一种蜕皮激素含量及有关物质的检测方法与流程

本发明属于物质检测，特别是涉及一种蜕皮激素含量及有关物质的检测方法。

背景技术：

1、蜕皮激素是无脊椎动物类固醇激素家族，参与调节蜕皮、发育和繁殖，英文名称ecdysteroids。蜕皮甾酮并没有荷尔蒙的相互作用，不会对性腺轴产生抑制。它们的结构、极性、体积和形状与脊椎动物类固醇激素明显不同。根据其分布，分为：如果存在于无脊椎动物中，是动物蜕皮激素即zooecdysteroids，如果分布在植物中就是植物蜕皮激素，即phytoecdysteroids(有助于威慑无脊椎动物捕食者)。1976年露水草提取物问世主要的作用实际上停留在治疗关节炎，祛湿，消肿之类降低胆固醇和降低血糖浓度的传统中医治疗。2000年左右，露水草提取物中的蜕皮甾酮才被逐渐重视，化妆品，保健品才纷纷加入。它能促进胶原蛋白合成，促进真皮细胞分裂、生长；增加骨骼肌和心脏的蛋白质合成；增加肌肉中的atp合成；刺激红细胞的产生降低糖尿病动物的高血糖症降低甘油三酯脂肪酶的活性；防止兔实验性动脉粥样硬化；激活大脑中的乙酰胆碱酯酶；激活大脑中的谷氨酸脱羧酶；具有免疫调节活性；降低血浆胆固醇水平。

2、目前并没有任何文献公开过该蜕皮激素含量及有关物质的高效液相检测方法，也没有明确的该蜕皮激素有关物质的结构。本专利将公开一种高效液相色谱法对该蜕皮激素含量及有关物质进行检测，同时公开该蜕皮激素有关物质的结构。

技术实现思路

1、本发明提供了一种蜕皮激素含量及有关物质的检测方法，解决了以上问题。

2、为解决上述技术问题，本发明是通过以下技术方案实现的：

3、本发明的一种蜕皮激素含量及有关物质的检测方法，包括；

4、s1、配制蜕皮激素对照品及供试品溶液。

5、s2、按以下色谱条件对步骤一的对照品、供试品进样，色谱条件：检测波长为254nm；柱温为25℃；流动相分为流动相a，流动相b；流动相a：(水+0.1％三氟乙酸)，流动相b：(乙腈+0.1％三氟乙酸)。梯度洗脱：0到30min，流动相a从90％变化到70％，流动相b从10％变化到30％；30到32min，流动相a，流动相b比例保持不变；32到32.1min流动相a从70％变化到20％，流动相b从30％变化到80％；32.1到35min，流动相a，流动相b比例保持不变；35到35.1min，流动相a从20％变化到90％，流动相b从80％变化到10％，恢复初始比例，35.1到40min，流动相a，流动相b比例不变，运行时间40min。流速：1.1ml/min。

6、进一步地，s2步骤中色谱条件：最优检测波长为254nm。

7、进一步地，s2步骤中色谱条件：s2步骤最优柱温为25℃。

8、进一步地，s2步骤中色谱条件，最优流动相流速为1.1ml/min。

9、进一步地，s2步骤中色谱条件，最优进样量为2微升。

10、进一步地，s2步骤中色谱条件，色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。

11、进一步地，s2步骤中色谱柱最优选择是waters xbridge c18，4.6×150mm，3.5μ。

12、进一步地，s1步骤中使用的稀释剂为水：乙腈＝50:50(％；v/v)。

13、进一步地，s1步骤中的空白溶液为稀释剂。

14、进一步地，s1中对照品、供试品浓度为2.5mg/ml。

15、启动数据分析工作站，面积百分比法，计算含量。

16、明确该蜕皮激素有关物质的结构。

17、本发明相对于现有技术包括有以下有益效果：

18、本发明对蜕皮激素含量及有关物质的检测具有很高的灵敏度及专属性。

19、当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。

技术特征：

1.一种蜕皮激素含量及有关物质的检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

2.根据权利要求1所述的一种蜕皮激素含量及有关物质的检测方法，其特征在于，所述s2步骤中检测波长采用紫外线检测器或二极管阵列检测器。

3.根据权利要求1所述的一种蜕皮激素含量及有关物质的检测方法，其特征在于，所述色谱柱采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱。

技术总结
本发明公开了一种蜕皮激素含量及有关物质的检测方法，采用反相高效液相色谱法，检测波长为254nm；采用紫外线或二极管阵列检测器；柱温为25℃；流速为：1.1ml/min，稀释剂为水：乙腈＝50:50(％；v/v)；流动相分为流动相A，流动相B；流动相A：水+0.1％三氟乙酸，流动相B：乙腈+0.1％三氟乙酸；洗脱程序如下：0到30min，流动相A从90％变化到70％，流动相B从10％变化到30％；30到32min，流动相A，流动相B比例保持不变；32到32.1min流动相A从70％变化到20％，流动相B从30％变化到80％；32.1到35min，流动相A，流动相B比例保持不变；35到35.1min，流动相A从20％变化到90％，流动相B从80％变化到10％，恢复初始比例，35.1到40min，流动相A，流动相B比例不变，运行时间40min，具有很高的灵敏度及专属性。

技术研发人员：赵晓怡,杨青春,胡倩,滕院,马秋丽,毛自平,蔡克仙,申文静,陆春梅,张丽华,李文
受保护的技术使用者：云南汉德生物技术有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/13