱进行液相色谱串联质谱参数的设置及优化，然后进样检测分析；采用标准曲线法，根据待测样本中的环孢素A峰面积/内标峰面积比值，计算出血液中环孢素A浓度。本检测方法，检测前处理方法相对简单，一天可以同时处理多批样本；在25-2000 ng/mL，检测范围比较广，满足所有血液中环孢素A样本的检测。有血液中环孢素A样本的检测。有血液中环孢素A样本的检测。
技术研发人员：郑仲征 王宁娟 袁志阳 李玉侠
受保护的技术使用者：深圳荻硕贝肯精准医学有限公司
技术研发日：2022.05.17
技术公布日：2022/6/17