一种侧流层析试纸及其应用

本发明属于侧流层析技术检测领域，特别涉及一种侧流层析试纸及其应用。

背景技术：

1、侧流层析检测技术被广泛应用于疾病诊断、食品安全和环境检测。相比较于成本高昂、耗时、需要专业人员操作的传统检测手段，如高效液相色谱、聚合酶链式反应等，侧流层析试纸具有成本低、操作简单、快速便携的特点。测流层析的商业试纸条一般包括样品垫、金标垫、检测(t)线、质控(c)线，吸收垫，背衬板；其中改变金标垫上偶联抗体，和t线上的捕获抗体，用来检测不同的待测物。因此，侧流层析试纸已被用于核酸、蛋白、病毒、细菌、重金属等不同目标物的检测。然而，灵敏度低的缺点限制了其广泛应用。

2、目前，研究者们通过基底材料改性、探针信号增强以及浓缩样品等方式来提高侧流层析检测的灵敏度。然而，这些技术需要昂贵的化学试剂和复杂的处理过程，增加检测成本。同时，在产品研发阶段，需要大量的筛选和试验，进一步增加成本。通过减慢侧流层析的流速增强灵敏度是行之有效的方法，但目前已有的方法存在材料合成时间长、操作复杂、批量化生产困难等缺点。因此，在已有的、可成熟生产的商用试纸条的基础上进行简单、低成本的改性，并提高其灵敏度，是有效解决上述问题的一种优选方法。

技术实现思路

1、本发明为解决上述技术问题提供一种侧流层析试纸及其应用。该试纸解决了商用试纸条灵敏度差，以及提升试纸条灵敏度方法中存在的研发时间长、操作复杂、成本高的问题。

2、为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

3、一种侧流层析试纸，所述侧流层析试纸包括质控线和吸收垫，所述侧流层析试纸还包括设置于所述质控线和吸收垫之间的拦截线，所述拦截线的材料为明胶、卡拉胶、聚丙烯酰胺水凝胶、聚丙烯酸水凝胶、聚乙烯醇水凝胶或聚乙烯醇-海藻酸钠水凝胶溶液中的一种或两种以上的混合。

4、优选地，所述水凝胶溶液的质量分数小于等于40％。所述水凝胶为天然水凝胶或合成水凝胶。

5、优选地，所述水凝胶溶液的制备方法如下：

6、当水凝胶溶液为明胶溶液时，所述方法为：将明胶粉加入到纯水(优选为超纯水)中，加热温度为60～80℃，保持时间为10～15min，即得；

7、当水凝胶溶液为卡拉胶溶液时，所述方法为：将卡拉胶粉加入kcl溶液中，kcl溶液浓度为0.15～0.25％(w/v)，第一次加热温度为35～40℃，搅拌为15～25min，第二次加热温度为85～95℃，保持时间为10～15min，即得；

8、当水凝胶溶液为聚丙烯酰胺水凝胶溶液时，所述方法为：将丙烯酰胺、n,n-亚甲基双丙烯酰胺、海藻酸钠、过硫酸铵、硫酸钙、四甲基乙二胺，分别加入超纯水中，搅拌均匀，即得。

9、优选地，所述明胶的质量分数小于等于20％，优选为4～20％，更优选为4％、8％、12％、16％、20％，最优选为16％。所述卡拉胶的质量分数小于等于3％，优选为1～3％，更优选为1％、1.5％、2％、2.5％、3％，最优选为1.5％或2％。所述聚丙烯酰胺水凝胶的质量分数小于等于40％，优选为20～40％，更优选为20％、30％、35％、40％，最优选为35％。

10、优选地，所述拦截线由以下方法制备：将所述水凝胶溶液涂覆在质控线后距吸收垫1～2mm处，静置，真空干燥，即得到所述拦截线。

11、优选地，所述涂覆的面积长为2～6mm，宽为2～5mm，承载量为10～20μl/cm。

12、优选地，所述静置的时间为20～40min。

13、优选地，所述真空干燥时间为5～20min，温度为20～60℃。

14、所述的侧流层析试纸在胶体金法检测新冠抗原、胶体金法检测hcg或荧光法检测心肌肌钙蛋白中的应用。

15、优选地，所述新冠抗原蛋白检测，新冠抗原蛋白溶解展开剂中作为待测样品。

16、优选地，所述hcg检测，hcg蛋白溶解展开剂中作为待测样品。

17、优选地，所述心肌肌钙蛋白检测，将含有心肌肌钙蛋白的血清溶液溶解在展开剂中作为待测样品。

18、优选地，所述展开剂为含有吐温-20的pbs溶液。其中，吐温-20的pbs溶液为将吐温-20溶解于摩尔浓度为10mm，ph＝7.4的pbs溶液中，即得。所述吐温-20的体积浓度为0.1％。

