用于检测血浆和脑脊液中的神经丝轻链的方法

本公开内容涵盖了定量且分析各种神经丝轻链种类的方法，及其测量神经元损害、告知神经退行性疾病的诊断、选择患者用于进一步诊断测试、以及指导治疗决策的用途。

背景技术：

1、神经丝是有髓鞘轴突的神经元细胞骨架的主要组分，并且通过允许径向轴突生长在神经传导中发挥重要作用。在中枢神经系统中，神经丝由四种蛋白质构成：神经丝重链(nfh)、神经丝中链(nfm)、神经丝轻链(nfl)和α-中连蛋白。在这四种蛋白质中，仅nfl被充分确立为神经元损害的标记物。它在阿尔茨海默氏病(ad)、额颞叶痴呆(ftd)、帕金森氏病(pd)、进行性核上性麻痹(psp)、外伤性脑损伤(tbi)、多发性硬化(ms)、肌萎缩侧索硬化(als)和其它神经退行性病症中是升高的。这指示了解nfl的生物学和病理生理学对于各种神经退行性疾病是有用的。

2、目前，只有一对商购可得的抗nfl抗体用于监测临床队列和试验(抗nf-l mab 2：1和抗nfl mab 47：3，umam)。虽然商业测定的使用已成功地区分神经退行性疾病与健康对照，但生物标记物的效用目前因其非特异性性质而受到限制。由于多重神经退行性过程和神经炎症过程中的nfl升高的“噪音”使得nfl成为疾病状态和治疗应答的较不可靠的标记物，限制了其在治疗方案中的临床效用。虽然nfl经历多重翻译后修饰(ptm)，导致任何给定生物样品中的许多不同nfl同种型的可能性，但商购可得的免疫测定对这些ptm视而不见。此外，我们的理解仍然存在重要差距，例如，nfl种类在多大程度上(如果有的话)可以用于检测神经退行性病症、给受试者分期和/或指导治疗决策。

3、相应地，本领域仍然需要改进的方法来检测且定量存在于脑脊液和血液中的nfl同种型。

技术实现思路

1.一种用于检测生物样品中的神经丝轻链(nf1)的方法，所述方法包括

2.权利要求1的方法，

3.权利要求2的方法，其中

4.权利要求3的方法，其中

5.权利要求2至4中任一项的方法，其中

6.权利要求1的方法，

7.权利要求6的方法，其中

8.权利要求7的方法，其中

9.权利要求8的方法，其中

10.权利要求7的方法，其中

11.权利要求10的方法，其中

12.权利要求1的方法，

13.权利要求1的方法，其中步骤(b)包括富集长度为约350个氨基酸或更少、长度为约300个氨基酸或更少、长度为约250个氨基酸或更少、长度为约200个氨基酸或更少、长度为约150个氨基酸或更少、或者长度为约100个氨基酸或更少的nf1同种型。

14.权利要求13的方法，其中步骤(b)包括富集长度为约100个氨基酸至约250个氨基酸的nf1同种型

15.权利要求14的方法，其中步骤(b)包括富集长度为约106个氨基酸或更少的nf1同种型。

16.权利要求1、13、14或1 5中任一项的方法，其中步骤(b)包括富集一种至多种nf1同种型，所述nf1同种型具有包含seq id no：1的氨基酸92至100、seq id no：1的氨基酸101至107、seq id no：1的氨基酸108至116、seq id no：1的氨基酸117至126、seq id no：1的氨基酸137至144、seq id no：1的氨基酸148至157、seq id no：1的氨基酸158至164、seq id no：1的氨基酸165至172、seq id no：1的氨基酸178至185、seq id no：1的氨基酸192至196、或seq id no：1的氨基酸198至206的氨基酸序列。

17.权利要求16的方法，其中步骤(b)包括富集一种至多种nf1同种型，所述nf1同种型具有包含seq id no：1的氨基酸165至172的氨基酸序列。

18.权利要求1、13、14或15中任一项的方法，其中步骤(b)包括富集一种至多种nf1同种型，所述nf1同种型具有包含seq id no：1的氨基酸283至293、seq id no：1的氨基酸324至331、seq id no：1的氨基酸332至339、或seq id no：1的氨基酸340至354的氨基酸序列。

