一种基于GC-IMS分析特征气味成分、形性指标鉴别猪牛羊胆汁及其制成的胆南星的方法

本发明涉及一种基于gc-ims分析特征气味成分鉴别猪牛羊胆汁及其制成的胆南星的方法，属于药物检测鉴别领域。

背景技术：

1、动物药来源于动物体，属于天然药物，具有资源丰富，疗效确切等特点，是中药的重要组成部分。动物胆汁更具有活性强、疗效好、副作用小等鲜明特性。是一种历史悠久的传统中药，其性味苦寒、无毒、具有清热解毒、止咳、平喘、利胆明目等功效。其药用价值早在《本草纲目》、《中国大药典》等中草药经典文献中都有记载。其中熊胆、蛇胆、猪胆、鸡胆等更具有活性强，疗效显著，副作用小等特性而广泛用于临床实践中。除了作为药材原料使用外，胆汁也是中药材炮制中常用的辅料，如胆汁炙黄连、胆汁制南星等。由于不同动物来源的胆汁功效成分有区别，为了保证药效的稳定，针对胆汁的来源鉴别，以及不同胆汁的药材炮制品的区分、鉴别尤为重要。

2、目前已有相关文献报道胆汁中的成分，如杨春梅，几种动物胆汁组分的初步分析以及鹅去氧胆酸提取工艺的研究，新疆农业大学，2006年6月，公开了动物胆汁的主要成分，以及常见动物胆汁中分离、提取和纯化鹅去氧胆酸的工艺学研究。申请号：cn201510257048.5，发明名称：一种禽畜类胆粉中胆汁酸类成分的反相薄层色谱鉴别方法，公开了一种禽畜类胆粉中胆汁酸类成分的反相薄层色谱鉴别方法。现有对动物胆汁的鉴别主要集中在单一来源的动物胆汁，且主要围绕其胆汁酸类化学成分。胆汁作为动物来源物质，其腥臭味与其来源也密切相关，但目前对不同来源动物胆汁的挥发性成分的分析研究较少，还未见有以挥发性成分作为胆汁的鉴别指标。

3、胆南星为天南星科植物天南星arisaema erubescens(wall.)schott、异叶天南星a.heterophyllum bl.或东北天南星a.amurense maxim.的干燥块茎与胆汁加工的炮制品，味苦、微辛，性凉，归肺、肝、脾经，具有清热化痰、息风定惊的功效，可用于治疗痰热咳嗽、咯痰黄稠、中风痰迷、癫狂惊痫等症。胆南星的炮制方法记载最早见于宋代《小儿药证直诀》“腊月酿牛胆中，风干百日”，后代多沿用此法，并在其基础上发展为“九转南星”。羊胆汁炮制天南星的方法首次记载于《普济本事方》。建国后，随着对胆南星工艺的研究，猪胆汁逐渐成为主流的生产辅料，在《中药炮制经验集成》中记载，天南星可用猪胆制，此后《中国药典》从1977年版至今收载，猪、牛、羊胆汁均可用于胆南星的生产。

4、外观性状在中药品质鉴别中有重要地位，但因在实际应用中缺乏量化指标而显示出局限性。中药的“辨状论质”是通过对药材的外观性状的观察结果进行分析总结，从而判断药材的内在品质。中药炮制过程中对于气味的判断一般采用“鼻闻、口尝”等方法，主观因素较大，缺少客观的、量化的指标。随着科技发展，中药的性状特征在智能感官系统或分析技术的应用下使得感官评定量化、标准化。谭超群等通过电子鼻技术和ls-svm技术分析不同胆汁发酵的胆南星在不同发酵时间对气味传感器的影响，从而实现对用不同胆汁生产的胆南星区别，但未阐明胆南星中挥发性成分的来源及胆汁与胆南星挥发成分的差异。胆汁作为胆南星的炮制辅料，牛、羊和猪均为偶蹄目，但牛和羊为牛科动物，猪为猪科动物，三种胆汁间气味相差较大，经传统发酵所制的胆南星在气味上是否存在差异尚未可知。

5、申请号：cn201810638465.8，发明名称：一种鉴别猪胆汁炮制的发酵制胆南星和混合蒸制胆南星的方法，鉴别猪胆汁炮制的发酵制胆南星和混合蒸制胆南星的方法，通过猪胆酸(hca)、猪去氧胆酸(hdca)和鹅去氧胆酸(cdca)作为一组标志物，以及甘氨猪去氧胆酸(ghdca)和甘氨鹅去氧胆酸(gcdca)作为另一组标志物，在鉴别猪胆汁炮制的发酵制胆南星和混合蒸制胆南星中的应用。该方法也是仅用于猪汁胆炮制品的鉴别。

