一种分离并检测尼可地尔片剂中有关物质的高效液相色谱法的制作方法

本发明涉及药物分析，具体涉及一种高效分离并检测尼可地尔片剂中有关物质的高效液相色谱法。

背景技术：

1、尼可地尔是由日本中外制药公司开发的硝酸酯类化合物，目前已在日本、欧洲、中国等多个国家和地区上市，临床主要用于心绞痛和急性心力衰竭的治疗，其化学名称为n-(2-羟乙基)-烟酰胺硝酸酯，化学结构如下：

2、

3、有关物质的存在直接关系到药品的质量和安全性。有关物质包括药物原料带入的杂质、过程中产生的有关物质以及降解相关的有关物质等，其会直接影响药物的纯度和质量，甚至会造成严重的不良反应，影响临床用药的有效性、安全性。为了提升尼可地尔的产品质量并保障临床用药安全有效，需充分研究其有关物质情况并开发适用的分离检测方法，将杂质控制在安全限度范围以内，实现药品质量可控，保障临床用药的安全有效。对于该品种的有关物质情况以及分离检测方法现有技术鲜有报道。

技术实现思路

1、本发明的目的一方面在于提供一种高效分离并检测尼可地尔片剂中尼可地尔及其有关物质的高效液相色谱法，其中，色谱柱固定相为十八烷基硅烷键合硅胶，色谱柱柱温为20℃-30℃，流动相由a相和b相组成，其中a相为三氟乙酸-三乙胺-水-乙腈，b相为乙腈，所述流动相为梯度洗脱，流动相流速为0.9ml/min-1.1ml/min，进样体积为25μl-60μl，所述高效液相色谱法配紫外检测器，所述紫外检测器的检测波长为240nm-270nm。

2、本发明优选的技术方案中，所述a相中三氟乙酸：三乙胺：水：乙腈的体积比为0.5-3：1-4：900-1050：10-30，优选为1-2：1-3：950-1000：15-25，更优选为1.3-1.7:1.8-2.2:965:18-22。

3、本发明优选的技术方案中，所述进样体积为35-55μl，优选为40-50μl。

4、本发明优选的技术方案中，所述紫外检测器检测波长为250nm-260nm，优选为254nm-260nm。

5、本发明优选的技术方案中，所述梯度洗脱程序为：

6、

7、本发明优选的技术方案中，所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱为商购获得，优选为thermofisher、ymc、phenomenex、es、merck、agilent、kromasil、agela、techmate、waters或中谱红的任一公司生产的十八烷基硅烷键合硅胶柱。

8、本发明优选的技术方案中，所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱选自eclipse plusc18、kromasil 100-5-c18、kromasil eternity-5-c18、kromasil eternityxt-10-c18、kromasil100-10-c18、kromasil 300-5-c18、ymc triat c18、ymc ods c18、ymc-pack c18、phenomenex kinetex c18、titank c18、es-c18、epic c18、zorbax sb-c18、zorbax 300sb-c18、poroshell 120ec-c18、xdb-c18、tc-c18、extend-c18、bonshell c18、bonshell asbc18、venusil hlp c18、venusil c18 plus、venusil xbp c18(a)、venusil xbp c18(b)、venusil mp c18、innoval neo xd c18、techmate c18-st、techmate c18-stⅱ、techmateci8 ug、中谱红aq-c18中的任一种或其组合。

9、本发明优选的技术方案中，所述十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱优选为中谱红aq-c18，250mm×4.6mm，5μm。

10、本发明优选的技术方案中，所述色谱柱的柱温为23℃-28℃，优选为25℃-27℃。

11、本发明优选的技术方案中，所述有关物质选自有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质5、有关物质6、有关物质7、有关物质8、有关物质9、有关物质10和有关物质11中的任一种或其组合：

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15、本发明的优选技术方案中，出峰顺序依次为有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质5、有关物质6、有关物质7、尼可地尔、有关物质8、有关物质9、有关物质10、有关物质11，其中，尼可地尔峰与有关物质7峰、有关物质8峰之间以及各有关物质峰之间的分离度均大于1.5。

16、本发明的优选技术方案中，所述高效液相色谱法包括下述步骤：

17、1)溶液配制：

18、定位溶液：分别取尼可地尔、有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质5、有关物质6、有关物质7、有关物质8、有关物质9、有关物质10和有关物质11对照品适量，用乙腈-水(2:98)溶液溶解并稀释成适宜浓度的贮备液，再用流动相a稀释制成每1ml中分别约含2.5μg的溶液；

19、混合溶液：取有关物质1、有关物质2、有关物质3、有关物质4、有关物质6、有关物质7、有关物质8、有关物质9、有关物质10、有关物质11对照品各适量，用乙腈-水(2:98)溶液溶解并稀释制成每1ml中各约含25μg的混合溶液，作为贮备液①；取有关物质5对照品适量，用乙腈-水(2:98)溶液溶解并稀释制成每1ml中约含25μg的溶液，作为贮备液②。取尼可地尔对照品约5mg，精密称定，置10ml量瓶中，分别加入贮备液①和贮备液②各1ml，用溶剂稀释至刻度，摇匀，即得；

20、2)以色谱柱中谱红aq-c18，250mm×4.6mm，5um为固定相，柱温为20-30℃，流动相a为三氟乙酸-三乙胺-水-乙腈＝1.3-1.7:1.8-2.2:965:18-22，流动相b为乙腈，将洗脱样品注入液相色谱仪，进样量为50μl，按如下梯度进行洗脱；检测器检测波长为254nm；流速为每分钟0.9ml-1.1ml，记录色谱图。

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23、本发明的另一目的在于提供本发明所述的分离检测尼可地尔片剂中尼可地尔及有关物质的高效液相色谱法在用于高效分离并检测尼可地尔片剂中有关物质中的应用。

24、除非另有说明，本发明涉及液体与液体之间的百分比时，所述的百分比为体积/体积百分比；本发明涉及液体与固体之间的百分比时，所述百分比为体积/重量百分比；本发明涉及固体与液体之间的百分比时，所述百分比为重量/体积百分比；其余为重量/重量百分比。

25、与现有技术相比，本发明具备以下有益效果：

26、(1)本发明通过科学筛选优化了高效液相色谱法的洗脱条件和检测条件，实现了对尼可地尔片剂中尼可地尔及有关物质等12种结构近似、难以分离的化合物的有效分离与检测，其中包括2种工艺相关杂质以及9种降解杂质，分离效果良好，有效进行了药品质量控制，减少药物临床试验中和治疗中可能出现的不良反应，保证了患者用药的有效性、安全性。同时，本发明的方法还用于药品的稳定性考察，保证药品在储藏、运输中保持质量稳定。

27、(2)本发明方法耗时短，可节约时间成本，提高经济效益，适宜工业化、规模化生产。本发明的流动相容易配制，按照常规方法配制即可，避免了由于样品保留时间变化需要重新调整流动相比例的问题。

28、(3)本发明方法专属性强，各有关物质与空白溶剂不互相干扰，各成分峰之间的分离度均大于1.5；本发明色谱条件检测有关物质灵敏度高；色谱条件微小变化时，不影响各成分峰分离，该方法的耐用性良好。