一种赤小豆配方颗粒及赤小豆药材的质量控制方法与流程

本发明属于中药鉴别，具体涉及一种赤小豆配方颗粒及赤小豆药材的质量控制方法。

背景技术：

1、本发明中所述赤小豆为豆科植物赤小豆vigna umbellata ohwi et ohashi或赤豆vigna angularis ohwi et ohashi的干燥成熟种子。味甘酸，性平，无毒。具有利水消肿，解毒排脓的功效，临床上常用于水肿胀满，脚气肢肿，黄疽尿赤，风湿热痹，痈疮疖毒，肠痈腹痛等症状。

2、目前法定记载的质量标准规定性状鉴别、显微鉴别、薄层鉴别、水分测定、总灰分测定及浸出物。关于赤小豆配方颗粒指纹图谱鉴别领域几乎没有任何报道，关于含量测定的研究也较少，多是关于酚类、黄酮类的含量测定。

3、穆合塔尔·卡德尔哈孜，王海涛，屠鹏飞，姜勇，rp-hplc测定中药赤小豆中儿茶素-7-o-β-d-吡喃葡萄糖苷的含量，公开色谱条件为：graceprevail tm c18column(4.6×250mm，5μm)；流动相乙腈(a)-水溶液(b)(6:94)；流速1.0ml/min；检测波长230nm；柱温30℃；进样量10μl，色谱分析时间23min。赤小豆药材含量测定图谱如图1所示，其中a为儿茶素-7-o-β-d-吡喃葡萄糖苷对照品，b为赤小豆样品。但是只针对于赤小豆药材，物质基础与配方颗粒存在差异。

4、因此如何提供一种赤小豆配方颗粒及赤小豆药材的质量控制方法，使其可以同时进行特征图谱的构建与含量的测定，成为目前亟待解决的问题。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种赤小豆配方颗粒及赤小豆药材的质量控制方法，可同时进行特征图谱的构建与含量的测定。

2、为达到此发明目的，本发明采用以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供一种赤小豆配方颗粒及赤小豆药材的质量控制方法，所述质量控制方法包括以下步骤：

4、(1)将赤小豆配方颗粒或赤小豆药材进行提取，配制成供试品溶液；将尿苷和水混合，配制成对照品溶液；

5、(2)将步骤(1)得到的供试品溶液与对照品溶液分别采用高效液相色谱检测，得到赤小豆配方颗粒或赤小豆药材中尿苷的含量及赤小豆配方颗粒或赤小豆药材的特征图谱。

6、本发明选取了核苷中的尿苷作为指标成分。尿苷是构成动物细胞核酸的有关成分，能提高机体抗体水平。动物试验表明尿苷和肌苷等合用能促进心肌细胞代谢，加速蛋白质、核酸生物合成和能量产生，可促进和改善脑细胞代谢。尿苷可以治疗的疾病还包括帕金森氏症，阿尔茨海默氏症，躁郁症等。基于动物的研究主要集中在尿苷与omega-3脂肪酸结合应用抗抑郁的作用，已证实其效果可以与传统药物相媲美。

7、为了更全面的评价赤小豆配方颗粒的质量，本研究采用hplc针对赤小豆配方颗粒建立了特征图谱及含量测定方法。利用3批赤小豆配方颗粒建立对照图谱，进行共有峰的确定，同时利用尿苷对照品进行比对，指认了特征峰，以尿苷为含测峰，并进行特征图谱和含量测定方法学验证。实验结果表明本发明提供的方法重复性好，准确度高，耐用性佳，提供的信息丰富，能够为规范赤小豆配方颗粒质量提供更加全面有效的质量控制手段。用本发明提供的方法对3批赤小豆药材进行验证，结果证明方法同样适用，对赤小豆药材提供了有效的质量控制手段。此外，本研究采用hplc针对赤小豆建立了尿苷含量测定方法，以尿苷对照品为含测指标，并进行方法学验证。实验结果表明该方法重复性好。

8、在本发明中，步骤(1)中，所述供试品溶液的配制具体包括以下步骤：将赤小豆配方颗粒或赤小豆药材与乙醇水溶液混合，超声，过滤，得到供试品溶液。

9、在本发明中，所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为5-15％(例如可以是5％、7％、9％、11％、13％、15％等)。

10、优选地，所述赤小豆配方颗粒和乙醇水溶液的固液比为(0.5-1.5):15g/ml，其中“0.5-1.5”可以是0.5、0.7、0.9、1.1、1.3、1.5等。

11、优选地，所述赤小豆药材和乙醇水溶液的固液比为(1.0-2.0):15g/ml，其中“1.0-2.0”可以是1.0、1.3、1.5、1.7、1.9、2.0等。

