技术特征：
1.一种dna自组装体原子力显微镜检测方法，其特征在于，包含以下步骤：步骤一，制备sirna/dna组装体纳米材料，将dna 组装体的每条组装链上分别与sirna基因片段结合，得到sirna/dna组装体；步骤二，原子力显微镜表征sirna/dna组装体纳米材料形貌的方法，包括：（1）将试样sirna/dna组装体沉积在基底上，对基底进行修饰使生物组装体与基底所带电荷电性相反，并用纯水清洗，氮气氛吹干；（2）安装探针；（3）调节激光：将激光光斑打至悬臂前端位置；（4）调节四象限检测器：调整head后部反光镜，使sum值最大；（5）将样品固定在样品托上，并将样品托放入样品台上；（6）根据所选探针的探针盒上的参数f0范围填写start frequency 和 end frequency，单击auto tune选项寻找共振峰后退出tuning界面；（7）进针，调节扫描大小，选择扫描范围，观察height 图中 trace 和 retrace 两条曲线的重合情况，在tapping模式下，调节amplitude setpoint直到trace和retrace两条扫描线基本一致，优化 integral gain 和 proportional gain，调节扫描范围和扫描速率，并拍照，表征sirna/dna组装体纳米材料形貌结构。2.根据权利要求1所述dna自组装体原子力显微镜检测方法，其特征在于，步骤二，当所述的基底采用云母基底时，因其与sirna/dna组装体所带电荷电均为负电性，故采用将云母或sirna/dna组装体溶液中加入带正电荷的离子。3.根据权利要求1所述dna自组装体原子力显微镜检测方法，其特征在于，步骤二所述的探针，选择 v 型氮化硅悬臂梁的探针。4.根据权利要求1至3任一项所述dna自组装体原子力显微镜检测方法，其特征在于，按下述步骤：（1）将试样sirna/dna组装体沉积在基底上：对sirna/dna进行修饰使生物组装体与基底所带电性相反，首先，将3.5mmol／l mgcl2缓冲溶液稀释sirna/dna溶液至1 ng/μl；取100μl该溶液至新解离的云母上，沉积30min，用纯水清洗，氮气氛吹干；（2）安装探针：选择 v 型氮化硅悬臂梁的探针；（3）调节激光：将激光光斑打至悬臂前端位置；（4）调节四象限检测器：调整head后部反光镜，使sum值最大；（5）将样品固定在样品托不锈钢小圆片上，并将该样品托放入样品台上；（6）根据所选探针的探针盒上的参数f0范围填写start frequency 和 end frequency，单击auto tune选项寻找共振峰后退出tuning界面；（7）进针：调节扫描大小，选择合适的扫描范围，观察height 图中 trace 和 retrace 两条曲线的重合情况；在tapping模式下，调节amplitude setpoint直到trace和retrace两条扫描线基本一致；优化 integral gain 和 proportional gain，调节扫描范围和扫描速率，并拍照，取得表征sirna/dna组装体纳米材料的形貌结构。5.根据权利要求1至3任一项所述dna自组装体原子力显微镜检测方法，其特征在于，按下述步骤：（1）将试样sirna/dna组装体沉积在云母基底上：先对云母基底修饰，产生一个带正电
的表面，将带负电的sirna/dna组装体束缚在其表面，通过使用被稀释的0.1%多聚赖氨酸（pll）使云母基底表面带正电；0.1%多聚赖氨酸的制备过程如下：将0.1%的pll与过滤后的去离子水以1：10的比例混合(例如添加0.5 ml的pll到4.5 ml的去离子水中)，使用干净的玻璃器皿稀释和旋涂，将该稀释溶液存储在 4℃的冰箱中以备用；将云母基底在室温下完全浸在稀释的pll中，为减少蒸发可用玻璃盘罩在外面，30 min后取出该云母，用纯水清洗，氮气氛吹干；然后，解离云母片得到新的一层云母面，用移液器取约10μl稀释sirna/dna溶液滴在表面，sirna/dna组装体溶液被均匀地分布在表面上，沉积3 min后，用约200μl纯水冲洗；（2）安装探针：选择 v 型氮化硅悬臂梁的探针；（3）调节激光：将激光光斑打至悬臂前端位置；（4）调节四象限检测器：调整head后部反光镜，使sum值最大；（5）将样品固定在样品托不锈钢小圆片上，并将样品托放入样品台上；（6）根据所选探针的探针盒上的参数f0范围填写start frequency 和 end frequency，单击auto tune选项寻找共振峰后退出tuning界面；（7）进针，调节扫描大小，选择合适的扫描范围，观察height 图中 trace 和 retrace 两条曲线的重合情况；在tapping模式下，调节amplitude setpoint直到trace和retrace两条扫描线基本一致；优化 integral gain 和 proportional gain，调节扫描范围和扫描速率，并拍照，取得表征sirna/dna组装体纳米材料的形貌结构。6.根据权利要求1至3任一项所述dna自组装体原子力显微镜检测方法，其特征在于，按下述步骤：步骤一，制备sirna/dna四面体纳米材料：将dna 四面体的每条组装链上分别与sirna基因片段结合；步骤二，原子力显微镜表征sirna/dna四面体纳米材料的形貌，按下述步骤：（1）将试样sirna/dna四面体体沉积在基底上：对基底进行修饰使生物组装体与基底所带电性相反，先将3.5mmol／l mgcl2缓冲溶液稀释sirna/dna溶液至1 ng/μl；取100μl该溶液至硅片基底上，沉积20min，用纯水清洗，氮气氛吹干；（2）安装探针：选择 v 型氮化硅悬臂梁的探针；（3）调节激光：将激光光斑打至悬臂前端位置；（4）调节四象限检测器：调整head后部反光镜，使sum值最大；（5）将样品固定在样品托不锈钢小圆片上，并将样品托放入样品台上；（6）根据所选探针的探针盒上的参数f0范围填写start frequency 和 end frequency，单击auto tune选项寻找共振峰后退出tuning界面；（7）进针：调节扫描大小，选择合适的扫描范围，观察height 图中trace 和 retrace 两条曲线的重合情况；在tapping模式下，调节amplitude setpoint直到trace和retrace两条扫描线基本一致；优化 integral gain 和 proportional gain，调节扫描范围和扫描速率，并拍照，取得表征sirna/dna四面体纳米材料的形貌结构。
技术总结
本发明提供了一种DNA自组装体原子力显微镜检测方法，包括制备siRNA/DNA组装体纳米材料，原子力显微镜表征siRNA/DNA组装体纳米材料的形貌的方法，通过原子力显微镜在液相轻敲模式下表征siRNA/DNA组装体纳米颗粒形貌结构。可消除探针对样品造成的损伤并降低图像分辨率的横向力影响，扫描速度适中。同时液相模式有助于生物组装体在溶液状态下保持固有形貌，因此得到的形貌更接近于真实形貌。因此得到的形貌更接近于真实形貌。
技术研发人员：崔大祥 张迎 杨迪诚 朱君 徐艳 朱竞尧
受保护的技术使用者：上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司
技术研发日：2022.07.20
技术公布日：2022/11/11