19、优选地，所述新冠抗原蛋白检测的应用中，所用拦截线上的明胶、卡拉胶或聚丙烯酰胺水凝胶的最优浓度分别为16％、1.5～2.5％、35％(wt％)。

20、优选地，所述胶体金法检测hcg的应用中，所用拦截线上的明胶、卡拉胶或聚丙烯酰胺水凝胶的最优浓度分别为12％、1.5％、35％(wt％)。

21、优选地，所述荧光法检测心肌肌钙蛋白的应用中，所用拦截线上的明胶、卡拉胶或聚丙烯酰胺水凝胶的最优浓度分别为16％、1.5％、35％(wt％)。

22、与现有技术相比，本发明的有益效果为：本发明提供的侧流层析试纸，在商用试纸条的质控线与吸收垫之间设置一条拦截线，增强了其灵敏度。本发明侧流层析试纸的拦截线采用廉价的水凝胶包被，通过对试纸拦截线的改良，确定水凝胶的最优浓度。所述的侧流层析试纸不仅适用于胶体金法试纸检测中对新冠抗原检测和hcg检测，也适用于荧光法试纸检测中对心肌肌钙蛋白的检测。本发明提供的增强商用试纸条灵敏度的改进技术，不需要通过大量筛选、基材改性等一系列复杂的手段和加工工艺，只需要在现有商用试纸条上进行改性，可操作性强，普适性广，成本低，能广泛应用于胶体金法和荧光检测法的试纸检测中。

技术特征：

1.一种侧流层析试纸，所述侧流层析试纸包括质控线和吸收垫，其特征在于，所述侧流层析试纸还包括设置于所述质控线和吸收垫之间的拦截线，所述拦截线的材料为明胶、卡拉胶、聚丙烯酰胺水凝胶、聚丙烯酸水凝胶、聚乙烯醇水凝胶或聚乙烯醇-海藻酸钠水凝胶溶液中的一种或两种以上的混合。

2.如权利要求1所述的侧流层析试纸，其特征在于，所述水凝胶溶液的质量分数小于等于40％。

3.如权利要求1或2所述的侧流层析试纸，其特征在于，所述水凝胶溶液的制备方法如下：当水凝胶溶液为明胶溶液时，所述方法为：将明胶粉加入到纯水中，加热温度为60～80℃，保持时间为10～15min，即得；

4.如权利要求1所述的侧流层析试纸，其特征在于，所述明胶的质量分数小于等于20％；所述卡拉胶的质量分数小于等于3％。

5.如权利要求1所述的侧流层析试纸，其特征在于，所述拦截线由以下方法制备：将所述水凝胶溶液涂覆在质控线后距吸收垫1～2mm处，静置，真空干燥，即得到所述拦截线。

6.如权利要求5所述的侧流层析试纸，其特征在于，所述涂覆的面积长为2～6mm，宽为2～5mm，承载量为10～20μl/cm。

7.如权利要求5所述的侧流层析试纸，其特征在于，所述静置的时间为20～40min。

8.如权利要求5所述的侧流层析试纸，其特征在于，所述真空干燥时间为5～20min，温度为25～60℃。

9.如权利要求1所述的侧流层析试纸在胶体金法检测新冠抗原、胶体金法检测hcg或荧光法检测心肌肌钙蛋白中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述明胶、卡拉胶、聚丙烯酰胺水凝胶的浓度范围分别为4％～20％、1％～3％、20％～40％。

技术总结
本发明提供一种侧流层析试纸及其应用。所述侧流层析试纸包括质控线和吸收垫。所述侧流层析试纸还包括设置于所述质控线和吸收垫之间的拦截线，所述拦截线的材料为明胶、卡拉胶、聚丙烯酰胺水凝胶、聚丙烯酸水凝胶、聚乙烯醇水凝胶或聚乙烯醇‑海藻酸钠水凝胶溶液中的一种或两种以上的混合。本发明的侧流层析试纸可提高商用试纸条灵敏度，能应用于新冠抗原检测、人绒促性激素检测(HCG)和心肌肌钙蛋白检测。本发明提供的侧流层析试纸，仅在质控线后增加一条廉价的水凝胶的拦截线，即可显著提高其灵敏度，具有较好的普适性，能广泛应用于各种胶体金法试纸检测和免疫荧光试纸检测中。

技术研发人员：梁峰,彭琳琳,马涛
受保护的技术使用者：武汉科技大学
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13