一种气相色谱法串联质谱法检测迷迭香叶中16种塑化剂的方法与流程

1.本发明涉及塑化剂检测技术领域，具体为一种气相色谱法串联质谱法检测迷迭香叶中16种塑化剂的方法。


背景技术：

2.邻苯二甲酸酯又称酞酸酯，是邻苯二甲酸形成酯的统称，是一类环境激素类物质，由于人类的大量生产和使用，目前已广泛存在于空气、水体、土壤、食品等介质中，成为地球上最广泛存在的环境污染物之一，这类物质可通过呼吸、饮食和皮肤接触进入人类和动物体内，发挥着类似雌性激素的作用，具有不同程度的急慢性毒性、生态毒性、致畸、致突变等毒性，邻苯二甲酸酯具有亲脂性和难降解的特性，可通过食物链的富集造成对人类的危害；
3.迷迭香，是双子叶植物纲、唇形科、迷迭香属植物灌木，性喜温暖气候，原产欧洲地区和非洲北部地中海沿岸，远在曹魏时期就曾引种中国，园林中偶有应用，从迷迭香的花和叶子中能提取具有优良抗氧化性的抗氧化剂和迷迭香精油，迷迭香抗氧化剂，广泛用于医药、油炸食品、富油食品及各类油脂的保鲜保质，而迷迭香香精则用于香料、空气清新剂、驱蚁剂以及杀菌、杀虫等日用化工业。
4.随着迷迭香在日常生活中越来越广泛的应用，人类接触的迷迭香也越来越多，但是迷迭香中存留的塑化剂是否合格却得不到很好的检测，导致采用常规方法定性和定量测量迷迭香中塑化剂含量变得非常困难且精确度差


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种气相色谱法串联质谱法检测迷迭香叶中16种塑化剂的方法，以解决技术中的上述不足之处。
6.为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种气相色谱法串联质谱法检测迷迭香叶中16种塑化剂的方法，包括以下步骤：
7.(1)塑化剂的标准工作溶液配置
8.步骤a：取16种塑化剂标准储备溶液，配制得到不同质量浓度的混合标准工作溶液，并经气相、质谱ms测定，进行质谱离子碎片峰的确证；
9.(2)迷迭香叶中16种塑化剂的定性检测
10.步骤b：称取0.5g迷迭香叶样品，加入0.3ml水使样品湿润，后加入2ml正己烷，进行涡旋混合3～5mi n后，通过超声萃取30mi n，之后取上层有机相，重复上述步骤两次，即可得到两份有机相，之后合并两份有机相，得到迷迭香叶提取液；
11.步骤c：玻璃carb-nh3小柱安装在固相萃取装置上，加入5.0ml色谱纯正己烷活化，后将所述的迷迭香叶提取液转移到固相萃取柱上端，进行萃取富集，其中，提取液流速为1～2ml/mi n；
12.步骤d：萃取富集完毕后，加入5ml色谱纯正己烷，对小柱进行洗脱，洗脱液流速为1
～2ml/mi n，通过正己烷洗脱，来排除迷迭香叶中的色素和迷迭香酸对塑化剂检测的干扰；
13.步骤e：抽干后的小柱下接10.0ml具塞刻度管，以5.0ml色谱纯乙腈分两次洗脱，玻璃carb-nh3固相萃取柱填料始终保持湿润状态，收集全部流出液，在40℃条件下氮气流吹至完全干燥，准确加入1ml正己烷复溶，得到用于气相色谱-质谱检测的进样液；
14.步骤f：迷迭香叶中16种塑化剂定性结果的判定
15.如在进样液在经质谱离子碎片峰的确证过程中，同时满足下述条件：(i)出现至少一种质量色谱峰保留时间与混合标准溶液的一致；(i i)该色谱法所对应的相对丰度与混合标准工作溶液在该保留时间的一致；(i i i)检测到的定量离子和定性离子这两个离子的丰度比与混合标准工作溶液在偏差范围内一致，则判定：迷迭香叶中含有塑化剂；
16.如进样液在经质谱离子碎片峰的确证过程中，满足条件(i)、(i i)、(i i i)中的任意一种或者是任意两种，则判定迷迭香叶中不含有塑化剂；
17.其中允许保留时间偏差
±
0.2mi n，相对丰度偏差为≤20％；
