多肽在诊断或预后评估肺癌中的应用的制作方法

本发明涉及生物医药，具体涉及多肽在诊断或预后评估肺癌中的应用。

背景技术：

1、p53(ensembl:ensg00000141510 mim:191170)由17号染色体上的tp53基因编码，在脾脏(rpkm 13.1)、淋巴结(rpkm 13.0)和其他25个组织中广泛表达。p53蛋白是肿瘤抑制因子，也是转录因子，参与细胞周期调控，负调控细胞分裂发挥抑制肿瘤的作用。在人类癌症中，p53是最常发生突变的基因，大约50％的人类癌症存在p53突变，突变的p53蛋白失去了肿瘤抑制作用。大量表达的突变型p53蛋白引起机体免疫反应，产生p53蛋白的自身抗体，血清p53蛋白自身抗体可作为潜在的肿瘤诊断的标志物。目前常用抗原蛋白检测自身抗体，但抗原蛋白一般不易获得，并且每一种肿瘤自身抗体阳性率不高，临床价值不高。因此，本技术采用多肽作为抗原，多肽模拟蛋白抗原能与自身抗体结合，用于自身抗体的检测，具有通量高、多指标、小型化的优点，在肿瘤检测中有较高的特异性和灵敏度。

技术实现思路

1、本发明的第一方面，提供了一种多肽在制备诊断或辅助诊断或预后评估肺癌的产品中的应用，所述的多肽包括seq id no：1或2。

2、本发明的第二方面，提供了结合多肽的自身抗体作为标志物在制备诊断或辅助诊断或预后评估肺癌的产品中的应用，所述的多肽包括seq id no：1或2。

3、优选的，所述的多肽长度为15-30aa，优选15-20aa。例如可以为15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30aa。

4、优选的，所述的多肽为seq id no：1或2。优选的，所述的多肽可以包含修饰或标记，例如生物素等。

5、优选的，所述的诊断或辅助诊断或预后评估肺癌包括利用多肽检测自身抗体。优选为检测自身抗体的存在或含量。优选为检测血清或血浆中的自身抗体。

6、优选的，所述的自身抗体为lgg和/或lga。

7、优选的，所述诊断或辅助诊断或预后评估的对象可以为人或非人动物。

8、优选的，所述的诊断或辅助诊断或预后评估肺癌包括将多肽与待检测样本接触，检测与多肽结合的自身抗体的量。

9、具体为将多肽包被在固相载体上，然后加入待检测样本以及标记物(优选为抗人iga花青染料(cy5)标记的二抗或者抗人igg花青染料(cy3)标记)，检测标记物的信号分子强度。其中，所述的信号分子强度的检测方法包括可见光显色法、化学发光法、荧光发光法。例如通过微阵列扫描仪检测。其中，信号的强弱与与多肽结合的自身抗体的量呈正相关。

10、优选的，所述的待检测样本为血清或血浆。

11、优选的，所述的产品包括多肽和固相载体；

12、优选的，所述的固相载体选自酶标微孔板、微粒、微球、亲和膜、液相芯片、载玻片、试纸条和塑料球中的一种或两种以上的组合；

13、进一步优选的，所述的产品为试剂盒或芯片。

14、优选的，所述的产品还包含试剂，例如有标记物的二抗、封闭缓冲液和/或清洗缓冲液。

15、优选的，所述的肺癌包括肺腺癌、肺鳞状细胞癌、大细胞肺癌或小细胞肺癌中的一种或两种以上的组合。

16、本发明的第三方面，提供了一种多肽，所述的多肽包括seq id no：1或2。

17、优选的，所述的多肽为seq id no：1或2。

18、优选的，所述的多肽可以包含修饰或标记，例如生物素等。

19、优选的，所述的多肽可以与自身抗体结合。进一步优选与肺癌患者(例如血清或血浆)中的自身抗体结合。

20、优选的，所述的多肽可以用于检测自身抗体。

21、优选的，所述的多肽可以用于诊断或辅助诊断或预后评估肺癌。

22、优选的，所述的多肽或结合多肽的自身抗体可以作为肺癌诊断或辅助诊断或预后评估的标志物。例如检测结合多肽的自身抗体的有无或含量可以评价肺癌。所述的评价例如诊断、辅助诊断、预后评估或临床分型。

