用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法与流程

1.本发明涉及雷帕霉素药物球囊检测方法技术领域，尤其涉及用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法


背景技术：

2.雷帕霉素是一种天然的大环内酯类药物，是有效的免疫抑制剂，可延长移植存活率，对组织移植、骨髓移植和胰岛细胞移植均有效。雷帕霉素与一种特殊的称为tor(雷帕霉素靶)的转导蛋白结合，作用在细胞有丝分裂g1期，并抑制它的活性，使细胞返回到静止期，从而抑制细胞生长。由于它独特的作用机制，雷帕霉素与其他免疫抑制剂相比毒性很低。此外，雷帕霉素可抑制动脉损伤和支架植入后炎症反应和平滑肌细胞的过度增生。
3.雷帕霉素药物球囊为创新性的药物球囊产品，应用于人体血管介入治疗领域，药球生产过程中不可避免的会用到各种溶剂，其有机溶剂溶剂能很好的辅助雷帕霉素发挥药效，但残留量不能超过《中国药典》规定的要求：药物球囊中甲醇含量不超过0.3％，正己烷含量不超过0.029％，乙酸乙酯含量不超过0.5％(以药物球囊所含药物总量为基准)，如何准确快速的检测这些溶剂的含量，市面上还没有这种方法。
4.中国专利cn202110993774.9公开了一种雷帕霉素药物球囊的制备方法，其能够制备可有效递送雷帕霉素的药物球囊。所述药物球囊有效解决了雷帕霉素药物涂层在喷涂于药物球囊后容易脱落的问题，大幅提高了药物球囊扩张后雷帕霉素向血管内皮细胞的转移率。同时，转移到血管的雷帕霉素胶束粒子有着良好的药代动力学性质，作用时间长。本发明的雷帕霉素药物球囊构成材料安全无毒，雷帕霉素利用率高、作用时间长，因此特别适合在ptca中应用。该雷帕霉素药物球囊的制备方法包括将所述载药胶束用有机溶剂分散，并加入壳聚糖，分散后制得喷涂溶液，其中有机溶剂如甲醇、乙醇，烷烃类溶剂如正己烷、正庚烷、环己烷中的至少一种，而在后续的用去离子水冲洗裸球囊，干燥后进行表面等离子预处理方式中，无法控制有机溶剂有机溶剂的残留。