18.通过本次定性检测来检测迷迭香叶中含有或没有塑化剂，当检测出迷迭香叶中没有塑化剂时，检测结束，当迷迭香叶中含有塑化剂时，转步骤(3)；
19.(3)迷迭香叶中16种塑化剂的定量检测
20.gc-ms定量检测，其步骤如下：取16种塑化剂对照品储备液，精确配制一系列不同质量浓度的混合标准工作溶液，在气相色谱质谱仪设定的条件下分别进行测定，以各物质定量离子峰面积的平均值y对被测组分的质量浓度x，进行线性回归，得到回归方程、相关系数和线性范围；
21.其中，以信噪比(s/n)》3对应的浓度为检出限，(s/n)》10对应的浓度作为定量限，用线性方程对样品进行定量，如样品中塑化剂的响应值在仪器检测的线性范围内，则含有塑化剂，线性范围为20-1000(μg/l)。
22.作为本发明一种优选的方案，所述气相条件为：
23.色谱柱：vf-1701ms色谱柱(30m
×
0.25mm
×
0.25μm)；
24.进样口温度：280℃；
25.载气：高纯氦气，纯度≥99.999％；
26.毛细管柱流量：1.00ml/mi n；
27.进样方式：分流进样；
28.分流比：10:1；
29.进样量：1μl；
30.定量方法：外标法；
31.升温程序：80℃保持0mi n，以20℃/mi n的升温速度升至200℃，保持0mi n，以10℃/mi n的升温速度升至220℃，保持8.00mi n，以5℃/mi n的升温速度升至240℃，保持0mi n，以10℃/mi n的升温速度升至260℃，保持3mi n，以5℃/mi n的升温速度升至280℃，保持5mi n。
32.作为本发明一种优选的方案，所述质谱ms条件：
33.传输线温度：280℃；
34.电离方式：e i；
35.离子源温度：230℃；
36.四级杆温度：130℃；
37.采集类型：s i m模式。
38.作为本发明一种优选的方案，所述16种塑化剂标准储备溶液分别为邻苯二甲酸二甲酯标液、邻苯二甲酸二乙酯标液、邻苯二甲酸二异丁酯标液、邻苯二甲酸二丁酯标液、邻苯二甲酸二甲氧基乙酯标液、邻苯二甲酸二-4-甲基-2-戊酯标液、邻苯二甲酸双-2-乙氧基乙酯标液、邻苯二甲酸二戊酯标液、邻苯二甲酸二己酯标液、邻苯二甲酸丁基苄基酯标液、邻苯二甲酸二丁氧基乙酯标液、邻苯二甲酸二环己酯标液、邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯标液、邻苯二甲酸二苯酯标液、邻苯二甲酸二正辛酯标液和邻苯二甲酸二壬酯标液。
39.作为本发明一种优选的方案，在步骤a中配制得到的混合标准工作溶液的梯度质量浓度分别为20μg/l、5g/l、100μg/l、200μg/l、500μg/l和1000μg/l。
40.作为本发明一种优选的方案，在步骤b中称取迷迭香叶时重量精确至0.1
㎎
。
41.作为本发明一种优选的方案，还包括有空白组迷迭香混合工作溶液，在空白组迷迭香混合工作溶液中按质量比为10:1的比例加入浓度为0.200
㎎
/
㎏
的16种塑化剂标准溶液，得到的混合液重复测定6次，计算回收率和精密度，得到回收率和精密度的平均值。
42.与现有技术相比，本发明的有益效果是：将迷迭香叶样品先经少量水浸泡，后经正己烷提取，经carb-nh3玻璃小柱富集，乙腈洗脱，定性检测，整个过程操作简单，可对迷迭香叶样品中塑化剂实现一定程度的富集，并排除可能存在的干扰，检测灵敏度高，结果可靠，可准确实现迷迭香叶中塑化剂的检测。
附图说明
43.图1为本实施例中各种类的塑化剂所对应的保留时间、定量离子以及定性离子参数表；
44.图2为本实施例中gc-ms定量检测中各种类的回归方程、相关系数和线性范围统计表；
45.图3为本实施例中标准混合溶液的分子离子峰的强度和保留时间之间关系的质谱图；
46.图4为本实施例中在空白组迷迭香样品添加相同浓度的塑化剂标准混合溶液后对应的回收率和相对标准偏差的值统计表。
具体实施方式