19.权利要求1、13、14或15中任一项的方法，其中步骤(b)包括富集一种至多种nf1同种型，所述nf1同种型具有包含seq id no：1的氨基酸438至462或seq id no：1的氨基酸530至540的氨基酸序列。

20.前述权利要求中任一项的方法，其中步骤(b)富集包含n末端截短的nf1同种型，其中关于每个nf1同种型的n末端截短包含独立地选自以下的氨基酸序列：

21.权利要求20的方法，其中关于每个nf1同种型的n末端截短包含seq id no：1的氨基酸1至396或seq id no：1的氨基酸1至437。

22.权利要求20或权利要求21的方法，其中步骤(b)富集单一同种型。

23.前述权利要求中任一项的方法，其中步骤(c)中的检测通过质谱法发生。

24.权利要求23的方法，其中所述方法在步骤(c)中进一步包括：

25.权利要求24的方法，其中所述蛋白酶是胰蛋白酶。

26.权利要求25的方法，其中检测且任选地定量的nf1的至少一种蛋白酶解肽包括具有选自以下的氨基酸序列的肽：(i)seq id no：1的氨基酸165至172，(ii)seq id no：1的氨基酸198至206，(iii)seq id no：1的氨基酸324至331，(iv)seq id no：1的氨基酸438至462，或(v)seq id no：1的氨基酸530至540。

27.权利要求25的方法，其中检测且任选地定量的nf1的至少一种蛋白酶解肽包括具有选自以下的氨基酸序列的两种或更多种肽：(i)seq id no：1的氨基酸165至172，(ii)seqid no：1的氨基酸198至206，(iii)seq id no：1的氨基酸324至331，(iv)seq id no：1的氨基酸438至462，或(v)seq id no：1的氨基酸530至540。

28.权利要求25的方法，其中检测且任选地定量的nf1的至少一种蛋白酶解肽包括具有选自以下的氨基酸序列的三种或更多种肽：(i)seq id no：1的氨基酸165至172，(ii)seqid no：1的氨基酸198至206，(iii)seq id no：1的氨基酸324至331，(iv)seq id no：1的氨基酸438至462，或(v)seq id no：1的氨基酸530至540。

29.权利要求1至22中任一项的方法，其中步骤(c)中的检测通过免疫测定或单分子阵列测试发生。

30.前述权利要求中任一项的方法，其进一步包括定量步骤(c)中检测到的一种至多种nf1同种型。

31.一种检测从受试者中获得的样品中的生物标记物的方法，所述方法包括根据权利要求1至29中任一项的方法检测神经丝轻链，其中所述生物样品是从具有神经元损害或处于具有神经元损害的风险中的受试者中获得的样品，并且所述生物标记物是步骤(c)中检测的一种至多种nf1同种型。

32.权利要求31的方法，其进一步包括定量所述一种至多种nf1同种型。

33.权利要求30或32的方法，其中所述方法包括定量nf1同种型的第一群体和第二群体，并且任选地其中所述生物标记物是所述两个群体的比率。

34.权利要求33的方法，其中

35.权利要求30至32中任一项的方法，其进一步包括确定所述定量的生物标记物的量与其在以下中的水平相比是否减少：认知正常的对照受试者、认知正常且淀粉样蛋白阴性的对照受试者、或认知正常且如通过pet评估的对于脑中的tau沉积物的病理水平阴性的对照受试者。

36.权利要求35的方法，其中当所述定量的生物标记物的量显著偏离对照受试者中的平均值时，所述受试者被诊断为患有神经退行性疾病或外伤性脑损伤。

37.权利要求31至34中任一项的方法，所述方法进一步包括治疗所述受试者。

38.一种测量具有神经元损害或处于具有神经元损害的风险中的受试者中的治疗应答的方法，所述方法包括

39.一种监测具有神经元损害或处于具有神经元损害的风险中的受试者的方法，所述方法包括根据权利要求31至35中任一项，定量从所述受试者中获得的第一生物样品和从所述受试者中获得的第二生物样品中的生物标记物，其中所述第一生物样品和第二生物样品均为血液样品或均为csf样品，并且其中所述第二生物样品在所述第一生物样品后获得；

40.权利要求31至39中任一项的方法，其中所述受试者患有神经退行性疾病或处于患有神经退行性疾病的风险中。

41.权利要求31至39中任一项的方法，其中所述受试者患有外伤性脑损伤或处于患有外伤性脑损伤的风险中。

42.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)表位结合剂，其选自hj30.1、hj30.1的人源化形式、或竞争性抑制hj30.1与全长重组nf1的结合的表位结合剂。