技术实现要素：

5.本发明实施例提供用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法，该方法简便易行、准确度高、分离度好，为雷帕霉素药物球囊导管生产过程中质量控制分析提供了简单可靠的方法，本发明的内容如下：
6.本发明的目的在于提供用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法，其技术点在于，包括以下步骤：
7.步骤1，配制标准储备液：取0.01g正己烷、0.1g乙酸乙酯和0.1g甲醇溶解于20ml中，稀释成浓度分别为100μg/ml的正己烷标准储备液、1000μg/ml的乙酸乙酯标准储备液和1000μg/ml的甲醇标准储备液；
8.步骤2，制作标准曲线：将步骤1制备的标准储备液用稀释剂进行梯度稀释得到线
性标准溶液，分别取稀释后各浓度的线性标准溶液5ml于20ml顶空瓶中，待仪器平衡后进样，分别作标准曲线；
9.步骤3，配制供试品溶液：取雷帕霉素药物球囊2个于10ml离心管中，充压，加入5.5ml使药物溶解，将球囊部分剪成两段，加盖摇匀，超声1
±
0.2min，即得供试品溶液；
10.步骤4，配制空白溶液：稀释剂；
11.步骤5，气相色谱法测定：吸取步骤4中的空白溶液，移取5ml于20ml顶空瓶中，进2针，吸取步骤3中的供试品溶液移取5ml供试品溶液于20ml顶空瓶中，待仪器平衡后进样。
12.在本发明的有的实施例中，本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法中所述步骤2中梯度稀释为：用微量注射器吸取标准储备液10μl，注入装有5ml稀释剂的顶空瓶中，加盖摇匀，即得线性标准溶液1；
13.用微量注射器吸取标准储备液15μl，注入装有5ml稀释剂的顶空瓶中，加盖摇匀，即得线性标准溶液2；
14.用微量注射器吸取标准储备液20μl，注入装有5ml稀释剂的顶空瓶中，加盖摇匀，即得线性标准溶液3；
15.用微量注射器吸取标准储备液30μl，注入装有5ml稀释剂的顶空瓶中，加盖摇匀，即得线性标准溶液4；
16.用微量注射器吸取标准储备液40μl，注入装有5ml稀释剂的顶空瓶中，加盖摇匀，即得线性标准溶液5。
17.在本发明的有的实施例中，本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法中气相色谱法测定采用的色谱柱为毛细管色谱柱，规格为30m*0.32mm*0.5μm。
18.在本发明的有的实施例中，本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法中气相色谱法测定初始温度30-50℃保持5-7min，再以15-25℃/min升至220℃，保持4-6min。
19.在本发明的有的实施例中，本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法中气相色谱法测定所用检测器温度为240-260℃。
20.在本发明的有的实施例中，本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法中气相色谱法测定中载气为高纯氮气、高纯氦气或高纯氢气，分流比为(5-50):1，载气流量为7.5-12.5ml/min。
21.在本发明的有的实施例中，本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法中气相色谱法测定中进样口温度为185-215℃。
22.在本发明的有的实施例中，本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法中气相色谱法测定中顶空进样器的参数为：顶空瓶平衡温度75-95℃，定量环温度80-100℃，传输线温度80-120℃，顶空瓶平衡时间35-45min，进样体积0.8-1.2ml，尾吹2-4ml/min。
23.在本发明的有的实施例中，本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法中稀释剂为n，n二甲基甲酰胺。
24.与现有技术相比，本发明的有益效果为：
25.本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法包括
配制标准储备液、制作标准曲线、配制供试品溶液、配制空白溶液和气相色谱法测定，本发明基于特定的气相色谱条件，利用气相色谱仪分别测定至少5个标准溶液，得到各个标准溶液的色谱图，各标准溶液中均含有浓度已知的甲醇、乙酸乙酯、正己烷标准品；根据各个标准溶液的色谱图拟合得到标准曲线方程；将雷帕霉素药物球囊扩张，再加入dmf(n,n-二甲基甲酰胺)超声溶解，得到待测样本，再同法检测待测样本得到其色谱图；根据待测样本的色谱图和标准曲线方程，计算样本中甲醇、乙酸乙酯、正己烷的含量，本发明能够同时准确、快速地测定雷帕霉素药物球囊导管中甲醇、乙酸乙酯、正己烷的残留量。
附图说明
26.此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：
27.图1为本发明用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法的空白溶剂的气相色谱检测图；
28.图2为本发明的发明用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法的甲醇的标准曲线；
29.图3为发明用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法的乙酸乙酯的标准曲线；
30.图4为发明用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法的正己烷的标准曲线；
31.图5为发明用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法的供试品的气相色谱检测图。
具体实施方式
32.为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合本发明具体实施例及相应的附图对本发明技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
33.以下结合附图，详细说明本发明各实施例提供的技术方案。
34.用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法包括以下步骤：
35.步骤1，配制标准储备液：取0.01g正己烷、0.1g乙酸乙酯和0.1g甲醇溶解于20mln，n二甲基甲酰胺中，稀释成浓度分别为100μg/ml的正己烷标准储备液、1000μg/ml的乙酸乙酯标准储备液和1000μg/ml的甲醇标准储备液；
36.步骤2，制作标准曲线：将步骤1制备的标准储备液用n，n二甲基甲酰胺进行梯度稀释得到线性标准溶液，分别取稀释后各浓度的线性标准溶液5ml于20ml顶空瓶中，待仪器平衡后进样，分别作标准曲线见图2-4；
37.梯度稀释为：用微量注射器吸取标准储备液10μl，注入装有5mln，n二甲基甲酰胺的顶空瓶中，加盖摇匀，即得线性标准溶液1；
38.用微量注射器吸取标准储备液15μl，注入装有5mln，n二甲基甲酰胺的顶空瓶中，加盖摇匀，即得线性标准溶液2；
39.用微量注射器吸取标准储备液20μl，注入装有5mln，n二甲基甲酰胺的顶空瓶中，加盖摇匀，即得线性标准溶液3；
40.用微量注射器吸取标准储备液30μl，注入装有5mln，n二甲基甲酰胺的顶空瓶中，加盖摇匀，即得线性标准溶液4；
41.用微量注射器吸取标准储备液40μl，注入装有5mln，n二甲基甲酰胺的顶空瓶中，加盖摇匀，即得线性标准溶液5。
42.表1甲醇、乙酸乙酯和正己烷线性关系
[0043][0044]
步骤3，配制供试品溶液：取雷帕霉素药物球囊2个于10ml离心管中，充压，加入5.5mln，n二甲基甲酰胺使药物溶解，将球囊部分剪成两段，加盖摇匀，超声1
±
0.2min，即得供试品溶液；
[0045]
步骤4，配制空白溶液：n，n二甲基甲酰胺；
[0046]
步骤5，气相色谱法测定：吸取步骤4中的空白溶液，移取5ml于20ml顶空瓶中，进2针，吸取步骤3中的供试品溶液移取5ml供试品溶液于20ml顶空瓶中，待仪器平衡后进样件图5。
[0047]
表2雷帕霉素药物球囊样品检出情况
[0048][0049]
甲醇检测限0.4μg/ml，定量限1μg/ml；
[0050]
正己烷检测限0.01μg/ml，定量限0.03μg/ml；
[0051]
乙酸乙酯检测限0.4μg/ml，定量限1μg/ml。
[0052]
其中，本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法中气相色谱法测定采用的色谱柱为毛细管色谱柱，规格为30m*0.32mm*0.5μm。
[0053]
其中，本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法中气相色谱法测定初始温度30-50℃保持5-7min，再以15-25℃/min升至220℃，保持4-6min。
[0054]
其中，本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法中气相色谱法测定所用检测器温度为240-260℃。
[0055]
其中，本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法中气相色谱法测定中载气为高纯氮气、高纯氦气或高纯氢气，分流比为(5-50):1，载气流量为7.5-12.5ml/min。
[0056]
其中，本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法中气相色谱法测定中进样口温度为185-215℃。
[0057]
其中，本发明的用气相色谱法测定雷帕霉素药物球囊导管中残留有机溶剂的方法中气相色谱法测定中顶空进样器的参数为：顶空瓶平衡温度75-95℃，定量环温度80-100℃，传输线温度80-120℃，顶空瓶平衡时间35-45min，进样体积0.8-1.2ml，尾吹2-4ml/min。
[0058]
表3甲醇、乙酸乙酯和正己烷检测限
[0059][0060]
表4甲醇、乙酸乙酯和正己烷定量限
[0061][0062][0063]
表4甲醇、乙酸乙酯和正己烷检出准确度
[0064]
[0065]
[0066][0067]
以上所述仅为本发明的实施例而已，并不用于限制本发明。对于本领域技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原理之内所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的权利要求范围之内。