47.为了对本发明的技术方案和实现方式做出更清楚地解释和说明，以下介绍实现本发明技术方案的几个优选的具体实施例。
48.下文的描述本质上仅是示例性的而并非意图限制本公开、应用及用途。应当理解，在所有这些附图中，相同或相似的附图标记指示相同的或相似的零件及特征。各个附图仅示意性地表示了本公开的实施方式的构思和原理，并不一定示出了本公开各个实施方式的具体尺寸及其比例。在特定的附图中的特定部分可能采用夸张的方式来图示本公开的实施方式的相关细节或结构，本文所引用的各种出版物、专利和公开的专利说明书，其公开内容通过引用整体并入本文，下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例。
49.在本发明的描述中，除非另有明确的规定和限定，术语“第一”、“第二”仅用于描述的目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性；除非另有规定或说明，术语“多个”是指两个或两个以上；术语“连接”、“固定”等均应做广义理解，例如，“连接”可以是固定连接，也可以是可拆卸连接；可以是直接相连，也可以通过中间媒介间接相连。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。
50.本说明书的描述中，需要理解的是，本技术实施例所描述的“上”、“下”、“左”、“右”等方位词是以附图所示的角度来进行描述的，不应理解为对本技术实施例的限定。此外，在上下文中，还需要理解的是，当提到一个元件连接在另一个元件“上”或者“下”时，其不仅能够直接连接在另一个元件“上”或者“下”，也可以通过中间元件间接连接在另一个元件“上”或者“下”。
51.实施例
52.参照说明书附图1-4，本发明实施例提供一种气相色谱法串联质谱法检测迷迭香叶中16种塑化剂的方法，包括以下步骤：
53.(1)塑化剂的标准工作溶液配置
54.步骤a：取16种塑化剂标准储备溶液，配制得到不同质量浓度的混合标准工作溶液，并经气相、质谱ms测定，进行质谱离子碎片峰的确证；
55.(2)迷迭香叶中16种塑化剂的定性检测
56.步骤b：称取0.5g迷迭香叶样品，加入0.3ml水使样品湿润，后加入2ml正己烷，进行涡旋混合3～5mi n后，通过超声萃取30mi n，之后取上层有机相，重复上述步骤两次，即可得到两份有机相，之后合并两份有机相，得到迷迭香叶提取液；
57.步骤c：玻璃carb-nh3小柱安装在固相萃取装置上，加入5.0ml色谱纯正己烷活化，后将所述的迷迭香叶提取液转移到固相萃取柱上端，进行萃取富集，其中，提取液流速为1～2ml/mi n；
58.步骤d：萃取富集完毕后，加入5ml色谱纯正己烷，对小柱进行洗脱，洗脱液流速为1～2ml/mi n，通过正己烷洗脱，来排除迷迭香叶中的色素和迷迭香酸对塑化剂检测的干扰；
59.步骤e：抽干后的小柱下接10.0ml具塞刻度管，以5.0ml色谱纯乙腈分两次洗脱，玻璃carb-nh3固相萃取柱填料始终保持湿润状态，收集全部流出液，在40℃条件下氮气流吹至完全干燥，准确加入1ml正己烷复溶，得到用于气相色谱-质谱检测的进样液；
60.步骤f：迷迭香叶中16种塑化剂定性结果的判定
61.如在进样液在经质谱离子碎片峰的确证过程中，同时满足下述条件：(i)出现至少一种质量色谱峰保留时间与混合标准溶液的一致；(i i)该色谱法所对应的相对丰度与混合标准工作溶液在该保留时间的一致；(i i i)检测到的定量离子和定性离子这两个离子的丰度比与混合标准工作溶液在偏差范围内一致，则判定：迷迭香叶中含有塑化剂；
62.如进样液在经质谱离子碎片峰的确证过程中，满足条件(i)、(i i)、(i i i)中的任意一种或者是任意两种，则判定迷迭香叶中不含有塑化剂；
63.其中允许保留时间偏差
±
