一种心脏停搏液中杂质的检测方法与流程

本发明涉及医药检测领域，具体涉及一种心脏停搏液中杂质的检测方法。

背景技术：

1、心脏停搏液(cardioplegia)是一种在心脏直视手术中经冠状动脉口或冠状静脉窦口灌注心脏、起化学诱导作用、使心脏迅速停跳，增加心脏手术的安全性，并能保持一个完全无血的操作视野、松弛的肌肉以及避免空气栓塞，提高心脏手术成功率、且是一种成分复杂、生产工艺关键工序多、产品质量要求高的心血管疾病手术治疗药物。其药物杂质多达十余个，每一个杂质极有可能造成药物的外观性状、理化参数发生改变，甚至影响药物的稳定性，使药物活性降低而毒副作用增加，严重危害药物的产品质量和患者的用药安全,药物杂质控制成为产品技术难点之一。

2、盐酸利多卡因(lidocaine hydrochloride)是心脏停搏液活性成分之一，心脏停搏液的系统杂质研究尚无文献报道，根据盐酸利多卡因的结构及合成工艺，结合相关文献及研究资料确定其杂质中含有2，6-二甲基苯胺遗传毒性杂质、2-(二乙酰基)-n-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺潜在遗传毒性杂质，在小分子化学药物一致性评价中，遗传毒性杂质因其毒性危害大，在极微量水平即能与体内dna分子反应诱发dna突变或致癌，遗传毒性杂质在药物制剂中主要来源于原料工艺及原辅料降解，对制剂中高风险杂质进行系统研究十分必要，是药物安全性评价的重要内容之一。但目前还没有相关心脏停搏液中与盐酸利多卡因有关的杂质的质量控制方法的研究。

技术实现思路

1、本发明提供了一种心脏停搏液中杂质的检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，具体步骤如下：

2、a、供试品溶液制备：取心脏停搏液，用钠型固相萃取柱过滤，即得；

3、b、对照品溶液的制备：取杂质对照品，加体积比80～40：20～60的磷酸二氢钾水溶液-乙腈溶解，再加水稀释成溶液，即得；

4、c、分别吸取供试品溶液与对照品溶液注入色谱仪，色谱条件如下：

5、色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以磷酸二氢钾水溶液为流动相a，以乙腈为流动相b；梯度洗脱程序为：

6、

7、进一步地，步骤a)所述钠型固相萃取柱为dionex onguardtm ii na柱或效能相当的固相萃取柱。

8、进一步地，步骤b)所述杂质对照品、磷酸二氢钾水溶液-乙腈与水的质量体积比为10～150μg：1ml：99ml。

9、更进一步地，所述杂质对照品为5-hmf(5-羟甲基糠醛)、2，6-二甲基苯胺、2-(二乙酰基)-n-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、n-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、n-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙胺基)乙酰胺、2-2'-(杂二基)双[n-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺]、2-(二乙胺基)-n-(2，3-二甲基苯基)乙酰胺、n-(2，4-二甲基苯基)-2-(异丙胺基)乙酰胺、n-氯乙酰-2，6-二甲基苯胺、2-(二乙胺基)-n-(2，4-二甲基苯基)乙酰胺、2-(二乙胺基)-n-(2，5-二甲基苯基)乙酰胺、n-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基甲胺基)乙酰胺任意一种或多种；

10、所述5-hmf在对照品溶液中的浓度为0.5～1.5μg/ml，其他杂质对照品在对照品溶液中的浓度各为0.1～0.5μg/ml，优选，5-hmf在对照品溶液中的浓度为1.25μg/ml，其他杂质对照品在对照品溶液中的浓度各为0.28μg/ml。

11、进一步地，步骤b)所述磷酸二氢钾水溶液-乙腈的体积比为50：50；所述磷酸二氢钾水溶液的浓度为2～8g/l，ph值7.5～8.5，优选磷酸二氢钾水溶液的浓度为4.85g/l，ph值8.0。

12、进一步地，步骤c)所述色谱柱为agilent 5tc-c18(2)4.6mm×150mm，5μm；所述流动相a为ph值7.5～8.5的4～8g/l磷酸二氢钾水溶液，优选ph值8.0的4.85g/l磷酸二氢钾水溶液；所述色谱条件中进样量为20～100μl，流速为1.0±0.1ml/min，柱温为30±2℃，波长为230±2nm，优选进样量为50μl，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，波长为230nm。

