一种克唑替尼起始物料中2-氨基-3-羟基吡啶的检测分析方法与流程

本发明涉及医药化工领域，更具体地是涉及一种克唑替尼起始物料中2-氨基-3-羟基吡啶的检测分析方法。

背景技术：

1、在克唑替尼起始物料中存在某杂质的衍生物为2-氨基-3-羟基吡啶，故需对2-氨基-3-羟基吡啶进行控制，因其结构为常规杂质，故其控制限度为0.1％，2-氨基-3-羟基吡啶结构式如下：

2、

3、文献报道的检测方法有气相色谱-质谱(gc-ms)、毛细管电泳-间接化学发光法(ce-cl)、超高效液相色谱-质谱(uhplc-ms)等，所用检测设备昂贵、样品前处理繁琐，不便于日常检测。因2-氨基-3-羟基吡啶的杂环结构有一定的紫外吸收，故采用高效液相色谱法联合紫外检测器或二极管阵列检测器进行方法研究。

技术实现思路

1、本发明目的在于提供一种克唑替尼起始物料中2-氨基-3-羟基吡啶的检测分析方法。所述分析方法是在高效液相色谱仪上进行的，采用十八烷基键合硅胶为填充剂的反相色谱柱，以磷酸盐缓冲液和有机溶剂作为流动相。液相二极管阵列检测器(dad)或紫外(uv)检测器进行梯度洗脱检测。

2、一种克唑替尼起始物料中2-氨基-3-羟基吡啶的检测分析方法，所述方法采用高效液相色谱法，色谱条件为：

3、供试品溶液的制备：取含有2-氨基-3-羟基吡啶的克唑替尼起始物料供试品用溶剂1溶解，并用流动相a稀释到最终浓度为0.5mg/ml～10mg/ml；

4、对照品溶液的制备：取2-氨基-3-羟基吡啶对照品，用溶剂2稀释，得到最终浓度为0.2μg/ml～1μg/ml；

5、所述的溶剂1为甲醇、乙醇、乙腈中的一种；

6、所述的溶剂2为缓冲盐溶液与甲醇的混合液；缓冲盐溶液与甲醇的体积比为5:1～10:1；

7、优选的，所述缓冲盐溶液的浓度为0.005mol/l～0.015mol/l；

8、优选的，所述缓冲盐溶液为磷酸盐缓冲液。

9、优选的，所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.005mol/l～0.015mol/l；

10、色谱柱：十八烷基键合硅胶为填充剂的反相色谱柱；

11、流动相：流动相a为磷酸盐缓冲溶液，流动相b为甲醇、乙腈中的一种；

12、流速：每分钟0.8ml～1.2ml；

13、柱温：30℃～40℃；

14、检测波长：300nm～350nm；

15、流动相采用以下方式梯度洗脱(液相二极管阵列检测器(dad)或紫外(uv)检测器进行梯度洗脱检测)：

16、0～2min，流动相a为95～100％，流动相b为0～5％；

17、2～10min，流动相a为90～100％，流动相b为0～10％；

18、10～15min，流动相a为10～30％，流动相b为70～90％；

19、15～20min，流动相a为10～30％，流动相b为70～90％；

20、20～20.1min，流动相a为95～100％，流动相b为0～5％；

21、20.1～30min，流动相a为95～100％，流动相b为0～5％。

22、本发明所述的时间和体积百分比表示在所述时间段内，流动相选择体积百分比中的某个值进行洗脱，例如0～10min时间段，流动相a为90～100％中某一值如为90％，流动相b为0～10％中某一值如为10％，而不是表示流动相a或者流动相b为动态变化过程。

23、即，在0～2min，流动相a在95～100％范围内，流动相b在0～5％范围内等度洗脱，流动相a与流动相b体积百分比总和为100％；

24、2～10min，流动相a在90～100％范围内，流动相b在0～10％范围内等度洗脱，流动相a与流动相b体积百分比总和为100％；

25、10～15min，流动相a在10～30％范围内，流动相b在70～90％范围内等度洗脱，流动相a与流动相b体积百分比总和为100％；

26、15～20min，流动相a在10～30％范围内，流动相b在70～90％范围内等度洗脱，流动相a与流动相b体积百分比总和为100％；

27、20～20.1min，流动相a在95～100％范围内，流动相在为0～5％范围内等度洗脱，流动相a与流动相b体积百分比总和为100％；

28、20.1～30min，流动相a在95～100％范围内，流动相在为0～5％范围内等度洗脱，流动相a与流动相b体积百分比总和为100％。

29、在一种具体的实施例中，流动相采用以下方式梯度洗脱(液相二极管阵列检测器(dad)或紫外(uv)检测器进行梯度洗脱检测)：

30、 时间(分钟) 流动相a(体积％) 流动相b(体积％) 0 98 2 2 98 2 10 90 10 15 20 80 20 20 80 20.1 98 2 30 98 2

31、本发明的检测操作可以按照常规操作，例如分别精密量取所述供试品溶液和对照品溶液各50μl，注入色谱仪，记录色谱图。

32、在一种具体的实施例中，所述的溶剂1为甲醇。

33、在一种具体的实施例中，所述的溶剂2中缓冲盐溶液与甲醇的体积比9:1，优选的，所述缓冲盐溶液为磷酸盐缓冲溶液，进一步优选的，所述磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.01mol/l。

34、在一种具体的实施例中，所述的色谱柱为以十八烷基键合硅胶为填充剂的反相色谱柱，规格为150mm*4.6mm，5μm。

35、在一种具体的实施例中，所述的流动相a为ph3.0的磷酸盐缓冲液，所述的磷酸盐缓冲液包含0.01mol/l的kh2po4。

36、在一种具体的实施例中，所述的流动相b为乙腈。

37、在一种具体的实施例中，所述的流速为每分钟1ml。

38、在一种具体的实施例中，所述的柱温为35℃。

39、在一种具体的实施例中，所述的检测波长为310nm。

40、在一种具体的实施例中，供试品溶液和对照品溶液各20μl，注入色谱仪。

41、本发明相对于现有技术的优势：

42、本方法简便快速，可有效分离克唑替尼起始物料与2-氨基-3-羟基吡啶，又可准确检测出2-氨基-3-羟基吡啶的残留量，峰的分离度好，无拖尾现象，为制定克唑替尼起始物料质量标准提供依据。

43、本方法专属性强、耐用性好，所用仪器设备及试剂均为常规物品，试验参数也是常规参数，无苛刻条件，一般实验室均能实现。