23、所述的多肽可以采用现有技术常规的方法进行制备。例如化学合成或者原核或真核表达等等。

24、本发明的第四方面，提供了一种编码上述多肽的核酸。

25、本发明的第五方面，提供了一种包含上述核酸的载体。

26、本发明的第六方面，提供了一种包含上述核酸或上述载体的细胞。

27、本发明的第七方面，提供了一种试剂盒或芯片，所述的试剂盒或芯片包含上述的多肽、核酸、载体或细胞。

28、优选的，所述的多肽包含修饰或标记，例如生物素。

29、优选的，所述的试剂盒或芯片还包含固相载体。

30、优选的，所述的固相载体选自酶标微孔板、微粒、微球、亲和膜、液相芯片、载玻片、试纸条和塑料球中的一种或两种以上的组合。

31、优选的，所述的试剂盒或芯片还包括试剂，所述的试剂例如有标记物的二抗、封闭缓冲液和/或清洗缓冲液。

32、本发明的第八方面，提供了一种试剂盒或芯片的制备方法，所述的制备方法包括将上述的多肽包被在固相载体上。

33、优选的，所述的包被可以为直接包被法和间接包被法。所述的直接包被法是将多肽直接固定于固相载体上，间接包被法是通过先使其与无关蛋白质如牛血清白蛋白(bsa)等偶联，借助于偶联物与固相载体的吸附，间接地结合到固相载体表面。

34、本发明的第九方面，提供了一种肺癌的生物标志物，所述的肺癌的生物标志物为多肽或结合上述多肽的自身抗体。

35、优选的，所述的自身抗体为lgg和/或lga。

36、优选的，所述的自身抗体来源于血清或血浆。

37、本发明的第十方面，提供了一种检测自身抗体的方法，所述的方法包括使用上述的多肽或上述的试剂盒或芯片。

38、优选的，包括将多肽与待检测样本接触，检测与多肽结合的自身抗体的量。

39、具体为将多肽包被在固相载体上，然后加入待检测样本以及标记物(优选为抗人iga花青染料(cy5)标记的二抗或者抗人igg花青染料(cy3)标记)，检测标记物的信号分子强度。其中，所述的信号分子强度的检测方法包括可见光显色法、化学发光法、荧光发光法。例如通过微阵列扫描仪检测。其中，信号的强弱与与多肽结合的自身抗体的量呈正相关。

40、优选的，所述的待检测样本为血清或血浆。

41、本发明的第十一方面，提供了一种肺癌的诊断方法，所述的诊断方法包括使用上述的多肽或上述的试剂盒或芯片。

42、优选的，包括将多肽与待检测样本接触，检测与多肽结合的自身抗体的量。

43、具体为将多肽包被在固相载体上，然后加入待检测样本以及标记物(优选为抗人iga花青染料(cy5)标记的二抗或者抗人igg花青染料(cy3)标记)，检测标记物的信号分子强度。其中，所述的信号分子强度的检测方法包括可见光显色法、化学发光法、荧光发光法。例如通过微阵列扫描仪检测。其中，信号的强弱与与多肽结合的自身抗体的量呈正相关。

44、优选的，所述的待检测样本为血清或血浆。

45、本发明所述的“诊断”是指以查明患者过去、诊断时或将来是否患有疾病或病症，或者是查明疾病的进展或将来可能的进展。所述诊断的对象可以为人或非人动物，其中，所述的非人动物优选为非人哺乳动物。进一步优选的，所述的非人哺乳动物可以为野生动物、动物园动物、经济动物、宠物、实验动物等等。优选的，所述的非人哺乳动物包括但不限于猪、牛、羊、马、驴、狐、貉、貂、骆驼、狗、猫、兔、鼠(例如大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、沙鼠、龙猫、松鼠)或猴等等。

46、本发明所述的“辅助诊断”是指包括本技术的方法以及现有技术中常规的方法或步骤。

47、本发明所述的“预后评估”指评估患者对治疗的反应，及将来患病的风险度。

48、本发明所述的“包含”或“包括”为开放式写法，当用于描述蛋白质或核酸的序列时，所述蛋白质或核酸可以是由所述序列组成，或者在所述蛋白质或核酸的一端或两端可以具有额外的氨基酸或核苷酸，但仍然具有与原序列相同或相似的活性。