一种检测软咀嚼片中米尔贝肟和吡喹酮及杂质含量的方法与流程

本发明涉及药物分析领域，特别涉及一种检测软咀嚼片中米尔贝肟和吡喹酮及杂质含量的方法。

背景技术：

1、米尔贝肟为大环内酯类广谱抗寄生虫药，对体内、外寄生虫特别是线虫和节肢动物均有良好驱杀作用。药物与靶虫细胞上的特异性高亲合力的位点结合，影响了细胞膜对cl-的通透性，继而引起线虫的神经细胞及节肢动物的肌细胞抑制性神经递质γ-氨基丁酸(gaba)的释放增加，打开谷氨酸控制的cl-通道，增强神经膜对cl-的通透性，从而阻断神经信号的传递，最终神经麻痹，使肌肉细胞失去收缩能力，而导致虫体死亡。

2、作为药用活性物质，如何控制米尔贝肟中的非药用活性物质组分非常重要，尤其是后期纯化步骤难以去除的、与活性成分相似的含量较高的有关物质。截至目前，大部分发表的文献主要集中于以米尔贝霉素为基础的结构修饰，还没有发现从米尔贝肟样品角度出发，研究其有关杂质的文献见之于报道。欧洲药典于2013年1月发布了米尔贝肟专论草案，其中包含了9个杂质的结构信息，但是还需要更多的测试来评估是否这些杂质在米尔贝肟中存在的可能性，以及专论方法的适用性。因此，对企业样品中的杂质属性进行深入的研究，从而开发更加有效的控制方法就显得极为重要。

3、吡喹酮是一种光谱扛蠕虫药，主要用于治疗血吸虫病、华支睾吸虫病、绦虫病和肺吸虫病。吡喹酮的杂质结构在《美国药典》和《英国药典》中均已标示：分别为吡喹酮杂质a、吡喹酮杂质b、吡喹酮杂质c。为了保证米尔贝肟吡喹酮软咀嚼片制剂后续的研发和生产质量，需要对软咀嚼片制剂的质量进行检测和控制。

技术实现思路

1、本发明的目的在于克服现有技术的至少一个不足，提供一种检测软咀嚼片中米尔贝肟和吡喹酮及杂质含量的方法。

2、本发明所采取的技术方案是：

3、本发明提供一种检测软咀嚼片中米尔贝肟、吡喹酮及杂质含量的方法，包括如下步骤：

4、1)配制米尔贝肟、吡喹酮及杂质的标准品溶液，使用反相高效液相色谱仪测定并且绘制标准曲线；

5、2)配制供试品溶液，使用反相高效液相色谱仪测定供试品溶液；

6、3)根据步骤1的标准曲线确定步骤2的供试品溶液中米尔贝肟、吡喹酮与其他杂质的含量；

7、其中，杂质为吡喹酮杂质a、吡喹酮杂质b、吡喹酮杂质c、米尔贝肟杂质d和米尔贝肟杂质e。

8、在一些实例中，所述标准品溶液和供试品溶液的溶剂为体积浓度60～70％的乙腈水溶液。

9、在一些实例中，所述标准品溶液中米尔贝肟的浓度为0.3～1mg/ml。

10、在一些实例中，所述标准品溶液中吡喹酮的浓度为0.3～1mg/ml。

11、在一些实例中，所述反相高效液相色谱仪的检测条件为：流动相a为乙腈水溶液，流动相b为体积浓度为0.02％～0.04％的三氟乙酸溶液，进行梯度洗脱。

12、在一些实例中，，所述流动相a为体积浓度40％～60％的乙腈水溶液。

13、在一些实例中，所述反相高效液相色谱的流速为1.1～1.3ml/min。

14、在一些实例中，所述反相高效液相色谱的色谱柱温为25～35℃。

15、在一些实例中，所述反相高效液相色谱仪的进样量为15～25μl。

16、在一些实例中，所述米尔贝肟的紫外检测波长为205nm～215nm，吡喹酮的紫外检测波长为240nm～245nm。

17、本发明的有益效果是：本发明能够准确测定软咀嚼片制剂中米尔贝肟和吡喹酮的含量，检测无干扰方法可靠稳定，重复性好、准确度高、精密度高、回收率高。并且通过对杂质样本进行反高效液相色谱仪分析，来保证米尔贝肟杂质d和米尔贝肟杂质e杂质的灵敏度。

技术特征：

1.一种检测软咀嚼片中米尔贝肟和吡喹酮及杂质含量的方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准品溶液和供试品溶液的溶剂为体积浓度60～70％的乙腈水溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准品溶液中米尔贝肟的浓度为0.3～1mg/ml。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述标准品溶液中吡喹酮的浓度为0.3～1mg/ml。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述反相高效液相色谱仪的检测条件为：流动相a为乙腈水溶液，流动相b为体积浓度为0.02％～0.04％的三氟乙酸溶液，进行梯度洗脱。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述流动相a为体积浓度40％～60％的乙腈水溶液。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述反相高效液相色谱的流速为1.1～1.3ml/min。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述反相高效液相色谱的色谱柱温为25～35℃。

9.根据要权利求5所述的方法，其特征在于，所述反相高效液相色谱仪的进样量为15～25μl。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述米尔贝肟的紫外检测波长为205nm～215nm，吡喹酮的紫外检测波长为240nm～245nm。

技术总结
本发明公开了一种检测软咀嚼片中米尔贝肟、吡喹酮和杂质含量的方法，其中，杂质为吡喹酮杂质A、吡喹酮杂质B、吡喹酮杂质C、米尔贝肟杂质D和米尔贝肟杂质E。本发明采用反相高效液相色谱仪对米尔贝肟和吡喹酮的标准品以及供试品进行测定，根据标准曲线得出待测样品中各组分的含量。该方法能够准确测定软咀嚼片制剂中米尔贝肟和吡喹酮和杂质的含量，检测无干扰，方法可靠稳定，重复性好、准确度高、精密度高、回收率高。

技术研发人员：廖春晓,温军贤,刘晓琳,潘洁桃,何采芸
受保护的技术使用者：丽珠集团新北江制药股份有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12