一种同时测定仙人菇口服液中10种成分含量的HPLC方法与流程

本发明属于化学分析，具体地说，涉及一种同时测定仙人菇口服液中10种成分含量的hplc方法。

背景技术：

1、仙人菇口服液为第二军医大学附属长征医院院内自制制剂，处方由淫羊藿、黄芪、人参、白术(炒)、虫草菌丝体、山慈菇、灵芝、枸杞等八味中药组成[[1]施俊，许玲，秦志丰，等.仙人菇口服液治疗中晚期胃癌临床疗效观察[j].成都中医药大学学报，2002，25(1):15-16.]，是魏品康教授结合多年临床经验研制而成的天然干扰素诱生剂、免疫调节剂，具有益气填精、扶正固本等功效[[2]何丽君，江金井，陈豪，等.淫羊藿药理作用和临床应用的研究进展[j].中医临床研究，2020，12(02):17-20.[3]zhongyi cong,qing zhao,bo yang,et al.ginsenoside rh2 inhibits proliferation and induces apoptosis ofcolorectal cancer cells[j].pharmacology,2020,105(5-6).[4]王卓溪，班继芳，客蕊.补益类中药注射液联合化疗治疗非小细胞肺癌的网状meta分析[j].中医药导报，2020，26(16):167-175.]。前期研究表明：本品能够促进人体蛋白合成，提高肝细胞活性[[5]刘婷婷，于栋华，刘树民.山慈菇的本草考证及现代研究进展[j].中国药房，2020，31(24):3055-3059.]，降低患者体内循环免疫复合物含量[[6]陈天池，张霄峰，秦志丰，等.仙人菇口服液对59例恶性肿瘤患者化疗中增效减毒作用的观察[j].中医杂志，2007，48(3):247.]，提高机体免疫功能，从而改善患者生活质量，起到与其它药物合用增效减毒的作用[[7]李亚晗，刘佳琳，王天添，等.灵芝多糖抗肿瘤免疫调节机制的研究进展[j].中国免疫学杂志，2021，37(04):511-514.]。临床上主要用于治疗和改善慢性消耗性疾病、疲劳综合征等[[8]赵婧，刘胜，刘佳.266例乳腺癌术后患者5年生存分析[j].中国中医药信息杂志，2011，18(10)：21-23.]，对恶性肿瘤放化疗造成的贫血及免疫功能低下具有辅助治疗作用，临床应用已近20余年疗效确切[[9]jing zhao,tao pang,jianpeng jiao,et al.xiaotan jieyuprescription alleviates breast precancerous lesions through pi3k_aktsignaling pathway[j].evidence-based complementary and alternative medicine2020，article id 4129461.[10]庞涛，裴君，陈爱华，陆文铨.2014-2016年我院中药制剂临床应用分析[j].医药前沿，2018，10：340-342.]。

2、目前仙人菇口服液的质量标准，主要采用薄层色谱法对黄芪、淫羊藿、枸杞、白术、人参等五种药材进行定性鉴别[[11]乐佳美，熊筱娟，陆文铨，等.仙人菇口服液的质量标准研究[j].中国药房，2015，26(27):3855-3859.[12]梁丽娟，赵奎君，屠鹏飞，等.hplc法同时测定黄芪中4种黄酮类成分的含量[j].中国药房，2010，15:1385-1387.]；采用高效液相色谱法(hplc)对淫羊藿主要成分淫羊藿苷进行含量测定[[13]杨娟娟，李晔，魏巧容，等.反相高效液相色谱法测定灵芝子实体中灵芝酸a的含量[j].福建医药杂志，2011，33(3):56-58.[14]夏文娟，曾晓英，袁海龙，等.不同产地冬虫夏草腺苷含量的测定[j].中国中药杂志，2001，26(8):540-542.]。由于该口服液为复方制剂，仅对1个主要成分进行含量测定很难反映仙人菇口服液的整体质量优劣。因此，建立一种快速、准确的多成分含量测定方法以完善其质量标准十分必要。

技术实现思路

1、本发明的目的是提供一种同时测定仙人菇口服液中10种成分含量的hplc方法。

2、为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

3、本发明的第一方面提供了一种同时测定仙人菇口服液中10种成分含量的hplc方法，包括以下步骤：

4、将仙人菇口服液超声5～30min，加入溶剂离心分离，溶剂与仙人菇口服液的体积比为1:1，得到上清液；然后向剩余液体中加入溶剂继续离心分离，重复上述步骤至少两次，将获得的上清液合并，去除溶剂，用hplc法同时测定仙人菇口服液中10种成分含量；