43.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)表位结合剂，其选自hj30.2、hj30.2的人源化形式、或竞争性抑制hj30.2与全长重组nf1的结合的表位结合剂。

44.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)表位结合剂，其选自hj30.4、hj30.4的人源化形式、或竞争性抑制hj30.7与全长重组nf1的结合的表位结合剂。

45.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)表位结合剂，其选自hj30.7、hj30.7的人源化形式、或竞争性抑制hj30.7与全长重组nf1的结合的表位结合剂。

46.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)表位结合剂，其选自hj30.11、hj30.11的人源化形式、或竞争性抑制hj30.11与全长重组nf1的结合的表位结合剂。

47.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)表位结合剂，其选自hj30.13、hj30.13的人源化形式、或竞争性抑制hj30.13与全长重组nf1的结合的表位结合剂。

48.一种分离的抗体，其通过保藏于美国典型培养物保藏中心具有atcc名称pta-126966的杂交瘤产生。

49.一种分离的抗体，其通过保藏于美国典型培养物保藏中心具有atcc名称pta-126967的杂交瘤产生。

50.一种分离的抗体，其通过保藏于美国典型培养物保藏中心具有atcc名称pta-126968的杂交瘤产生。

51.一种分离的抗体，其通过保藏于美国典型培养物保藏中心具有atcc名称pta-126969的杂交瘤产生。

52.一种分离的抗体，其通过保藏于美国典型培养物保藏中心具有atcc名称pta-126970的杂交瘤产生。

53.一种分离的抗体，其通过保藏于美国典型培养物保藏中心具有atcc名称pta-126971的杂交瘤产生。

54.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)，其包含(a)hj30.1(atcc#pta-126966)的轻链可变区、和/或(b)hj30.1(atcc#pta-126966)的重链可变区。

55.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)，其包含(a)hj30.2(atcc#pta-126967)的轻链可变区、和/或(b)hj30.2(atcc#pta-126967)的重链可变区。

56.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)，其包含(a)hj30.4(atcc#pta-126968)的轻链可变区、和/或(b)hj30.4(atcc#pta-126968)的重链可变区。

57.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)，其包含(a)hj30.7(atcc#pta-126969)的轻链可变区、和/或(b)hj30.7(atcc#pta-126969)的重链可变区。

58.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)，其包含(a)hj30.11(atcc#pta-126970)的轻链可变区、和/或(b)hj30.11(atcc#pta-126970)的重链可变区。

59.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)，其包含(a)hj30.13(atcc#pta-126971)的轻链可变区、和/或(b)hj30.13(atcc#pta-126971)的重链可变区。

60.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)，其包含(a)与hj30.1(atcc#pta-126966)的vl具有90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的轻链可变区，和/或(b)与hj30.1(atcc#pta-126966)的vh具有90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的重链可变区。

61.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)，其包含(a)与hj30.2(atcc#pta-126967)的vl具有90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的轻链可变区，和/或(b)与hj30.2(atcc#pta-126967)的vh具有90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的重链可变区。

62.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)，其包含(a)与hj30.4(atcc#pta-126968)的vl具有90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的轻链可变区，和/或(b)与hj30.4(atcc#pta-126968)的vh具有90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的重链可变区。

63.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)，其包含(a)与hj30.7(atcc#pta-126969)的vl具有90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的轻链可变区，和/或(b)与hj30.7(atcc#pta-126969)的vh具有90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的重链可变区。

64.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)，其包含(a)与hj30.11(atcc#pta-126970)的vl具有90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的轻链可变区，和/或(b)与hj30.11(atcc#pta-126970)的vh具有90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的重链可变区。

65.一种分离的抗神经丝轻链(nf1)，其包含(a)与hj30.13(atcc#pta-126971)的vl具有90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的轻链可变区，和/或(b)与hj30.13(atcc#pta-126971)的vh具有90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％同一性的重链可变区。

66.权利要求42至65中任一项的表位结合剂检测和/或定量生物样品中的nf1的用途。

67.根据权利要求66的表位结合剂的用途，其中所述生物样品是血液样品或脑脊液样品。

68.根据权利要求42或65的表位结合剂的用途，其中所述表位结合剂附接可检测标记。