一种用于毒品荧光检测的稀释液及其制备方法和应用与流程

本发明属于毒品检测，涉及一种用于毒品荧光检测的稀释液及其制备方法和应用，尤其涉及用于毛发中毒品荧光检测的稀释液及其制备方法和应用

背景技术：

1、传统的吸毒人员快速检测技术主要采用尿液胶体金法只有约24～48小时。与尿液、血液、唾液等生物检材相比，毛发检材具有性质稳定、取材方便、易于保存、检出时限长、适用范围广、污染机会少等优势。由于尿液中毒品及其代谢物含量非常高，传统的胶体金免疫检测技术就能够达到。但是头发中毒品及其代谢物含量非常低，因此需要使用检测灵敏度更高、抗干扰性更好的技术用于毛发检测。

2、目前毒品检测试纸条通常采用荧光微球标记抗体或抗原，荧光微球是一种功能性微球，是通过化学反应或物理吸附在微球表面标记荧光物质，或者在微球内部包埋或聚合上某种荧光物质，从而使微球具有荧光显示效果；荧光微球外形可为任意形状，以球形为主。目前，荧光微球的种类包括量子点荧光微球、稀土荧光微球、自发光荧光微球等等。荧光微球具有粒度均一、分散性好、发光率高等优点，但其稳定性差，会受到外界环境和介质的影响。在长时间或强光照射下可能会发生光漂白或光解，导致荧光微球的信号衰减。当使用多个不同的荧光染料标记荧光微球时，不同的荧光信号可能会相互干扰或重叠，影响结果的解读和定量分析。目前荧光毒品检测试剂制备工艺中常利用缓冲液或无机盐溶液稀释制备的荧光物标记的抗体或抗原，并进行包被，容易造成检验灵敏度低、特异性差和批间不稳定性，易导致假阴性结果和假阳性结果，如cn110850095a公开一种毒品痕量检测试纸条及其制备方法与试剂盒，使时间分辨荧光微球标记的特异性单克隆抗体均匀分散在磷酸盐缓冲液中。

3、综上所述，开发新型的稀释液，在检测试纸条制备过程中荧光标记结束后用于复溶和稀释，以提高荧光的信号的稳定性和均一性，对于毒品荧光检测领域具有重要意义。

技术实现思路

1、针对现有技术的不足和实际需求，一种用于毒品荧光检测的稀释液及其制备方法和应用，尤其涉及用于毛发中毒品荧光检测的稀释液及其制备方法和应用，以期提高检测稳定性和准确性。

2、为达上述目的，本发明采用以下技术方案：

3、第一方面，本发明提供一种用于毒品荧光检测的稀释液，所述稀释液含有缓冲剂、稳定剂、无机盐和分散剂；所述缓冲剂包括三羟甲基氨基甲烷、磷酸盐、碳酸盐中任意一种或至少两种的组合；所述稳定剂包括牛血清蛋白、酪蛋白或peg中任意一种或至少两种的组合；所述分散剂包括聚乙烯醇、聚乙二醇或月桂醇中任意一种或至少两种的组合。

4、本发明中，设计特定的稀释液配方，含有缓冲剂、稳定剂、无机盐和分散剂，在检测试纸结合垫(或荧光垫)包被过程中，用于稀释荧光标记物标记的抗体或抗原，缓冲剂和无机盐通过调节体系离子浓度为荧光标记物提供合适的离子环境；稳定剂为增加荧光标记物的稳定性，减少试剂的结果差异；分散剂为防止荧光标记物颗粒沉积或析出；提高毛发毒品荧光试剂的稳定性和均一性，不影响其特异性，从而提高检测的稳定性和准确性。

5、优选地，所述无机盐包括氯化钠、氯化钾或硼酸钠中任意一种或至少两种的组合。

6、优选地，所述稀释液中缓冲剂的质量百分比为1.5％～3.5％，包括但不限于1.6％、1.7％、1.8％、2％、2.5％、2.8％、3％、3.2％或3.4％。

7、优选地，所述稀释液中稳定剂的质量百分比为0.5％～2％，包括但不限于0.6％、0.7％、0.8％、1％、1.5％、1.6％、1.8％或1.9％。

8、优选地，所述稀释液中无机盐的质量百分比为0.1％～0.3％，包括但不限于0.15％、0.18％、0.2％、0.25％、0.28％或0.29％。

9、优选地，所述稀释液中分散剂的质量百分比为0.4％～0.8％，包括但不限于0.5％、0.6％或0.7％。

10、优选地，所述聚乙烯醇包括pva-40或pva-10。

11、优选地，所述稀释液中还含有防腐剂和/或水。

12、优选地，所述防腐剂包括proclin300、叠氮钠中任意一种或至少两种的组合。

13、优选地，所述稀释液中防腐剂的质量百分比为0.5％～10％，包括但不限于0.6％、0.7％、0.8％、1％、1.5％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％或9％等。