5、所述溶剂选自二氯甲烷、三氯甲烷、甲基叔丁基醚、正己烷、乙酸乙酯；

6、所述hplc法同时测定仙人菇口服液中10种成分含量条件如下所示：

7、使用dikma diamonsil plus c18柱，梯度洗脱；流速为0.5～2ml/min，柱温为25～35℃，检测波长为270～300nm，进样量为5～15μl；

8、所述仙人菇口服液中10种成分选自腺苷、虫草素、淫羊藿苷、芦丁、芒柄花苷、朝藿定b、朝藿定c、毛蕊异黄酮、灵芝酸a、宝藿苷i。

9、所述梯度洗脱所用流动相选自乙腈-磷酸水溶液、乙腈-冰醋酸水溶液、乙腈-醋酸铵溶液、乙腈-甲酸水溶液、乙腈-水。

10、所述离心分离的时间为1～10min。

11、优选的，所述hplc法同时测定仙人菇口服液中10种成分含量条件如下所示：使用dikma diamonsil plus c18柱，以乙腈-0.1％冰醋酸水溶液梯度洗脱；流速为1.0ml/min，柱温为30℃，检测波长为270nm，进样量为10μl。

12、所述仙人菇口服液中10种成分含量选自：

13、腺苷在0.250～16.0μg/ml、虫草素和淫羊藿苷在6.25～400μg/ml、芦丁在1.25～80.0μg/ml、芒柄花苷在0.500～32.0μg/ml、朝藿定b在0.375～24.0μg/ml、朝藿定c在3.12～200μg/ml、毛蕊异黄酮和灵芝酸a在0.625～40.0μg/ml、宝藿苷i在0.125～8.00μg/ml。

14、由于采用上述技术方案，本发明具有以下优点和有益效果：

15、本发明的方法操作简单、准确性高、重复性好，适用于仙人菇口服液中腺苷、虫草素、芦丁、芒柄花苷、朝藿定b、朝藿定c、淫羊藿苷、毛蕊异黄酮、灵芝酸a、宝藿苷i等10种有效成分的含量测定，可以作为仙人菇口服液质量控制方法。

16、本发明建立了一种快速、准确的高效液相色谱法(hplc)同时测定仙人菇口服液中腺苷、虫草素、芦丁、芒柄花苷、朝藿定b、朝藿定c、淫羊藿苷、毛蕊异黄酮、灵芝酸a、宝藿苷i等10种有效成分的含量。本发明的方法操作简单、准确性高、重复性好，能达到快速准确控制仙人菇口服液质量的目的，涉及的质量标志物涵盖组方中主要成分，为临床安全性和有效性提供保证。

技术特征：

1.一种同时测定仙人菇口服液中10种成分含量的hplc方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的同时测定仙人菇口服液中10种成分含量的hplc方法，其特征在于，所述梯度洗脱所用流动相选自乙腈-磷酸水溶液、乙腈-冰醋酸水溶液、乙腈-醋酸铵溶液、乙腈-甲酸水溶液、乙腈-水。

3.根据权利要求1所述的同时测定仙人菇口服液中10种成分含量的hplc方法，其特征在于，所述离心分离的时间为1～10min。

4.根据权利要求1所述的同时测定仙人菇口服液中10种成分含量的hplc方法，其特征在于，所述hplc法同时测定仙人菇口服液中10种成分含量条件如下所示：使用dikmadiamonsil plus c18柱，以乙腈-0.1％冰醋酸水溶液梯度洗脱；流速为1.0ml/min，柱温为30℃，检测波长为270nm，进样量为10μl。

5.根据权利要求1所述的同时测定仙人菇口服液中10种成分含量的hplc方法，其特征在于，所述仙人菇口服液中10种成分含量选自：

技术总结
本发明公开了一种同时测定仙人菇口服液中10种成分含量的HPLC方法，包括以下步骤：使用DikmaDiamonsilPlusC<subgt;18</subgt;柱，以乙腈‑0.1％冰醋酸水溶液梯度洗脱；流速为1.0mL/min，柱温为30℃，检测波长为270nm，进样量为10μL。该法操作简单、准确性高、重复性好。适用于仙人菇口服液中腺苷、虫草素、芦丁、芒柄花苷、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、毛蕊异黄酮、灵芝酸A、宝藿苷I等10种有效成分的含量测定，可以作为仙人菇口服液质量控制方法。

技术研发人员：庞涛,赵婧,高守红,王丹,矫健鹏,江道振,王志鹏,陆文铨,岳小强,张慈安
受保护的技术使用者：上海长征医院
技术研发日：
技术公布日：2024/1/15