13、进一步地，所述供试品溶液的色谱图中呈现与对照品色谱图中杂质对照品色谱峰保留时间相对应的色谱峰，即心脏停搏液中含有相应杂质。

14、更进一步地，所述心脏停搏液中含有相应杂质的量按外标法以峰面积计算，优选，按照如下公式计算杂质：

15、

16、式中：cr为对照品溶液中杂质的浓度(μg/ml)；ar为对照品溶液中杂质的峰面积；ax为供试品溶液中杂质峰的面积。

17、本发明通过实验及验证，建立了hplc检测方法，通过该方法能够准确无误的检测到心脏停搏液中的2，6-二甲基苯胺遗传毒性杂质、2-(二乙酰基)-n-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺潜在遗传毒性杂质及其他10种杂质在制剂中的百分含量，足以控制心脏停搏液药品的质量，加强人体用药安全。

18、针对心脏停搏液中高达十二种的药物杂质，采用本发明中的检测方法，均能有效分离、检测出杂质含量结果，不仅能够严格控制药品质量，还节约了人力、物力、财力，为制药产业的高效、节能、环保可持续性发展提供了有力保障。

19、显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。

20、以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。

技术特征：

1.一种心脏停搏液中杂质的检测方法，其特征在于：它是采用高效液相色谱法检测，具体步骤如下：

2.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤a)所述钠型固相萃取柱为dionexonguardtmii na柱或效能相当的固相萃取柱。

3.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤b)所述杂质对照品、磷酸二氢钾水溶液-乙腈与水的质量体积比为10～150μg：1ml：99ml。

4.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述杂质对照品为5-羟甲基糠醛、2，6-二甲基苯胺、2-(二乙酰基)-n-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、n-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺、n-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙胺基)乙酰胺、2-2'-(杂二基)双[n-(2，6-二甲基苯基)乙酰胺]、2-(二乙胺基)-n-(2，3-二甲基苯基)乙酰胺、n-(2，4-二甲基苯基)-2-(异丙胺基)乙酰胺、n-氯乙酰-2，6-二甲基苯胺、2-(二乙胺基)-n-(2，4-二甲基苯基)乙酰胺、2-(二乙胺基)-n-(2，5-二甲基苯基)乙酰胺、n-(2，6-二甲基苯基)-2-(乙基甲胺基)乙酰胺任意一种或多种。

5.如权利要求4所述的检测方法，其特征在于：所述5-羟甲基糠醛在对照品溶液中的浓度为0.5～1.5μg/ml，其他杂质对照品在对照品溶液中的浓度各为0.1～0.5μg/ml；优选，5-hmf在对照品溶液中的浓度为1.25μg/ml，其他杂质对照品在对照品溶液中的浓度各为0.28μg/ml。

6.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤b)所述磷酸二氢钾水溶液-乙腈的体积比为50：50；所述磷酸二氢钾水溶液的浓度为2～8g/l，ph值7.5～8.5，优选磷酸二氢钾水溶液的浓度为4.85g/l，ph值8.0。

7.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤c)所述色谱柱为agilent 5tc-c18(2)4.6mm×150mm，5μm；所述流动相a为ph值7.5～8.5的4～8g/l磷酸二氢钾水溶液，优选ph值8.0的4.85g/l磷酸二氢钾水溶液。

8.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：步骤c)所述色谱条件中进样量为20～100μl，流速为1.0±0.1ml/min，柱温为30±2℃，波长为230±2nm，优选进样量为50μl，流速为1.0ml/min，柱温为30℃，波长为230nm。

9.如权利要求1所述的检测方法，其特征在于：所述供试品溶液的色谱图中呈现与对照品色谱图中杂质对照品色谱峰保留时间相对应的色谱峰，即心脏停搏液中含有相应杂质。

10.如权利要求9所述的检测方法，其特征在于：所述心脏停搏液中含有相应杂质的量按外标法以峰面积计算，优选，按照如下公式计算杂质：

技术总结
本发明公开了一种心脏停搏液中杂质的检测方法，它是采用高效液相色谱法检测，具体步骤如下：a、供试品溶液制备：取心脏停搏液，用钠型固相萃取柱过滤，即得；b、对照品溶液的制备：取杂质对照品，加体积比80～40：20～60的磷酸二氢钾水溶液‑乙腈溶解，即得；c、分别吸取供试品溶液和对照品溶液注入色谱仪。采用本发明中的检测方法，能有效分离、检测出杂质,并测定杂质含量，使药品质量得到严格控制，还节约了人力、物力、财力，为制药产业的高效、节能、环保可持续性发展提供了有力保障。

技术研发人员：程龙,黄洪,林世松,刘亚彪,李长生,李华,唐莉
受保护的技术使用者：成都青山利康药业股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/3/11