一种免疫磁珠保存液、制备方法及其应用与流程

本发明涉及免疫分析，具体而言，涉及一种免疫磁珠保存液、制备方法及其应用。

背景技术：

1、化学发光免疫分析是将具有高灵敏度的化学发光测定技术与高特异性的免疫反应相结合，用于各种抗原、半抗原、抗体、激素和药物等的检测分析技术。是继放免分析、酶免分析、荧光免疫分析和时间分辨荧光免疫分析之后发展起来的一种超高灵敏度的测定技术。

2、免疫磁珠一般具有超强的顺磁性。在外加电场存在的情况下，免疫磁珠会表现出磁性，并被聚集起来。离开磁场后，他们又能如普通颗粒一般，均匀分散。免疫磁珠的表面一般有丰富的表面活性基团，生物活性分子可吸附或偶联到其表面，从而实现它在细胞分选、核酸分离提取、免疫检测、生物大分子纯化和酶的固定等多个领域的应用。

3、化学发光免疫分析中大量用到免疫磁珠，就是利用免疫磁珠能够结合目标蛋白的特点，使之与特异性抗体牢固结合，成为能捕获特异性抗原的磁珠，将免疫磁珠与待测溶液混合，如有相应抗原存在，免疫磁珠就会将其捕获，由于磁珠流动性好，比表面积大，可以充分暴露配体蛋白，大大增加了捕获效率，形成抗原-免疫磁珠复合物，并在适当的磁场条件下分离出来，达到富集目标抗原的目的。利用磁珠富集、分离的特性，这种方法一般有着极高的灵敏度，可以达到fg/ml。

4、在化学发光免疫分析过程中，免疫磁珠通过表面的活性基团与目标蛋白结合后，需要在储存和运输中保存很长的时间，要求目标蛋白等活性物质保持很长的活性且磁珠具有很好的单分散性。

5、通常冻存是抗体等活性物质有效的保持活性的方式。但是冷冻保存会造成磁珠的相互靠近聚集而团聚，化冻后分散性大大降低，从而使试剂分析性能下降，所以标记目标蛋白后的免疫磁珠不能像抗体一样进行冷冻保存。为避免磁珠冷冻复融导致磁珠分散性差的发生，免疫磁珠通常保存温度是4～8℃，但是在保存温度下，磁珠上偶联的抗体容易出现活性丧失的风险，这严重限制了免疫磁珠的保存期。

6、目标蛋白等活性物质活性容易降低及磁珠不容易保持单分散性而团聚，使得免疫磁珠性能的不稳定，这两方面均会严重阻碍了化学发光免疫检测技术在临床检测中的应用效果和产品推广。

7、本发明的主要目的在于提供一种磁珠保存液、制备方法，以解决现有技术中磁珠标记目标蛋白等活性物质在储存运输过程中稳定性差的问题。该磁珠保存液可以延长磁珠的保存时间，防止磁珠在保存过程中发生聚集，保持磁珠的单分散性，同时保护目标蛋白(抗原或抗体)，延长这些活性物质的活性，使免疫磁珠可以在4℃保存条件下20个月内维持较高的活性。

8、为了实现上述目的，本发明提供了一种磁珠保存液，该磁珠保存液包括碱性缓冲液、高分子聚合物、表面活性剂、螯合剂、蛋白保护剂、小分子封闭剂、防腐剂，保存液的ph为8.5～9.5。

9、现有技术cn 115684581 a(磁珠的保存液及其保存方法)公开了涉及生物医药技术领域，尤其涉及一种磁珠的保存液及其保存方法。可以延长磁珠的保存时间，防止磁珠在保存过程中发生聚集，保持磁珠的单分散性。一种磁珠的保存液，包含：表面活性剂、水溶性盐和抑菌剂。

10、现有技术cn 114397443 a(免疫磁珠的保存液以及免疫磁珠试剂)公开了一种免疫磁珠的保存液，包括稳定剂、增稠剂、防腐剂以及作为溶剂的缓冲液，保存液的ph为6.5～8.5。增稠剂为蛋白胨，蛋白胨的浓度不低于0.2g/ml。现有技术中，蛋白胨虽然也用于免疫磁珠的保存液，但是通常是作为稳定剂存在，且现有技术中保存液内的蛋白胨浓度一般不超过15g/l。本技术中创造性的采用蛋白胨作为增稠剂，利用蛋白胨在2℃～6℃的低温环境凝固的特点，将蛋白胨的浓度设置成不低于0.2g/ml，使得免疫磁珠的保存液可以在2℃～6℃的低温环境下呈半固体状态，从而既可以避免由于干燥导致免疫磁珠的聚集以及免疫配基的失活，又可以使得免疫磁珠充分分散并且不会发生聚集，从而避免出现免疫磁珠结块的现象，可以用于免疫磁珠的较长期保存。制得的免疫磁珠的保存液在取出后，需要对免疫磁珠进行分离和再保存，增加了使用难度和成本。

11、现有技术cn 109725148 a(一种免疫磁珠保存液)公开了一种免疫磁珠保存液，含有缓冲液、惰性蛋白质、甘油、水溶性糖、人工合成高分子聚合物、蛋白稳定剂、还原性物质、氨基酸、螯合剂、血清、表面活性剂和防腐剂。本发明的免疫磁珠保存液，使免疫磁珠可以在4℃保存条件下一年内维持较高的活性，为免疫磁珠在实际检测中的应用提供了保障。

