一种测定羟丙基四氢吡喃三醇非对映异构体比例的方法与流程

1.本发明涉及非对映异构体检测技术领域，具体涉及一种测定羟丙基四氢吡喃三醇非对映异构体比例的方法。


背景技术：

2.非对映异构体是指分子具有两个或多个手性中心，且分子间为非镜像的立体异构体。由于非对映异构体的分子结构相同，因此分子极性相似。
3.hplc法是一种准确度高、检测稳定的检测手段，在使用该方法对样品检测时，待测样品中各化合物的分离度需要满足需求，而由于非对映异构体的分子极性相近，因此，在采用hplc法对非对映异构体检测时，化合物的分离度低于1.5，不能实现基线完全分离，影响非对映异构体比例测定的准确性。
4.羟丙基四氢吡喃三醇是由两个非对映异构体组成的化合物，能够促进胶原蛋白合成、改善细纹、防衰老等，在化妆品中应用广泛。在羟丙基四氢吡喃三醇中，异构体的组成比例会影响产品的性能，因此，对其异构体检测具有重要意义，而在异构体检测中，分离度是影响异构体比例准确度的重要因素，因此，提供一种分离度高的检测方法具有重要意义。


技术实现要素：

5.针对现有技术的上述不足，本发明提供了一种测定羟丙基四氢吡喃三醇非对映异构体比例的方法，该方法中，色谱条件为：流动相组成为流动相a为正己烷，流动相b为无水乙醇；流动相比例为流动相a:流动相b=85:15。本发明提供的测定方法，具有操作简单、分离度高、流动相易制备的优点。使用该测定方法对羟丙基四氢吡喃三醇样品检测，其非对映异构体的峰型好、分离度大于1.5。
6.本发明的技术方案如下：一种测定羟丙基四氢吡喃三醇非对映异构体比例的方法，色谱条件为：流动相组成为流动相a为正己烷，流动相b为无水乙醇；流动相比例为流动相a:流动相b=85:15。
7.进一步的，上述方法中，色谱条件：色谱柱为硅胶表面涂覆有多糖淀粉的色谱柱，4.6
×
250mm，5μm；流速为0.9-1.0ml/min；柱温为25-30℃；检测器为elsd；蒸发室温度为40-50℃；漂移管温度为40-50℃；气体流速为1.8l/min。
8.进一步的，在上述方法中，使用的高效液相色谱器为shimadzu，20at。
9.进一步的，上述方法中，所述正己烷浓度和无水乙醇浓度均为体积浓度。
10.进一步的，所述色谱柱为y3，y3的填料类型为硅胶表面涂敷有直链淀粉——三（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）；采购自广东研创科技有限公司。
11.进一步的，上述方法中，进样量为10μl。
12.进一步的，流速为1.0ml/min，柱温为25℃，蒸发室温度为40℃，漂移管温度为40℃。
13.进一步的，上述方法的具体过程为：
（1）制备浓度为20mg/ml的对照品溶液：精确称取对照品置于50ml容量瓶中，用流动相b溶解，并定容至刻度，混匀，作为对照品溶液；（2）制备浓度为10mg/ml的样品溶液：精确称取样品置于50ml容量瓶中，用流动相b溶解，并定容至刻度，混匀，作为样品溶液；其中，对照品、样品的称样量均精确至0.0001g；（3）检测：以流动相b为空白溶液；将空白溶液、对照品溶液和样品溶液分别注入hplc中，记录非对映异构体的峰面积和分离度，计算峰面积百分比。
14.相对于现有技术，本发明的有益效果在于：1、本发明提供的测定方法，采用等梯度洗脱且流动相组成简单，易于操作和控制，适于广泛应用。
15.2、本发明提供的测定方法，能够对羟丙基四氢吡喃三醇中的两个非对映异构体有效分离，分离度大于1.5，提高对羟丙基四氢吡喃三醇非对映异构体比例测定的准确度，从而能够更准确的评价原材料质量；本发明方法还具有溶剂绿色、无污染的特点。
16.3、本发明提供的测定方法，具有操作简单、分离度高、流动相易制备的优点。使用该测定方法对羟丙基四氢吡喃三醇样品检测，其非对映异构体的峰型好、分离度大于1.5。
附图说明
17.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
18.图1为空白溶液的hplc图谱。
19.图2为标准溶液的hplc图谱。
20.图3为对照溶液的hplc图谱。
21.图4为样品溶液的hplc图谱。
具体实施方式