12、在本发明中，所述超声的功率为200-300w(例如可以是200w、220w、240w、260w、280w、300w等)，所述超声的频率为30-50khz(例如可以是30khz、32khz、34khz、36khz、38khz、43khz、46khz、49khz、50khz等)，所述超声的时间为20-50min(例如可以是20min、23min、26min、29min、30min、33min、36min、39min、43min、46min、49min、50min等)。

13、在本发明中，步骤(1)中，所述尿苷和水的固液比为(20-40):1μg/ml，其中，“20-40”可以是20、23、26、29、33、36、39、40等。

14、在本发明中，步骤(2)中，所述高效液相色谱检测中色谱柱采用的填充剂包括耐纯水型十八烷基硅烷键合硅胶。

15、优选地，步骤(2)中，所述高效液相色谱检测中柱温为28-32℃(例如可以是28℃、29℃、30℃、31℃、32℃等)。

16、在本发明中，步骤(2)中，所述高效液相色谱检测中检测波长为254nm。

17、优选地，步骤(2)中，所述高效液相色谱检测中进样量为8-12μl(例如可以是8μl、9μl、10μl、11μl、12μl等)。

18、在本发明中，所述高效液相色谱检测中以甲醇为流动相a，以0.1％-0.3％(例如可以是0.1％、0.15％、0.2％、0.25％、0.3％等)乙酸水溶液为流动相b。

19、在本发明中，步骤(2)中，所述高效液相色谱检测中按照下表进行梯度洗脱。

20、 时间(min) 流动相a 流动相b 0-28 0→2 100→98 28-35 2→4 98→96 35-44 4→8 96→92 44-56 8→12 92→88

21、优选地，步骤(2)中，所述高效液相色谱检测中，0-35min，流动相的流速为0.5-0.7ml/min；35-44min，流动相的流速为(0.5-0.7)→(0.8-1.0)ml/min；44-56min，流动相的流速为0.8-1.0ml/min；

22、其中，“0.5-0.7ml/min”可以是0.5ml/min、0.55ml/min、0.6ml/min、0.65ml/min、0.7ml/min等，

23、“0.8-1.0ml/min”可以是0.8ml/min、0.85ml/min、0.9ml/min、0.95ml/min、1ml/min等。

24、在本发明中，所述赤小豆配方颗粒或赤小豆药材共有4个特征峰，按照出峰时间由短至长依次为峰1、峰2、峰3和峰4，以峰2为s峰，峰1-4的相对保留时间在规定值的±10％之内，所述规定值分别为：0.27、1、2.01和2.21；其中峰2为尿苷。

25、赤小豆配方颗粒中尿苷的含量不得低于0.6mg/g(例如可以是0.6mg/g、0.7mg/g、0.8mg/g、0.9mg/g、1mg/g、1.1mg/g、1.2mg/g等)。赤小豆药材中尿苷的含量不得低于0.1mg/g(例如可以是0.1mg/g、0.3mg/g、0.5mg/g、0.7mg/g、0.9mg/g、1mg/g、1.1mg/g等)。

26、本发明要解决的技术问题：本发明提供一种赤小豆配方颗粒及赤小豆药材的hplc特征图谱的构建方法及含量测定方法，同一种方法既可作为特征图谱鉴别又可作为含量测定方法。本发明提供的方法效率高，方法简单，效果好，可加强专属性鉴别和含量测定质量控制，从而对赤小豆配方颗粒及赤小豆药材进行全面质量控制。

27、相对于现有技术，本发明具有以下有益效果：

28、(1)本发明构建了赤小豆配方颗粒及赤小豆药材的hplc特征图谱，充分展示了赤小豆配方颗粒及赤小豆药材的化学成分特征；

29、(2)本发明构建的特征图谱及含量测定方法效率高，方法稳定，精密度高，重现性较好；

30、(3)本发明建立的赤小豆配方颗粒及赤小豆药材的hplc特征图谱，可以用来鉴别赤小豆配方颗粒及赤小豆药材，为赤小豆配方颗粒及赤小豆药材的鉴别提供一种可靠的检测方法；

31、(4)本发明建立的赤小豆配方颗粒及赤小豆药材的hplc含量测定方法，可以用来测定赤小豆配方颗粒及赤小豆药材中尿苷的含量，为赤小豆配方颗粒及赤小豆药材提供一种快速、可靠的检测方法，能够在一定程度上完善赤小豆配方颗粒及赤小豆药材的相关质量标准，为更好的开发利用赤小豆中药材提供科学指导。