一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒三联抗体检测试纸条及其应用的制作方法

本发明涉及生物检测，尤其涉及一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒三联抗体检测试纸条及其应用。

背景技术：

1、猫泛白细胞减少症又称猫瘟、猫传染性肠炎，是猫的一种急性高度接触性传染病。临床表现多以突然发高热、顽固性呕吐、腹泻、脱水、循环障碍及白细胞急剧减少为主要特征。疫苗接种不全或未接种的猫容易得猫瘟，尤以3～5月龄的幼猫最多。猫疱疹病毒(fhv)是一种可以导致上呼吸道感染的病毒，这种病毒在猫中具有很强的传染性，是猫中最常见的传染病之一。有些猫可以携带病毒而没有任何症状，即使康复的猫也会终生携带这种病毒，当猫处于压力下或接受皮质类固醇治疗时，病毒可能会重新被激活。猫杯状病毒感染是猫病毒性呼吸道传染病，主要表现为上呼吸道症状，即精神沉郁、浆液性和粘液性鼻漏、结膜炎、口腔炎、气管炎、支气管炎，伴有双相热。猫杯状病毒感染后发病率高，死亡率低。上述三类病毒的感染风险较高，尤其对幼猫的健康危害较大，一般考虑接种此三种病毒的猫三联疫苗，但是疫苗注射后也并非100％的做到免疫成功，可能是因为母源抗体、基因缺陷等机体自身问题、外部寄生虫因素以及运输过程中可能出现的疫苗减活或失效，所以注射猫三联后做抗体的检测是很有必要的。

2、抗体三联检测技术是基于猫三联疫苗注射后进行免疫效果的评估，常规抗体检测多为猫igg的单卡单项检测，一种项目测试前就需要混样之后加样一次，测试三项需要重复三次。也有单卡多项并联检测或单卡多项同时检测，也多为针对猫igg抗体进行检测。如公开号为cn114252600a的发明专利公开了一种猫三联抗体检测试纸条，但是该试纸条需要借助显色仪器才能够对猫抗体进行检测，操作不方便且对操作人员要求较高。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒三联抗体检测试纸条及其应用，本发明所述检测试纸条可检测猫免疫后血样中的抗体，使得检测更加灵敏、加样量少、操作方便。

2、为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

3、本发明提供了一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗体三联检测试纸条，包括底板和依次搭接固定在底板上的样品垫、结合垫、分析膜和吸水纸；

4、所述分析膜上按照样品流动方向设置有检测线t1、检测线t2、检测线t3和质控线c线；所述检测线t1上包被有猫泛白细胞减少症病毒抗原，所述检测线t2上包被有猫疱疹病毒抗原，所述检测线t3上包被有猫杯状病毒抗原，所述质控线c线上包被有羊抗鼠igg。

5、优选的，所述结合垫上包被有彩色微球标记的金黄色葡萄球菌蛋白a或彩色微球标记的金黄色葡萄球菌蛋白a和蛋白g。

6、优选的，所述结合垫的制备方法包括如下步骤：

7、结合垫处理液浸润玻璃纤维素膜，干燥后得到预处理玻璃纤维素膜，将彩色微球标记的金黄色葡萄球菌蛋白a或彩色微球标记的金黄色葡萄球菌蛋白a和蛋白g包被在所述预处理玻璃纤维素膜上，干燥得到结合垫。

8、优选的，所述结合垫处理液包括以下浓度的组分：10～50mm磷酸盐缓冲液、质量浓度为2～5％蔗糖、质量浓度为0.05～0.5％bsa、体积浓度为0.05～0.2％tween-20；所述结合垫处理液的ph值为7.2～8.0。

9、优选的，所述结合垫中彩色微球标记的金黄色葡萄球菌蛋白a或彩色微球标记的金黄色葡萄球菌蛋白a和蛋白g的浓度为0.5～1mg/ml，按照2.4～3μl/cm喷涂在预处理结合垫上。