22.为了使本技术领域的人员更好地理解本发明中的技术方案，下面将结合本发明的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本发明保护的范围。
实施例
23.实验仪器及试剂：仪器：高效液相色谱仪，shimadzu，20at；分析天平，fa-124；上海舜宇恒平仪器；
色谱条件：色谱柱：y3，4.6
×
250mm，5μm，广东研创科技有限公司；y3的填料类型为硅胶表面涂敷有直链淀粉——三（3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯）；流动相：流动相a为正己烷，流动相b为无水乙醇；流动相a:流动相b=85:15；正己烷、无水乙醇均为色谱级；流动相流速：1.0ml/min；柱温：25℃；进样体积：10μl；检测器：elsd；蒸发室温度为40℃；漂移管温度为40℃；气体流速：1.8l/min。
24.采用上述仪器设备及色谱条件，对羟丙基四氢吡喃三醇非对称异构体比例进行测定，具体过程为：（1）标准溶液配制：称取羟丙基四氢吡喃三醇标准品50mg，于10ml容量瓶中，加无水乙醇溶解并定容至刻度，摇匀，作为标准储备溶液；准确移取上述标准储备溶液配制成浓度为0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mg
·
ml-1
的标准系列溶液。批号：20210501，含量90.60%（2）精确称取对照品1.0003g，置于50ml容量瓶中，用流动相b溶解，然后定容至刻度，混匀，作为对照品溶液；对照品为hr赫莲娜活颜修护舒缓滋养晚霜（3）供试品溶液配制：称取供试品适量（相当于羟丙基四氢吡喃三醇60mg，精确至0.0001g）置于25ml容量瓶中，加无水乙醇溶解并定容至刻度，摇匀。
25.（4）系统适应性溶液：精密吸取标准溶液（3 mg
·
ml-1
）10μl，按上述色谱条件检样，（β，s）和（β，r）构型分离良好，分离度大于1.5。
26.一、专属性取空白溶剂10μl，按上述色谱条件进样，结果表明，空白溶剂在待测组分出峰时间无干扰。
27.二、线性和线性范围分别取配制的标准系列溶液，按上述色谱条件进样，以标准系列溶液浓度的对数值为横坐标，（β，s）和（β，r）构型峰面积之和的对数值为纵坐标绘制标准曲线，结果见下表：浓度（mg/ml）浓度对数峰面积之和峰面积之和对数0.3413-0.46728683916.4580.6826-0.16668119926.8331.36520.135171827147.2352.04780.311301063717.4792.73040.436430615567.634其线性回归方程为y=1.3117x+7.0621，r2=0.9997，线性范围为0.5-4.0/ mg
·
ml-1
。
28.三、精密度试验精密吸取标准溶液（3 mg
·
ml-1
）10μl，按上述色谱条件连续进样6次，记录色谱图，计算（β，s）和（β，r）构型峰面积的rsd分别为0.15%、0.14%。
29.四、检出限取标准溶液（0.5mg
·
ml-1
）进行稀释，按上述色谱条件进样，以信噪比s/n=3作为检出浓度，该方法的检出限为1.3652μg/ml。
30.五、检测：以流动相b为空白溶液；将空白溶液、标准品溶液、对照品溶液和样品溶液分别注入hplc中，测定结果见图1-图4；记录两个非对映异构体的峰面积和分离度，计算峰面积百分比。
31.结合图1可知，仪器稳定，空白溶液不会对样品测定产生影响；结合图2可知，对应的出峰位置；结合图3可知，对照品溶液中，两个非对映异构体比例55:45，分离度为3.77；结合图4可知，样品溶液中，两个非对映异构体比例62:38，分离度为4.03；结合本发明的测定结果可知，该方法检测样品中的非对映异构体比例能实现完全基线分离，能够准确测定羟丙基四氢吡喃三醇中的非对映异构体比例。
32.尽管通过参考优选实施例的方式对本发明进行了详细描述，但本发明并不限于此。在不脱离本发明的精神和实质的前提下，本领域普通技术人员可以对本发明的实施例进行各种等效的修改或替换，而这些修改或替换都应在本发明的涵盖范围内/任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应所述以权利要求的保护范围为准。