6、因此，如何找出一种用于快速鉴别猪牛羊胆汁及其加工的胆南星的方法是我们目前迫切需要解决的问题。

技术实现思路

1、本发明提供了一种快速鉴别猪牛羊胆汁及其加工的胆南星方法。

2、本发明提供了一种基于gc-ims分析特征气味成分鉴别猪牛羊胆汁的方法，它是采用gc-ims检测猪牛羊胆汁中挥发性有机物，通过对待测样品的特征指纹图谱分析，确定标志性挥发性有机物，通过挥发性有机物的浓度判断胆汁类型。

3、其中，所述的gc-ims分析条件为：孵育条件：顶空进样体积200μl，孵育时间15min，孵育温度60℃，孵化转速500r/min，进样针温度85℃；

4、色谱柱类型：mxt-wax(0.53mm×30m，1.0μm)，色谱柱温度60℃，载气/飘移气：高纯氮气(纯度≥99.99％)，载气流速：e1(漂移气流速)为150ml/min，e2(气相载气流速)为初始2ml/min，2min内保持不变；2～10min，e2：2～10ml/min；10～20min,e2：10～100ml/min，20min后一直保持100ml/min直至分析结束；

5、gc-ims检测分析时间：45min。

6、其中，所述的分析方法是将gc-ims三维谱图、相似度分析、pca分析标志性挥发性有机物。

7、其中，所述的猪胆汁中浓度最高的物质有：2-甲基-1-丙醇、2-甲基丙醛、乙酸甲酯、氨、正丙醇和己醛；

8、羊胆汁中浓度最高的物质有：乙酸乙酯、2-甲基丁醛、丁醇、1-戊烯-3-醇、戊醇、辛醛、e-2-庚醛、己醇、壬醛、乙酸、苯甲醛、2-庚酮和庚醛；

9、牛胆汁中浓度最高的物质有：丙酮、2-丁酮、3-甲基-1-丁醇、2-丁醇和乙醛。

10、本发明提供了一种基于gc-ims分析特征气味成分鉴别猪牛羊胆汁炮制的胆南星的方法，它是采用gc-ims检测胆南星中挥发性有机物，通过对待测样品的特征指纹图谱分析，确定标志性挥发性有机物，通过挥发性有机物的浓度判断胆南星的炮制类型。

11、其中，所述的gc-ims分析条件为：孵育条件：顶空进样体积200μl，孵育时间15min，孵育温度60℃，孵化转速500r/min，进样针温度85℃；

12、色谱柱类型：mxt-wax(0.53mm×30m，1.0μm)，色谱柱温度60℃，载气/飘移气：高纯氮气(纯度≥99.99％)，载气流速：e1(漂移气流速)为150ml/min；e2(气相载气流速)为初始2ml/min，2min内保持不变；2～10min，e2：2～10ml/min；10～20min,e2：10～100ml/min，20min后一直保持100ml/min直至分析结束；

13、gc-ims检测分析时间：45min。

14、其中，所述的分析方法是将gc-ims三维谱图、相似度分析、pca分析标志性挥发性有机物。

15、所述的猪胆南星显著高于牛胆南星和羊胆南星的物质有：乙酸甲酯、丁醇、丁酸乙酯、乙酸异丁酯、乙酸丙酯、乙酸异戊酯、乙酸己酯、4-甲基-1-戊醇、乙酸和1-己醇；

16、羊胆南星显著高于猪胆南星和牛胆南星物质有：1-戊醇、1,8-桉叶素、2-甲基丁醛、己醛、2-丁酮、辛醛、1-戊烯-3-醇、戊酸乙酯、e-2-己醛、己酸乙酯、e-2-庚醛和2-庚酮；

17、牛胆南星显著高于猪胆南星和羊胆南星的物质有：2-甲基丙醛、2-丁醇、苯甲醛、壬醛、庚醛和3-羟基-2-丁酮。

18、本发明还提供了一种基于形性指标鉴别猪牛羊胆汁及猪牛羊胆汁炮制的胆南星的方法，它包括如下步骤：

19、a、取待检样品，采用测色仪测定颜色指标l*、a*、b*值；

20、b、将检测的颜色指标值与下表比对，当l*、a*、b*三个值均在限定的范围内，即为相应的胆汁或胆南星炮制品；

21、

22、本发明还提供了一种基于形性指标关联猪牛羊胆汁及猪牛羊胆汁炮制的胆南星的化学指标的方法，它包括下述步骤：

23、a、采用测色仪测定取待检样品的颜色指标l*、a*、b*值；

24、b、通过以下公式，预测样品中挥发性成分的含量：

25、

26、为了对胆南星进行鉴别和质量提升，本发明以不同胆汁及其所制的胆南星为研究对象，采用gc-ims检测其挥发性有机物(vocs)，对比分析各待测样品的差异，研究胆汁与胆南星气味的变化及其内在关系，阐明不同胆汁对其经发酵所制胆南星(气味)的影响，通过对待测样品的特征指纹图谱分析，确定标志性挥发性有机物，通过挥发性有机物的浓度判断胆汁类型，该方法检测的准确性高，同时通过不同胆汁及其所制的胆南星的形性指标检测，达到快速鉴定胆汁及制成的胆南星。