10、优选的，所述猫泛白细胞减少症病毒抗原、猫疱疹病毒抗原、猫杯状病毒抗原和羊抗鼠igg使用包被缓冲液进行稀释；

11、所述包被缓冲液为内含0.8～1％(w/v)nacl的磷酸盐缓冲液，所述包被缓冲液的ph值为7.2～8.0。

12、优选的，所述猫泛白细胞减少症病毒抗原、猫疱疹病毒抗原、猫杯状病毒抗原的浓度独立为0.8～1.3mg/ml，上述抗原独立的按照0.9～1.3μl/cm喷涂在分析膜上。

13、优选的，所述分析膜为硝酸纤维素膜。

14、本发明还提供了上述检测试纸条在猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒抗体检测中的应用。

15、本发明还提供了一种猫抗体检测方法，包括如下步骤：

16、(1)获取生物样本；

17、(2)将样本与样品稀释液按1：1～4的体积比混合；所述样品稀释液包括以下浓度的组分：10～50mm磷酸盐缓冲液，质量浓度为0.8～1.0％的nacl，体积浓度为0.1～0.2％的tween-20；

18、(3)使用上述检测试纸条对步骤(2)得到的样本进行检测，在20～30℃下反应5～10min后观察检测结果。

19、相比于现有技术，本发明的有益效果为：

20、本发明制备得到的检测试纸条可同时检测猫免疫后血样中的猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒抗体，使得检测更加灵敏、加样量少、操作也更加方便。

技术特征：

1.一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒抗体三联检测试纸条，其特征在于，包括底板和依次搭接固定在底板上的样品垫、结合垫、分析膜和吸水纸；

2.根据权利要求1所述的检测试纸条，其特征在于，所述结合垫上包被有彩色微球标记的金黄色葡萄球菌蛋白a或彩色微球标记的金黄色葡萄球菌蛋白a和蛋白g。

3.根据权利要求2所述的检测试纸条，其特征在于，所述结合垫的制备方法包括如下步骤：

4.根据权利要求3所述的检测试纸条，其特征在于，所述结合垫处理液包括以下浓度的组分：10～50mm磷酸盐缓冲液、质量浓度为2～5％蔗糖、质量浓度为0.05～0.5％bsa、体积浓度为0.05～0.2％tween-20；所述结合垫处理液的ph值为7.2～8.0。

5.根据权利要求2所述的检测试纸条，其特征在于，所述结合垫中彩色微球标记的金黄色葡萄球菌蛋白a或彩色微球标记的金黄色葡萄球菌蛋白a和蛋白g的浓度为0.5～1mg/ml，按照2.4～3μl/cm喷涂在预处理结合垫上。

6.根据权利要求1所述的检测试纸条，其特征在于，所述猫泛白细胞减少症病毒抗原、猫疱疹病毒抗原、猫杯状病毒抗原和羊抗鼠igg使用包被缓冲液进行稀释；

7.根据权利要求1所述的检测试纸条，其特征在于，所述猫泛白细胞减少症病毒抗原、猫疱疹病毒抗原、猫杯状病毒抗原的浓度独立为0.8～1.3mg/ml，上述抗原独立的按照0.9～1.3μl/cm喷涂在分析膜上。

8.根据权利要求1所述的检测试纸条，其特征在于，所述分析膜为硝酸纤维素膜。

9.权利要求1～8任一项所述检测试纸条在猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒、猫杯状病毒抗体检测中的应用。

10.一种猫抗体检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

技术总结
本发明属于生物检测技术领域，提供了一种猫泛白细胞减少症病毒、猫疱疹病毒和猫杯状病毒三联抗体检测试纸条及其应用。所述检测试纸条包括底板和依次搭接固定在底板上的样品垫、结合垫、分析膜和吸水纸；所述分析膜上按照样品流动方向设置有检测线T1、检测线T2、检测线T3和质控线C线；所述检测线T1上包被有猫泛白细胞减少症病毒抗原，所述检测线T2上包被有猫疱疹病毒抗原，所述检测线T3上包被有猫杯状病毒抗原，所述质控线C线上包被有羊抗鼠IgG。本发明可检测猫三联疫苗接种后相应的抗体水平，检测方便、点样少且检测时间短，可应用在医院以及居家自测等多个场景，对疫苗的接种或补种提供一定依据。

技术研发人员：翟文康,张影,李智椋
受保护的技术使用者：深圳粒影生物科技有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/12