14、优选地，所述用于毒品荧光检测的稀释液按质量百分比为100％计含有1.5％～3.5％缓冲剂、0.5％～2％稳定剂、0.1％～0.3％无机盐、0.4％～0.8％分散剂和0.5％～10％防腐剂，余量为水。

15、第二方面，本发明提供第一方面所述的用于毒品荧光检测的稀释液的制备方法，所述制备方法包括：

16、将所述缓冲剂、稳定剂、无机盐和分散剂混合，得到所述稀释液。

17、第三方面，本发明提供第一方面所述的用于毒品荧光检测的稀释液在制备检测毒品的产品中的应用。

18、第四方面，本发明提供一种制备毒品荧光检测试纸条的方法，所述方法包括：

19、使用第一方面所述的用于毒品荧光检测的稀释液与荧光标记物标记的抗体混合进行稀释，并包被在结合垫上；将毒品的抗原溶液分别划线于检测膜上，形成对应于不同毒品的检测线；将样品垫、结合垫(或荧光垫)、检测膜和吸收垫从基底的一端至另一端顺次粘附在基底的表面上，得到所述毒品荧光检测试纸条。

20、本发明中，设计特定的稀释液配方，其可有效应用的制备毒品荧光检测试纸中，在检测试纸结合垫(或荧光垫)包被过程中，用于稀释荧光标记物标记的抗体或抗原，显著提高试纸的检测稳定性和准确性。

21、优选地，所述荧光标记物包括荧光微球或磁珠微球。

22、优选地，所述稀释的稀释倍数为5～20倍。

23、优选地，所述毒品包括吗啡、苯丙胺类、氯胺酮、四氢大麻酸、大麻合成素或可卡因中的任意一种或或至少两种的组合。

24、优选地，所述制备毒品荧光检测试纸条的方法包括：

25、(一)样品垫处理液的配制：配方如下：0.5％～5％的四硼酸钠，0.1％～10％的s17，0.1％～1％的酪蛋白，0.1％～1％的胆酸钠，0.5％～10％的proclin300；

26、(二)样品垫处理：将样品垫处理液充分溶解搅拌均匀后喷洒于大小合适的玻纤上，置于40～50℃的烘箱中干燥12～24h，取出密封干燥储存；

27、(三)荧光垫制备：使用所述稀释液将荧光微球标记的单克隆抗体和标记的兔igg分别按照20％～60％和5％～20％的比例进行稀释，加入0.1～0.5g/ml的蔗糖和0.01～0.1g/ml的海藻糖，配置充分溶解均匀后以喷量为1.0μl/cm喷涂在空白垫上，后置于30～40℃烘箱中干燥12～24h后避光密封储存；

28、(四)包被膜制备：采用包被缓冲液将毒品-抗原血红蛋白偶联物和羊抗兔igg采用pbs稀释液稀释成0.1～1.0mg/ml，羊抗兔igg中加入考马斯亮蓝，其浓度配置成0.1～1mg/ml，配置完成后将以上羊抗兔igg稀释液和毒品-抗原稀释液以1.0μl/cm的包被量分别包被于硝酸纤维素膜(nc膜)上的质控线和测试线，后置于40～50℃烘箱中干燥20～30h；

29、(五)组装：在pvc底板上依次黏贴样品垫、荧光垫、nc膜、吸水垫，吸水垫粘贴在硝酸纤维素膜的上部，产生1～2mm的部分重叠，硝酸纤维素膜的下端置于荧光垫的下方，两者之间存在1～2mm的部分重叠，荧光垫的另一端与样品垫重叠1～2mm，样品垫另一端与pvc衬板对齐。

30、第五方面，本发明提供第一方面所述的用于毒品荧光检测的稀释液和第四方面所述的一种制备毒品荧光检测试纸条的方法在毒品检测中的应用。

31、与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

32、本发明创造性地发现缓冲剂、稳定剂、无机盐和分散剂四种成分组成的稀释液能对毒品检测试剂产品在特异性和均一性上有很好的提升，增加产品的稳定性减少产品间的差异性，提高的了检测的准确性，适用于公共场所的快速筛查，此外，各组分较安全，不会造成环境污染。