一种滋补肝肾中成药的HPLC特征图谱的构建方法与流程

本发明属于药物检测，具体涉及一种滋补肝肾中成药的hplc特征图谱的构建方法。

背景技术：

1、中药基源不同，产地分散，直接影响中药饮片质量，从而导致不同厂家不同批次间中成药产品质量及临床疗效的差异，因此，需要采用有效合理的方式和技术手段进行中药质量控制，保证产品质量。

2、龟甲养阴片为名优传统中药，全方由龟甲、覆盆子、鳖甲、盐车前子等二十六味组成，具有养阴软坚，滋补肝肾的功效，用于动脉硬化，阴虚腰痛，胁痛，头晕耳鸣，五心烦热，冠心病等症。现执行标准收载于卫生部药品标准中药成方制剂第八册，标准编号：ws3-b-1552-93。质量标准中收载性状、显微鉴别及片剂常规检查项。因中药复方制剂药味多，成分复杂相互干扰不易有效检测等特点，已有质量检查项并不能全面监控产品质量，建立中成药特征图谱将能较为全面地反映其所含化学成分的种类与数量，进而对药品质量进行整体描述和评价。质量标准中仅收载性状、显微鉴别及片剂常规检查项，质量控制水平较低，不能全面有效的控制产品质量。

技术实现思路

1、有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种滋补肝肾中成药的hplc特征图谱的构建方法，本发明建立的特征图谱可全面反映龟甲养阴片复杂的化学成分及其相对比例，是一种符合中药复方特色的质量控制模式，可有效地表征药品质量。

2、本发明提供了一种滋补肝肾中成药的hplc特征图谱的构建方法，包括以下步骤：

3、a)将龟甲养阴片采用溶剂溶解，得到待测液；

4、b)将参照物采用溶剂溶解，得到参照物溶液，所述参照物选自丹皮酚；

5、c)将待测液和参照物溶液分别采用高效液相色谱法测定，得到龟甲养阴片的hplc特征图谱和参照物的色谱图；

6、所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为c18柱；流动相a为乙腈，流动相b为0.1％冰醋酸水溶液，梯度洗脱；

7、d)根据参照物的色谱图对龟甲养阴片的hplc特征图谱的成分进行定性测定。

8、优选的，步骤a)和步骤b)中，所述溶剂选自甲醇或甲醇水溶液。

9、优选的，所述待测液按照如下方法制备：

10、将龟甲养阴片精密称定后，精密加入至溶剂中，超声处理后冷却，再用溶剂补足，混合均匀后，滤过，取续滤液，得到待测液。

11、优选的，所述参照物溶液按照如下方法进行制备：

12、取丹皮酚对照品适量，精密称定，加溶剂制成每lml含0.1～0.3mg的溶液，得到参照物溶液。

13、优选的，所述梯度洗脱具体为：

14、0～50min，流动相a5％～40％、流动相b 95％～60％；

15、50～75min，流动相a40％～90％、流动相b 60％～10％；

16、75～80min，流动相a90％～100％、流动相b10％～0％。

17、优选的，所述色谱柱选自agilent zorbax sb-c18，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm；柱温为30～40℃。

18、优选的，所述流动相流速为0.9～1.1ml/min，检测波长为250～270nm；进样量为5～15μl；理论板数按丹皮酚峰计算不低于10000。

19、优选的，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件对龟甲养阴片的hplc特征图谱进行比较，确定共有特征峰，生成由14个特征峰构成的对照特征图谱，其中，峰1对应原儿茶酸、峰3对应鞣花酸、峰4对应丹酚酸b、峰6对应阿魏酸、峰7对应丹皮酚、峰8对应五味子醇甲。

20、优选的，在对照特征图谱中，以丹皮酚峰为参照物峰s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，所述相对保留时间应在规定值的±5％之内，所述规定值为：0.11-峰1、0.12-峰2、0.56-峰3、0.72-峰4、0.74-峰5、0.76-峰6、1.00-峰s、1.22-峰8、1.28-峰9、1.31-峰10、1.39-峰11、1.49-峰12、1.51-峰13、1.55-峰14。

21、与现有技术相比，本发明提供了一种滋补肝肾中成药的hplc特征图谱的构建方法，包括以下步骤：a)将龟甲养阴片采用溶剂溶解，得到待测液；b)将参照物采用溶剂溶解，得到参照物溶液，所述参照物选自丹皮酚；c)将待测液和参照物溶液分别采用高效液相色谱法测定，得到龟甲养阴片的hplc特征图谱和参照物的色谱图；d)根据参照物的色谱图对龟甲养阴片的hplc特征图谱的成分进行定性测定；所述高效液相色谱法色谱条件为：色谱柱为c18柱；流动相a为乙腈，流动相b为0.1％冰醋酸水溶液，梯度洗脱。

22、本发明对龟甲养阴片hplc特征图谱构建方法进行了系统的试验研究，建立的方法经精密度、稳定性、重复性等方法学验证，方法重现性好，方法可行。该方法可同时监测多成分，有效控制产品质量。本发明克服了现执行标准中缺少质量检测方法的不足，以及现有技术中检测方法指标针对性强、覆盖面小的片面性，建立的特征图谱可全面反映龟甲养阴片复杂的化学成分及其相对比例，是一种符合中药复方特色的质量控制模式，可有效地表征药品质量。

技术特征：

1.一种滋补肝肾中成药的hplc特征图谱的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤a)和步骤b)中，所述溶剂选自甲醇或甲醇水溶液。

3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述待测液按照如下方法制备：

4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述参照物溶液按照如下方法进行制备：

5.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述梯度洗脱具体为：

6.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述色谱柱选自agilent zorbax sb-c18，柱长为250mm，内径为4.6mm，粒径为5μm；柱温为30～40℃。

7.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述流动相流速为0.9～1.1ml/min，检测波长为250～270nm；进样量为5～15μl；理论板数按丹皮酚峰计算不低于10000。

8.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件对龟甲养阴片的hplc特征图谱进行比较，确定共有特征峰，生成由14个特征峰构成的对照特征图谱，其中，峰1对应原儿茶酸、峰3对应鞣花酸、峰4对应丹酚酸b、峰6对应阿魏酸、峰7对应丹皮酚、峰8对应五味子醇甲。

9.根据权利要求8所述的构建方法，其特征在于，在对照特征图谱中，以丹皮酚峰为参照物峰s峰，计算各特征峰与s峰的相对保留时间，所述相对保留时间应在规定值的±5％之内，所述规定值为：0.11-峰1、0.12-峰2、0.56-峰3、0.72-峰4、0.74-峰5、0.76-峰6、1.00-峰s、1.22-峰8、1.28-峰9、1.31-峰10、1.39-峰11、1.49-峰12、1.51-峰13、1.55-峰14。

技术总结
本发明提供了一种滋补肝肾中成药的HPLC特征图谱的构建方法。本发明对龟甲养阴片HPLC特征图谱构建方法进行了系统的试验研究，建立的方法经精密度、稳定性、重复性等方法学验证，方法重现性好，方法可行。该方法可同时监测多成分，有效控制产品质量。本发明克服了现执行标准中缺少质量检测方法的不足，以及现有技术中检测方法指标针对性强、覆盖面小的片面性，建立的特征图谱可全面反映龟甲养阴片复杂的化学成分及其相对比例，是一种符合中药复方特色的质量控制模式，可有效地表征药品质量。

技术研发人员：田淋淋,吴萍,鄢必新,郭文英,李桂峰,李君海,邢成,肖俊美
受保护的技术使用者：吉林修正药业新药开发有限公司
技术研发日：
技术公布日：2024/1/16