0.2mi n，相对丰度偏差为≤20％；
64.通过本次定性检测来检测迷迭香叶中含有或没有塑化剂，当检测出迷迭香叶中没有塑化剂时，检测结束，当迷迭香叶中含有塑化剂时，转步骤(3)；
65.(3)迷迭香叶中16种塑化剂的定量检测
66.gc-ms定量检测，其步骤如下：取16种塑化剂对照品储备液，精确配制一系列不同质量浓度的混合标准工作溶液，在气相色谱质谱仪设定的条件下分别进行测定，以各物质定量离子峰面积的平均值y对被测组分的质量浓度x，进行线性回归，得到回归方程、相关系数和线性范围；
67.其中，以信噪比(s/n)》3对应的浓度为检出限，(s/n)》10对应的浓度作为定量限，用线性方程对样品进行定量，如样品中塑化剂的响应值在仪器检测的线性范围内，则含有塑化剂，线性范围为20-1000(μg/
68.l)；
69.通过定量检测可确认原材料迷迭香叶中各种塑化剂的含量，对后续提取产物中塑化剂含量做把控，通过保留时间、定量离子、定性离子、丰度比来确定具体的塑化剂种类，具体种类为16中塑化剂中的一种或者多种。
70.进一步的，所述气相条件为：
71.色谱柱：vf-1701ms色谱柱(30m
×
0.25mm
×
0.25μm)；
72.进样口温度：280℃；
73.载气：高纯氦气，纯度≥99.999％；
74.毛细管柱流量：1.00ml/m i n；
75.进样方式：分流进样；
76.分流比：10:1；
77.进样量：1μl；
78.定量方法：外标法；
79.升温程序：80℃保持0mi n，之后以20℃/mi n的升温速度升至200℃，保持0mi n，以10℃/mi n的升温速度升至220℃，保持8.00m i n，之后以5℃/m i n的升温速度升至240℃，保持0mi n，以10℃/mi n的升温速度升至260℃，保持3mi n，之后以5℃/mi n的升温速度升至280℃，保持5mi n，其中，保持0mi n的意思为不保持该温度而立即升温。
80.进一步的，所述质谱ms条件：
81.传输线温度：280℃；
82.电离方式：e i；
83.离子源温度：230℃；
84.四级杆温度：130℃；
85.采集类型：s i m模式。
86.进一步的，16种塑化剂标准储备溶液分别为邻苯二甲酸二甲酯标液、邻苯二甲酸二乙酯标液、邻苯二甲酸二异丁酯标液、邻苯二甲酸二丁酯标液、邻苯二甲酸二甲氧基乙酯标液、邻苯二甲酸二-4-甲基-2-戊酯标液、邻苯二甲酸双-2-乙氧基乙酯标液、邻苯二甲酸二戊酯标液、邻苯二甲酸二己酯标液、邻苯二甲酸丁基苄基酯标液、邻苯二甲酸二丁氧基乙酯标液、邻苯二甲酸二环己酯标液、邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯标液、邻苯二甲酸二苯酯标液、邻苯二甲酸二正辛酯标液和邻苯二甲酸二壬酯标液。
87.进一步的，在步骤a中配制得到的混合标准工作溶液的梯度质量浓度分别为20μg/l、5g/l、100μg/l、200μg/l、500μg/l和1000μg/l。
88.进一步的，还包括有空白组迷迭香混合工作溶液，在空白组迷迭香混合工作溶液
中按质量比为10:1的比例加入浓度为0.200
㎎
/
㎏
的16种塑化剂标准溶液，得到的混合液重复测定6次，计算回收率和精密度，得到回收率和精密度的平均值，平均值结果如图4所示。
89.进一步的，在步骤b中称取迷迭香叶时重量精确至0.1
㎎
。
90.需要注意的是，以上列举的仅为本发明的具体实施例，显然本发明不限于以上实施例，随之有着许多的类似变化。本领域的技术人员如果从本发明公开的内容直接导出或联想到的所有变形，均应属于本发明的保护范围。
91.以上仅为本发明的较佳实施例而已，并非用于限定本发明的保护范围。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。