12、上述发明的磁珠的保存液都提及了让免疫磁珠充分分散并且不会发生聚集，从而避免出现免疫磁珠结块的现象，可以用于免疫磁珠的较长期保存，但都没有提及磁珠标记目标蛋白等活性物质后，保护活性物质的稳定性，让活性物质更长久，从而保证磁珠及活性物质一起都稳定，为免疫分析技术提供更好的应用。

13、本发明的主要目的在于提供一种磁珠保存液、制备方法，以解决现有技术中磁珠标记目标蛋白等活性物质在储存运输过程中稳定性差的问题。该磁珠保存液可以延长磁珠的保存时间，防止磁珠在保存过程中发生聚集，保持磁珠的单分散性，同时保护目标蛋白(抗原或抗体)，延长这些活性物质的活性，使免疫磁珠可以在4℃保存条件下20个月内维持较高的活性。

技术实现思路

1、本发明首先提供了为了实现上述目的，本发明提供了一种免疫磁珠保存液，该免疫磁珠保存液包括碱性缓冲液、高分子聚合物、表面活性剂、螯合剂、蛋白保护剂、小分子封闭剂、防腐剂，保存液的ph为8.5～9.5。

2、在一些实例中，所述碱性缓冲液包括tris-盐酸缓冲液、硼酸-硼砂缓冲液中的一种，缓冲液的浓度为10～100mm。

3、在一些实例中，所述高分子聚合物包括聚乙二醇(分子量2万、4万、6万)、聚乙烯醇(pva)和聚乙烯吡咯烷酮(k30、k60、k90)中的一种或多种，所述保存液中高分子聚合物的质量浓度为0.01％～0.1％。

4、在一些实例中，所述表面活性剂包括吐温20、triton x100或np40中的一种或多种，所述保存液中表面活性剂的质量浓度为0.1％～2％。

5、在一些实例中，所述螯合剂包括edta(乙二胺四乙酸)、dtpa(二乙基三胺五乙酸)、三聚磷酸钠、偏硅酸钠中的一种或多种，所述保存液中螯合剂的浓度为10～100mm。

6、在一些实例中，所述蛋白保护剂包括甘油、pmsf蛋白酶抑制剂、高甲氧基果胶、丙二醇藻酸盐、海藻糖、bsa中的一种或多种，所述保存液中蛋白保护剂的浓度为0.1～100mm。

7、在一些实例中，所述小分子封闭剂包括甘氨酸、赖氨酸、酪蛋白水解物的一种或多种，所述保存液中小分子封闭剂的质量浓度为0.1％～2％。

8、在一些实例中，所述防腐剂包括叠氮钠、proclin 300、硫柳汞、氯霉素、四环霉素、万古霉素的一种或多种，所述保存液中防腐剂的质量浓度为0.1％～2％。

9、在一些实例中，所述免疫磁珠保存液为50mm tris-盐酸缓冲液(ph为9.0±0.5)中含有0.05％聚乙烯吡咯烷酮(k90)、0.1％吐温-20、10mm乙二胺四乙酸.二钠、100mm甘油、50mm海藻糖、0.1mm bsa、1％甘氨酸、0.1％叠氮钠。

10、在一些实例中，所述免疫磁珠保存液为为50mm硼酸-硼砂缓冲液(ph为9.0±0.5)中含有0.1％聚乙二醇40000、0.1％乙基苯基聚乙二醇、20mm二乙基三胺五乙酸、50mm甘油、50mm pmsf蛋白酶抑制剂、1％酪蛋白水解物、0.1％叠氮钠、0.1％proclin 300。

11、在一些实例中，所述免疫磁珠保存液为50mm tris-盐酸缓冲液(ph为9.0±0.5)中含有0.01％聚乙烯醇、2％吐温-20、0.1％triton x100、10mm乙二胺四乙酸.二钠、0.1mm高甲氧基果胶、0.1mm bsa、1％甘氨酸、0.5％proclin300。

12、为了实现上述目的，根据本发明的第二个方面，提供了一种免疫磁珠保存液的制备方法，该制备方法包括以下步骤：

13、将上述优选的免疫磁珠保存液中的试剂混匀，定容，采用0.22微米的过滤膜过滤除菌、除去影响磁珠稳定性的不溶物。

14、本发明另一方面还提供免疫磁珠保存液的应用；

15、优选的所述应用为a)延长磁珠的保存时间；或b)防止磁珠在保存过程中发生聚集；或c)保持磁珠的单分散性；或d)保护目标蛋白，延长活性，所述目标蛋白为抗原或抗体。

16、本发明的上述技术方案的有益效果如下：

17、本发明的免疫磁珠保存液可以延长磁珠的保存时间，防止磁珠在保存过程中发生聚集，保持磁珠的单分散性，同时保护目标蛋白(抗原或抗体)，延长这些活性物质的活性，使免疫磁珠可以在4℃保存条件下20个月内维持较高的活性。这两方面的改善均大大促进化学发光免疫检测技术在临床检测中的应用效果和产品推广。